一种液质联用检测唾液中司来吉兰及其代谢物的方法技术

本发明专利技术属于药物分析学领域，涉及一种液质联用检测方法，特别涉及一种唾液中司来吉兰及其代谢物去甲司来吉兰、R‑甲基苯丙胺、R‑苯丙胺的液质联用检测方法。本发明专利技术的检测方法中，高效液相色谱采用手性色谱柱分析，甲醇、冰醋酸、氨水为流动相，等度洗脱；根据样品的保留时间、质谱信息进行定性分析，根据其峰面积与内标峰面积比值进行定量分析。本发明专利技术所述液质联用检测方法具有高速、灵敏、重现性好等优点。

A method for the determination of selegiline and its metabolites in saliva by LC-MS

【技术实现步骤摘要】
一种液质联用检测唾液中司来吉兰及其代谢物的方法
本专利技术属于药物分析学领域，涉及一种液质联用检测方法，具体涉及一种液质联用检测唾液中司来吉兰及其代谢物的方法，特别涉及唾液中司来吉兰及其代谢物去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺的液质联用检测方法。
技术介绍
现有技术公开了司来吉兰为单胺氧化酶B抑制剂，通常临床实践中用于治疗帕金森综合征及其他神经失调症。研究显示，司来吉兰在肝脏中主要经P450酶代谢为去甲司来吉兰，R-甲基苯丙胺和R-苯丙胺，有研究报道公开了有关血液、尿液等生物样本中司来吉兰及其代谢物的检测方法，包括液相色谱法、液质联用、气质联用等；实践显示，上述有关血液、尿液等生物样本中司来吉兰及其代谢物的检测方法在某些特定情况尚不能满足现场检测的需要。迄今，尚未见有从唾液中检测司来吉兰及其代谢物的方法的报道。唾液样本获取方便且无创，在法庭科学和临床应用中常作为血液和尿液的替代检测方法；液质联用技术具有高效液相色谱的分离能力，又具备质谱的高灵敏度和高专属性的检测特点，可一定程度解决生物样本中药物浓度低、内源性干扰物质多的问题。基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供一种取材方便且快速、准确的液质联用检测唾液中司来吉兰及其代谢物的方法，尤其是基于液质联用的唾液样品中检测司来吉兰及其代谢物去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺的方法，本方法能为相关临床研究提供新的可靠分析手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于基于现有技术的现状及缺陷，提供一种液质联用检测唾液中司来吉兰及其代谢物的方法，尤其是唾液中司来吉兰及其代谢物去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺的液质联用检测方法；该检测方法取材方便，快速、准确、灵敏度高。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：本专利技术的检测方法，以高效液相二级质谱仪为检测仪器，高效液相色谱采用手性色谱柱分析，甲醇、冰醋酸、氨水为流动相，等度洗脱；质谱条件为正离子模式(ESI+)，离子源温度500℃，源喷射电压5500V，188.0→91.0/119.0、174.0→91.0/119.0、150.0→91.0/119.0、136.0→91.0/119.0作为定量/定性离子对。采用内标物为4-苯基丁胺的内标法，检测唾液为待测物中司来吉兰及其代谢物的药物浓度替代作为血液和尿液的所述唾液样本获取方便且无创，在法庭科学和临床应用中常，唾液中药物浓度与血液中具有一定相关性，能反映药物在体内的情况；更具体的，本专利技术的一种唾液中司来吉兰及其代谢物的液质联用检测方法，其包括：以高效液相二级质谱仪为检测仪器，高效液相色谱采用手性色谱柱分析，色谱柱为万古霉素键合相，5μm粒径，2.1×250mm规格；流动相为V(甲醇)∶V(冰醋酸)∶V(氨水)＝1000∶1∶0.2，等度洗脱，流速为0.33ml/min，柱温25℃；质谱条件为离子源温度为500℃，源喷射电压为5500V，气帘气25psi，离子源气1为45psi，离子源气2为45psi；选择两对离子对188.0→91.0/119.0，174.0→91.0/119.0，150.0→91.0/119.0，136.0→91.0/119.0分别对司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺进行定性，其中188.0→91.0，174.0→91.0，150.0→91.0，136.0→91.0作为定量离子对；本专利技术中，所述司来吉兰其代谢物为去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺；本专利技术中，所述质谱仪为二级质谱仪；其中，所述二级质谱可选择母离子进一步电离破碎后检测，相比一级质谱而言，二级质谱具有更高的专属性；本专利技术中，所述方法为内标法，内标物为4-苯基丁胺；所述内标法可减少样品预处理过程中造成的操作误差，测定结果更加准确；其中，所述4-苯基丁胺与司来吉兰及代谢物结构类似，具有相似的理化性质，保证内标法的准确性；本专利技术中，所述内标物选择离子对150.0→91.0进行定量；选择所述离子对进行定量，保证高专属性和高灵敏度；本专利技术中，待测物为唾液；所述唾液样本获取方便且无创，在法庭科学和临床应用中常作为血液和尿液的替代检测方法，唾液中药物浓度与血液中药物浓度具有一定相关性，能反映药物在体内的情况；本专利技术中，所述待测物前处理方法为液液萃取法；液液萃取法可快捷有效地从唾液样品中提取出司来吉兰及其代谢物。本专利技术所述液质联用检测方法的有益之处在于：液质联用兼具色谱的高分力度和质谱的高专属性、高灵敏度的特点，进而实现快速、准确地对唾液样品中司来吉兰及其代谢物去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺定量研究；应用所述内标物4-苯基丁胺可降低基质干扰，减少操作误差对测定结果的影响，进一步提高检测方法的准确度和精密度；液液萃取可快速、高效、低成本地对唾液样品中分析物进行提取浓缩，提高检测灵敏度。附图说明图1是唾液样品中司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺色谱图，其中，a：空白唾液中提取离子对188.0→91.0，174.0→91.0，150.0→91.0，136.0→91.0，150.0→91.0色谱图；b：唾液中添加司来吉兰及、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺、内标(4-苯基丁胺)标准品提取离子对188.0→91.0，174.0→91.0，150.0→91.0，136.0→91.0，150.0→91.0色谱图；c：实际服用司来吉兰志愿者唾液样品中提取离子对188.0→91.0，174.0→91.0，150.0→91.0，136.0→91.0，150.0→91.0色谱图。图2是司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺标准曲线。具体实施方式以下结合附图和实施例对本专利技术做进一步的详细描述。实施例11.仪器和试药1)分析仪器6500三重四级杆线性离子阱复合质谱系统(美国ABSCIEX公司)，配ESI电喷雾离子源，分析软件为Analyst1.6.3数据处理系统；SymbiosisPharmaSystem液相系统(荷兰SparkHolland公司)；分析软件为Pico1.2.0.0(荷兰SparkHolland公司)；数据处理软件为MultiQuant3.0.2(美国ABSCIEX公司)。2)试验药品司来吉兰购自英国Abcam公司；去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺均购自美国Cerilliant公司；内标4-苯基丙胺购自中国药品生物制品检定所；甲醇为美国Sigma-Aldrich公司生产的色谱纯试剂，氨水(25％)购自中国阿拉丁试剂公司，乙酸(99.8％)购自德国CNW公司，乙醚为上海凌峰化学试剂有限公司的分析纯试剂，纯水为Millipore去离子水。2.试验方法与结果1)含司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺的唾液样品预处理0.1mL唾液样品，0.5mL的硼酸缓冲液(pH9.2)，10μL的IS工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种唾液中司来吉兰及其代谢物的液质联用检测方法，其特征在于，其包括，以高效液相质谱仪为检测仪器，高效液相色谱采用手性色谱柱分析，色谱柱为万古霉素键合相，5μm粒径，2.1×250mm规格；流动相为V(甲醇)∶V(冰醋酸)∶V(氨水)＝1000∶1∶0.2，等度洗脱，流速为0.33ml/min，柱温25℃；质谱条件为离子源温度为500℃，源喷射电压为5500V，气帘气25psi，离子源气1为45psi，离子源气2为45psi；选择两对离子对188.0→91.0/119.0，174.0→91.0/119.0，150.0→91.0/119.0，136.0→91.0/119.0分别对司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺进行定性，其中188.0→91.0，174.0→91.0，150.0→91.0，136.0→91.0作为定量离子对。/n

【技术特征摘要】
1.一种唾液中司来吉兰及其代谢物的液质联用检测方法，其特征在于，其包括，以高效液相质谱仪为检测仪器，高效液相色谱采用手性色谱柱分析，色谱柱为万古霉素键合相，5μm粒径，2.1×250mm规格；流动相为V(甲醇)∶V(冰醋酸)∶V(氨水)＝1000∶1∶0.2，等度洗脱，流速为0.33ml/min，柱温25℃；质谱条件为离子源温度为500℃，源喷射电压为5500V，气帘气25psi，离子源气1为45psi，离子源气2为45psi；选择两对离子对188.0→91.0/119.0，174.0→91.0/119.0，150.0→91.0/119.0，136.0→91.0/119.0分别对司来吉兰、去甲司来吉兰、R-甲基苯丙胺、R-苯丙胺进行定性，其中188....

【专利技术属性】
技术研发人员：段更利，徐琛，陈丽竹，郁颖佳，江洁冰，汪洋，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31