一种生产胰蛋白酶的方法技术

本发明专利技术属于微生物或酶工程领域，具体涉及一种生产胰蛋白酶的方法。该方法使用的发酵菌株为链霉菌(Streptomyces sp.)LDE‑79，保藏号为CGMCC No.18646，发酵液中酶活达到252U/mL至260U/mL之间，通过提取、精制获得的胰蛋白酶液体酶制剂的酶活达到1000U/mL以上。得到的胰蛋白酶最适pH范围为7.5‑9.0，最适作用温度范围为35℃‑60℃，并且在55℃保温1h后剩余酶活为92％，保温2h后剩余酶活为85％，具有显著的耐热性，可广泛应用到高温工业生产中，大大地拓宽了胰蛋白酶的应用范围，增加了胰蛋白酶的应用价值。

A method of producing trypsin

【技术实现步骤摘要】
一种生产胰蛋白酶的方法
：本专利技术属于微生物或酶工程领域，具体涉及一种生产胰蛋白酶的方法。
技术介绍
：胰蛋白酶(Trypsin，EC3.4.21.4)属于丝氨酸蛋白酶类，有丝氨酸蛋白酶的典型特征，即具备由组氨酸、天冬氨酸和丝氨酸氨基酸残基所组成的催化三联体。而胰蛋白酶能通过专一的断开精氨酸或赖氨酸羧基端肽键来降解多肽链，并能激活其他胰腺中的酶原。由于其最适催化作用pH在7.0以上，所以胰蛋白酶是一种碱性蛋白酶。胰蛋白酶是一种工业上常用蛋白酶，在医药领域、皮革加工、农业生产及食品加工等领域均发挥着重要应用。目前，被广泛应用的商品化胰蛋白酶多数来自于动物胰腺，但诸多的缺陷或限制制约了其的应用。从动物的胰腺中提取胰蛋白酶，是胰腺提取胰岛素的副产品，但随着胰岛素的基因工程化生产，使单纯从胰腺中提取获取胰蛋白酶的成本大大增加。另外，胰腺中还含有较复杂的消化酶系，不可避免地降低了胰蛋白酶的纯度(例如胰凝乳蛋白酶等)，或者需要通过增加成本进行纯化。动物源胰蛋白酶还存在携带动物性病毒的隐患，异味重以及宗教等限制性问题，从而在一定程度上阻碍其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发酵生产胰蛋白酶的方法，其特征在于，发酵菌种为链霉菌(Streptomycessp.)LDE-79，保藏编号为CGMCC No.18646。/n

【技术特征摘要】
1.一种发酵生产胰蛋白酶的方法，其特征在于，发酵菌种为链霉菌(Streptomycessp.)LDE-79，保藏编号为CGMCCNo.18646。


2.如权利要求1所述的发酵生产胰蛋白酶的方法，其特征在于，发酵方法如下：将种子液按照体积比10-15％的接种比例接入到发酵培养基中，30-32℃，转速400-800r/min，设置通风量：0h至6h为0.4-0.5vvm、6h至15h为0.6-0.8vvm，20h至发酵结束为1.0-1.2vvm，pH7.5～7.8，发酵培养至酶活增长缓慢或不在增长，菌体变形、自溶时结束发酵，发酵周期为120-128h。


3.如权利要求2所述的发酵生产胰蛋白酶的方法，其特征在于，发酵过程通过协调补加补料培养基、或液氨、或磷酸来控制发酵液pH，使其维持在7.5～7.8范围内；
所述补料培养基组成为：玉米浆40g/L，玉米粉液化液120g/L，磷酸二氢钾1g/L，氧化钙0.3g/L，余量为水，pH7.5，121-123℃灭菌30min。

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴吉，郭庆文，王克芬，伏圣秘，刘胜利，刘文龙，张杰，
申请(专利权)人：山东隆科特酶制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37