一种外泌体冻干粉的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉，所得外泌体冻干粉蛋白活性可以保持90％以上，可冷藏或是室温保存1~2年，整个生产周期仅需要15~25小时，极大改善保存条件的要求同时便于运输；本发明专利技术一种外泌体冻干粉的应用，在促血管形成、促进细胞新生及免疫调节方面有重要作用；将外泌体冻干粉应用在美容行业，有效与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞的营养代谢，减少皮肤受到紫外线、自由基等侵害，减少黑色素的生成，促使真皮层胶原细胞的增生，具有抚平细纹，延缓皮肤老化、美白肌肤的效果。

Preparation and application of exosomes lyophilized powder

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体冻干粉的制备方法及其应用
本专利技术属于生物医药制备
，具体涉及一种外泌体冻干粉的制备方法及其应用。
技术介绍
外泌体（exosome，Exo）是细胞向胞外分泌的囊泡类小体，直径为30nm~150nm，具有典型的脂质双分子层膜结构，存在于细胞培养上清液、血浆、血清、唾液、尿液、羊水其它生物体液中，在机体多种生理病理过程中发挥重要作用，是近些年来生物医学领域研究的热点问题。目前干细胞广泛应用于组织修复等领域。与干细胞比较，作为其旁分泌物的干细胞外泌体具有更稳定的生物特性，有研究表明外泌体在-80℃保存2年仍能保持其生物学功能。近期研究发现，干细胞来源的外泌体可以有效转运mRNA、microRNA及蛋白质等生物活性物质，具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能，在调控组织再生方面存在良好的临床应用前景，目前国内鲜有将外泌体应用在生物美容领域。外泌体提取液以液态形式保存的保质期非常短，而且保存条件非常苛刻，一般在4℃下只能保存2天左右，-20℃冷冻的条件下也只能保存半年左右，极大地限制了外泌体的应用。因此，如何方便的保存外泌体，且保持其生物活性及稳定性，同时也方便运输是亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体制成冻干粉，提高外泌体的生物活性及稳定性，能够在冷藏或者常温下保存较长时间，且方便运输；本专利技术的目的之二在于提供一种外泌体冻干粉的应用，将外泌体冻干粉应用在美容行业，实现美白、抗衰的效果。本专利技术所采用的技术方案是，一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉。本专利技术的特点还在于：混合液由以下重量份数的组分制成：外泌体提取液40~50份、保护剂8~10份、添加剂0~2份和超纯水38~52份。保护剂为多元醇；所述添加剂为聚合物、糖中的至少一种。多元醇为山梨醇、甘露醇中的至少一种。聚合物为右旋糖苷、聚乙二醇中的至少一种；所述糖为乳糖、海藻糖中的至少一种。预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为2~3h。加强预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为1~2h。预抽真空温度为-40~-50℃，时间为0.5~1h真空度为15Pa。升华干燥包含三个阶段，其中，第一阶段的温度为-15℃~-10℃，时间为6~8h，真空度为15Pa；第二阶段的温度为-5℃~0℃，时间为1~3h，真空度为5Pa；第三阶段的温度为0℃~10℃，时间为1~2h，真空度为0.1Pa；解析干燥的温度为30℃~40℃，时间为3~6h，真空度为20Pa。本专利技术所采用的另一个技术方案是，一种外泌体冻干粉的应用，具体按照以下步骤实施：步骤1、制备透明质酸原液：称取0.1~0.2份透明质酸钠、0.05~0.1份水解透明质酸钠和99.5~99.85份超纯水，在80℃~85℃下充分搅拌溶解，冷却至35℃以下，灌装，在121℃下高压蒸汽灭菌5min~20min，冷却，即得到透明质酸原液；步骤2、称取20~30份步骤1所得透明质酸原液，倒入0.5~1份外泌体冻干粉中，摇晃至完全溶解，得到外泌体精华液，可通过微针导入或者直接涂抹于面部。本专利技术的有益效果在于：1.本专利技术外泌体冻干粉的制备方法，将保护剂与外泌体提取液混合后依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，所得外泌体冻干粉蛋白活性可以保持90％以上，可冷藏或是室温保存1~2年，整个生产周期仅需要15~25小时，极大改善保存条件的要求同时便于运输；2.本专利技术外泌体冻干粉的应用，在促血管形成、促进细胞新生及免疫调节方面有重要作用；将外泌体冻干粉应用在美容行业，有效与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞的营养代谢，减少皮肤受到紫外线、自由基等侵害，减少黑色素的生成，促使真皮层胶原细胞的增生，具有抚平细纹，延缓皮肤老化、美白肌肤的效果。附图说明图1为本专利技术实施例1提供的冻干曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例和附图说明，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术所采用的技术方案是，一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，混合液由以下重量份数的组分制成：外泌体提取液40~50份、保护剂8~10份、添加剂0~2份和超纯水38~52份；其中，保护剂为多元醇；所述添加剂为聚合物、糖中的至少一种；多元醇为山梨醇、甘露醇中的至少一种；聚合物为右旋糖苷、聚乙二醇中的至少一种；糖为乳糖、海藻糖中的至少一种；将混合液依次经过预冻：温度为-40~-50℃、冷冻时间为2~3h；加强预冻：温度为-40~-50℃、冷冻时间为1~2h；预抽真空：温度为-40~-50℃、时间为0.5~1h、真空度为15Pa；升华干燥：包含三个阶段，第一阶段的温度为-15℃~-10℃，时间为6~8h，真空度为15Pa；第二阶段的温度为-5℃~0℃，时间为1~3h，真空度为5Pa；第三阶段的温度为0℃~10℃，时间为1~2h，真空度为0.1Pa；解析干燥：温度为30℃~40℃，时间为3~6h，真空度为20Pa，得到外泌体冻干粉；外泌体冻干粉的应用，具体按照以下步骤实施：步骤1、制备透明质酸原液：称取0.1~0.2份透明质酸钠、0.05~0.1份水解透明质酸钠、99.5~99.85份超纯水，在80~85℃下充分搅拌溶解，冷却至35℃以下，灌装，在121℃下高压蒸汽灭菌5min~20min，冷却，得到透明质酸原液；步骤2、称取20~30份步骤1所得透明质酸原液，倒入0.5~1份外泌体冻干粉中，摇晃至完全溶解，得到外泌体精华液，可通过微针导入或者直接涂抹于面部。外泌体是细胞间信息交流的重要载体,外泌体特性与其来源的细胞有关，因此脐带间充质干细胞外泌体的功能与其干细胞的功能密切相关，脐带间充质干细胞外泌体能够影响皮肤细胞向年轻、健康状态发展。高活性的外泌体，在促血管形成、促进细胞新生及免疫调节方面有重要作用，可以有效的与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞的营养代谢，预防皮肤受到紫外线、自由基等侵害，减少黑色素的生成、还可以促使真皮层胶原细胞的增生，对术后肌肤可加速修复，对一般肌肤并具有抚平细纹，延缓皮肤老化、美白肌肤等功能。包含脐带间充质干细胞外泌体提取液，可以通过脐带间充质干细胞进行培养，收集培养液后对培养液进行分离提纯处理后而得到。外泌体的冷冻干燥过程是一个多步骤过程，会产生低温、冻结和脱水等多种效应，因此需要有效、严格的控制冷冻条件；冻结效应包括：1、外泌体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉。


2.根据权利要求1所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述混合液由以下重量份数的组分制成：外泌体提取液40~50份、保护剂8~10份、添加剂0~2份和超纯水38~52份。


3.根据权利要求1或2所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述保护剂为多元醇；所述添加剂为聚合物、糖中的至少一种。


4.根据权利要求3所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述多元醇为山梨醇、甘露醇中的至少一种。


5.根据权利要求3所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述聚合物为右旋糖苷、聚乙二醇中的至少一种；所述糖为乳糖、海藻糖中的至少一种。


6.根据权利要求1~5任一项所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为2~3h。


7.根据权利要求1~5任一项所述的外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述加强预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为1~2h。

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【专利技术属性】
技术研发人员：谌智鑫，
申请(专利权)人：陕西博鸿生物科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61