一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的工程菌株及其构建方法技术

一种生产米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶mRML酶粉的工程菌株及其构建方法，将含前导肽的脂肪酶基因mrml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZα+Mα上构建得到含目的基因的表达载体pPICZαA‑mrml，将含有目的基因的表达载体转到巴斯德毕赤酵母X‑33中并筛选获得含mrml基因的能够表达mRML的工程菌zα‑mRML‑X33。将上述工程菌株进行摇瓶发酵，胞外酶活为98U/mL。将该菌株产生的发酵液用丙酮制备酶粉，当发酵液pH调整到5.0‑7.0，丙酮和发酵液的体积比为2:1时，酶活回收率保持在70％以上。当发酵液pH为7.0时，酶回收率最高，获得酶粉的重量为1.373g，酶粉的比活为3367U/g，酶粉的回收率为94.4％。为该酶的储存、运输和使用提供新的方式。

An engineering strain for producing lipase mrml from Mucor oryzae and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的工程菌株及其构建方法
本专利技术涉及分子生物学、基因工程领域，具体涉及一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的工程菌株及其构建方法。
技术介绍
脂肪酶(EC3.1.1.3)是可以水解三酰甘油的一类酶，可催化多种化学反应如：水解、酯化、转酯化、氨解等，且具有反应条件温和、专一性强、无污染等优点被广泛的应用于食品、医药、化妆品、石油等行业，被称之为第三大工业用酶。酶粉是常用的保存酶的形式之一，具有方便保存、运输和稳定性好等优点。米黑根毛霉脂肪酶是一种1，3位置专一性的脂肪酶，可被用于制备奶味香精、生产生物柴油等多个方面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高产、稳定的生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的工程菌株及其构建方法。作为本专利技术的第一方面，提供了一种生产米黑根毛霉脂肪酶酶粉的工程菌株的构建方法，包括步骤，一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法，包括步骤：S1：将含前导肽的脂肪酶基因mrml插入到表达载体上，构建得到含目的基因的表达载体；...

【技术保护点】
1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉工程菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤：/nS1：将含前导肽的脂肪酶基因mrml插入到表达载体上，构建得到含目的基因的表达载体；/nS2：将含有目的基因的表达载体转到宿主细胞中；/nS3：筛选获得含mrml基因的能够表达mRML的工程菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉工程菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤：
S1：将含前导肽的脂肪酶基因mrml插入到表达载体上，构建得到含目的基因的表达载体；
S2：将含有目的基因的表达载体转到宿主细胞中；
S3：筛选获得含mrml基因的能够表达mRML的工程菌株。


2.根据权利要求1所述的一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉工程菌株的构建方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄金金，陈凌霄，赵庆伊，郑维发，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32