一种测定叶黄素成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定叶黄素成分的方法，其特征在于，该方法采用高效液相色谱检测，其中，色谱条件包括：以YMC Carotenoid C30为色谱柱；以甲醇/水为流动相A，甲基叔丁基醚为流动相B；洗脱程序为0min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例为88～100:12～0。本发明专利技术包括以高活性成分全反式叶黄素为检测指标，可以更真实有效地评价叶黄素类产品的质量，所用的色谱条件可以实现全反式叶黄素及其主要的顺式异构体及同分异构体的有效分离，而且还能对全反式叶黄素进行准确定量。

A method for the determination of lutein

【技术实现步骤摘要】
一种测定叶黄素成分的方法
本专利技术涉及分析化学
，特别涉及一种一种测定叶黄素成分的方法。
技术介绍
叶黄素(lutein)是一种属于类胡萝卜素的黄色物质，广泛存在自然界中，在人体内，存在于血浆和眼睛的黄斑区，能够大量吸收蓝光，避免视网膜的光氧化损伤，同时作为一种抗氧化剂，能够清除自由基，保护视神经免受自由基的损害，因此被广泛应用于各种保健食品、食品及药品中。叶黄素的分子结构因具有多个共轭双键结构，易受光、氧、高温等因素的影响，在理论上可以存在多个异构体，包括顺式异构及其同分异构玉米黄质等。在生物体内，不同异构体的生物活性不同，反式构象的生物活性也较顺式构象高很多，导致其生物学功能或效价差异显著，一旦叶黄素在制备和应用的过程中受到光照、加热、氧气等因素的影响，则不可避免地影响以叶黄素为主要活性成分的产品的质量。目前很少有人监测在叶黄素提取、制剂过程中顺式异构体的变化，特别是以叶黄素为原料的保健食品及食品普遍以总叶黄素含量的高低来评价产品的质量，使得产品的质量难以得到保障。现有的国家标准以纯度为总叶黄素含量的对照品，以反式叶黄素及其顺式异构体及同分异构体的总和作为定量指标，并且反式叶黄素及其顺式异构体及同分异构体未得到理想的分离，见图1，在其异构化的标准溶液的色谱图中，只可见三个色谱峰，并未见理论上存在或有关文献的多个顺式异构体及同分异构体，使得现有方法对叶黄素质量监控有很大的局限性。不仅如此，标准中该供试品制备方法相当繁琐，因而增加了叶黄素质量控制的成本。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提出一种以叶黄素为原料的保健食品、食品、药品及叶黄素原料中全反式叶黄素及异构体的定性或定量方法。具体地，本专利技术提出了一种测定叶黄素成分的方法，该方法采用高效液相色谱检测，其中，色谱条件包括：以YMCCarotenoidC30为色谱柱；以甲醇/水为流动相A，甲基叔丁基醚为流动相B；洗脱程序为0min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例为88～100:12～0。优选地，甲醇/水的比例为92～100:8～0；更优选地，甲醇/水的比例为95:5。进一步地，所述流动相A和/或所述流动相B中包含2，6-二叔丁基对甲酚。优选地，所述2，6-二叔丁基对甲酚的浓度为0.1％。进一步地，所述色谱条件包括：流速为0.7mL/min～1.1mL/min；柱温25℃～40℃。进一步地，前述测定叶黄素成分的方法中，色谱条件包括：以规格为250mm×4.6mm,5μm的YMCCarotenoidC30为色谱柱；以含0.1％的2，6-二叔丁基对甲酚、比例为95:5的甲醇/水溶液为流动相A，以甲基叔丁基醚为流动相B，洗脱程序为0min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；流速为0.8mL/min，柱温为30℃，检测波长为445nm。可选地，如前所述叶黄素成分包括但不限于全反式叶黄素。本专利技术还提出一种检测叶黄素原料(如：叶黄素微粒)或含叶黄素的样品的方法，其特征在于，该方法包括：供试品溶液的制备：将叶黄素微粒或含叶黄素的样品研细，取粉末置于容量瓶中，加入水，于室温下超声处理，再加入含BHT的无水乙醇，超声处理，冷却至室温，定容；上述供试品溶液用前述任一一种测定叶黄素成分的方法进行检测。具体地，供试品溶液的制备包括：取叶黄素微粒或含叶黄素的样品，研细，取粉末约300mg，精密称定，置于100mL棕色容量瓶中，加入水5mL，于室温下超声处理20min，再加入含0.1％BHT的无水乙醇至接近刻度，超声处理5min，冷却至室温，用含0.1％BHT的无水乙醇定容至刻度，摇匀，离心，即得。(叶黄素微囊需再精密量取1mL至10mL棕色容量瓶中，0.1％BHT的无水乙醇定容至刻度)。更进一步地，前述检测叶黄素微粒或含叶黄素的样品的方法包括：对照品溶液的制备：取叶黄素对照品，加含BHT的无水乙醇制成含叶黄素的储备液，利用该储备液配制各浓度的对照品溶液；供试品溶液的制备：将叶黄素微粒或含叶黄素的样品研细，取粉末置于容量瓶中，加入水，于室温下超声处理，再加入含BHT的无水乙醇，超声处理，冷却至室温，定容；上述对照品溶液和供试品溶液用权利要求1-8任一所述方法进行检测。据此可建立对照品的标准曲线，从而根据供试品检测结果计算有效成分的含量。更具体地，所述对照品溶液可以按如下方式配制：取叶黄素对照品适量，精密称定，加入含0.1％BHT(2，6-二叔丁基对甲酚)的无水乙醇制得每1mL含叶黄素100μg的对照品储备液；分别精密量取该储备液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，加入0.1％BHT的无水乙醇稀释成浓度分别为2、4、8、12、16、20μg/mL的系列浓度的对照品溶液。本专利技术提供的叶黄素各成分的定性或定量的分析方法，具有如下优点：1.本方法包括以高活性成分全反式叶黄素为检测指标，可以更真实有效地评价叶黄素类产品的质量。2.本方法的色谱条件可以实现全反式叶黄素及其主要的顺式异构体及同分异构体的有效分离，而且还能对全反式叶黄素进行准确定量。3.本方法通过对照品对比、化合物的紫外光谱特性等对叶黄素及各异构体进行定性，检出多个化合物。4.供试品处理方法采用水和无水乙醇提取的方式，操作简便，溶剂经济绿色安全。5.本方法经过系统的方法学验证，本法简单快捷，专属性好，结果准确，重复性好，具有一定的推广价值。附图说明图1为国家标准中叶黄素对照品溶液异构化的HPLC图谱；图2为本专利技术的流动相程序Ⅰ的供试品溶液液HPLC图谱；图3为本专利技术的流动相程序Ⅱ的供试品溶液液HPLC图谱；图4为本专利技术的流动相程序Ⅲ的供试品溶液液HPLC图谱；图5为本专利技术的流动相程序Ⅳ的供试品溶液液HPLC图谱；图6为本专利技术的流动相程序Ⅴ的供试品溶液液HPLC图谱；图7为本专利技术的流动相甲醇/水＝86:14的供试品溶液液HPLC图谱；图8为本专利技术的流动相甲醇/水＝88:12的供试品溶液液HPLC图谱；图9为本专利技术的流动相甲醇/水＝90:10的供试品溶液液HPLC图谱；图10为本专利技术的流动相甲醇/水＝92:8的供试品溶液液HPLC图谱；图11为本专利技术的流动相甲醇/水＝95:5的供试品溶液液HPLC图谱；图12为本专利技术的流动相甲醇/水＝100:0的供试品溶液液HPLC图谱；图13为本专利技术的流速为0.8ml/min的供试品溶液液HPLC图谱；图14为本专利技术的柱温为30℃的供试品溶液液HPLC图谱；图15为本专利技术的反式叶黄素纯度验证结果；图16为本专利技术的反式叶黄素对照品溶液HPLC图谱；图17为本专利技术的反式玉米黄质对照品溶液HPLC图谱；图18为本专利技术的叶黄素异构化对照品溶液的HPLC图谱；图19为本专利技术的供试品溶液的HPLC图谱；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定叶黄素成分的方法，其特征在于，该方法采用高效液相色谱检测，其中，色谱条件包括：以YMC Carotenoid C30为色谱柱；以甲醇/水为流动相A，甲基叔丁基醚为流动相B；洗脱程序为0min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例为88～100:12～0。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定叶黄素成分的方法，其特征在于，该方法采用高效液相色谱检测，其中，色谱条件包括：以YMCCarotenoidC30为色谱柱；以甲醇/水为流动相A，甲基叔丁基醚为流动相B；洗脱程序为0min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例为88～100:12～0。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，甲醇/水的比例为92～100:8～0。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，甲醇/水的比例为95:5。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A和/或所述流动相B中包含2，6-二叔丁基对甲酚。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述2，6-二叔丁基对甲酚的浓度为0.1％。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：流速为0.7mL/min～1.1mL/min；柱温25℃～40℃。


7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
以规格为250mm×...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖伟，于桂芳，胡宝玲，胡军华，闫显光，王婧，胡晗绯，韦迎春，王振中，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32