一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株及其应用制造技术

一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法，将含前导肽的脂肪酶基因pro‑rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含2拷贝目的基因的表达载体pPICZα+Mα‑2prorml。将含有2拷贝的目的基因的表达载体分别转到巴斯德毕赤酵母中并筛选获得含4拷贝数目的基因的能够表达Pro‑RML的基因工程菌mα‑4pRML‑X33。一种制备米黑根毛霉脂肪酶酶粉的方法，采用过表达转录调控因子HAC1的4拷贝脂肪酶基因的毕赤酵母菌株进行发酵，酶活达到1078U/mL。将该菌株产生的发酵液用丙酮制备酶粉。当发酵液pH调整到4.0，丙酮和发酵液的体积比为2:1，40mL发酵液获得酶粉的重量为1.0116g，酶粉的比活为7936.5U/g，酶粉的回收率为37.935％。为该酶的储存、运输和使用提供新的方式。

An engineering strain for producing Mucor oryzae lipase powder and its application

【技术实现步骤摘要】
一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株及其应用
本专利技术涉及分子生物学、基因工程领域，具体涉及一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株及其应用。
技术介绍
脂肪酶(EC3.1.1.3)是可以水解三酰甘油的一类酶，可催化多种化学反应如：水解、酯化、转酯化、氨解等，且具有反应条件温和、专一性强、无污染等优点被广泛的应用于食品、医药、化妆品、石油等行业，被称之为第三大工业用酶。酶粉是常用的保存酶的形式之一，具有方便保存、运输和稳定性好等优点。米黑根毛霉脂肪酶是一种1，3位置专一性的脂肪酶，可被用于制备奶味香精、生产生物柴油等多个方面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高产、稳定的生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株及其应用。作为本专利技术的第一方面，提供了一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法，包括步骤，A1：将含前导肽的脂肪酶基因pro-rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含2拷贝目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml；A2：将含有2拷贝的目的基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤，/nA1：将含前导肽的脂肪酶基因pro-rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含2拷贝目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml；/nA2：将含有2拷贝的目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml分别转到巴斯德毕赤酵母中；/nA3：筛选含4拷贝数目的基因的能够表达Pro-RML的巴斯德毕赤酵母，获得生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤，
A1：将含前导肽的脂肪酶基因pro-rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含2拷贝目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml；
A2：将含有2拷贝的目的基因的表达载体pPICZα+Mα-2prorml分别转到巴斯德毕赤酵母中；
A3：筛选含4拷贝数目的基因的能够表达Pro-RML的巴斯德毕赤酵母，获得生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株。


2.由权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法所制备的生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株。


3.一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法，其特征在于，包括步骤，
B1：培养权利要求2所述的工程菌株；
B2：经诱导表达获得含米黑根毛霉脂肪酶的发酵液；
B3：从发酵液中分离出米黑根毛霉脂肪酶，经干燥获得米黑根毛霉脂肪酶酶粉。


4.如权利要求3所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉方法，其特征在于，所述步骤B2中的诱导条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄金金，黄蓉，马艳，郑维发，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32