耐高温的大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术属于大肠杆菌技术领域，具体涉及一种耐高温的大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用。噬菌体为大肠杆菌噬菌体CL9（

High temperature resistant E.coli phage and its composition, kit and Application

【技术实现步骤摘要】
耐高温的大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用
本专利技术属于大肠杆菌的研发
，具体涉及耐高温的大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用。
技术介绍
大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，是为人和动物肠道中的常居菌。大多数大肠杆菌菌株无害。然而，有些大肠杆菌可引起食源性疾病。大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K)，根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为二百多个型，其中一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜，常引起严重腹泻和败血症。该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。噬菌体是专门裂解细菌的一类病毒，主要化学成分由蛋白质和核酸组成，广泛存在于土壤、空气、水及生物体中，具有较强的专一性。由于其具备强大的杀菌能力，噬菌体可作为一种抗细菌感染制剂使用，自20世纪初以来一直受到国内外许多学者关注。孙利厂等人(《中国动物传染病学报》2018,12，10)从养殖场采集的污水样品中分离到宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体，并进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌的污染研究。中国专利CN106754751A公开了一种肠出血性大肠杆菌噬菌体及其应用，对EHEC具有高效杀菌能力。中国专利CN106591241A公开了一种新型肠出血性大肠杆菌O157，以用于防治污水排放或回用引发的肠出血性大肠杆菌O157的污染。中国专利CN110129283A公开了一种短尾强裂解性大肠杆菌噬菌体，命名为PD38，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年9月26日，保藏编号为CGMCCNo.16391。该噬菌体对大肠杆菌具有较好的裂解作用，对食品、养殖环境中的大肠杆菌具有良好的消杀作用，同时可以防治鸡大肠杆菌引起的疾病。中国专利CN109251899A公开了一种耐药大肠杆菌噬菌体及其应用。分类命名为EscherichiaphagevB_EcoP-EG1，保藏号为：CCTCCM2018562，保藏日期为2018年8月21日。中国专利CN106754751A一种肠出血性大肠杆菌噬菌体及其应用，该噬菌体菌株保藏号为CCTCCNO：M2016539，于2016年9月29日保藏于中国武汉大学中国典型培养物保藏中心，分类命名为肠出血性大肠杆菌噬菌体vB_ECM_MIE，Entero-hemorrhagicEscherichiacoliO157:H7phagevB_ECM_MIE；对EHEC具有高效杀菌能力。韩国专利KR102003786B1公开了一种新的大肠杆菌特异性噬菌体EcoH7及其制备方法。更噬菌体EcoH7对产大肠杆菌具有非常高的特异性，可以解决抗生素对抗生素的耐药性，食品中的残留问题，以及广泛的宿主范围，因此可广泛用于抗生素，组合物，饲料，消毒剂或清洗剂领域。美国专利US10265353B2公开了一种从自然界中分离的能够特异性杀死肠出血性大肠杆菌菌株的肌病毒科噬菌体ESC-CHP-1，保藏号:KCTC12660bp，使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物可以预防和治疗肠出血性大肠杆菌的感染。美国专利US7635584B2公开了一种对大肠杆菌O157:H7菌株具有强裂解活性的分离的噬菌体，以及使用该噬菌体和/或衍生自该噬菌体的后代或衍生物来控制大肠杆菌O157:H7在各种环境中的生长的方法。目前，关于大肠杆菌噬菌体的研究主要集中于肠出血性噬菌体裂解性方面，针对大肠杆菌噬菌体稳定性及其应用方面的研究鲜见报道。综上，急需开发新的稳定性高、耐高温的新型大肠杆菌噬菌体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种耐高温的大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用，具有耐高温，稳定性高，安全性好的特点。本专利技术采用一种耐高温的大肠杆菌噬菌体，所述大肠杆菌噬菌体为大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)，保藏编号为CCTCCM2018937。。进一步的，所述大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)为烈性噬菌体，所述大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)为烈性噬菌体，有一呈多面体对称的头部和可伸缩的尾部，头部直径约为120nm,尾部长约200nm,属于肌尾科噬菌体；且在pH3～pH11、在4℃～70℃条件下具有耐性，MOI＝1条件下培养6h，其效价为3.9×109pfu/mL。进一步的，所述大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。。进一步的，所述大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)的主要结构蛋白相对分子量为43kDa。一种含有所述耐高温的大肠杆菌噬菌体的组合物，所述组合物至少含有大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)。进一步的，所述组合物含有大肠杆菌噬菌体CL9(EscherichiacoliphageCL9)，大肠杆菌噬菌体CL23(EscherichiacoliphageCL23)和大肠杆菌噬菌体D257P(EscherichiacoliphageD257P)中的两种或两种以上。一种含有上述耐高温的大肠杆菌噬菌体或大肠杆菌噬菌体组合物的试剂或试剂盒。上述的大肠杆菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体组合物或含有大肠杆菌噬菌体或大肠杆菌噬菌体组合物的试剂或试剂盒在抗制备大肠杆菌引发的仔猪黄痢，鸡白痢，犊牛腹泻，奶牛乳房炎等疾病的药物中的应用。本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术大肠杆菌噬菌体CL9为严格的烈性噬菌体且对宿主菌具有高毒性；具有较广的宿主范围；其DNA无法编码可能引起潜在健康风险的蛋白；在非致病性细菌宿主上可较好增殖；可进行大规模发酵培养；其培养液可于室温下稳定存活，于4℃下可保存12个月。本专利技术未对供试噬菌体进行任何遗传修饰。因此，本专利技术的3株大肠杆菌噬菌体能为开发噬菌体疗法提供优良的菌株资源，并具有良好的应用开发前景。大肠杆菌噬菌体CL9在50℃下水浴24h，效价仅降低一个数量级，在60℃下水浴48h依然有107PFU/ml的噬菌体存在，同时在70℃水浴2h仍具有80％存活率，具有良好的耐高温特性。(2)本专利技术大肠杆菌噬菌体CL9、CL23以及D257P或其组合物可以由本领域技术人员根据本专利技术的记载和本领域常识制备成应用于治疗或预防由携带大肠杆菌引起的仔猪黄痢，鸡白痢，犊牛腹泻，奶牛乳房炎综合征的药剂或试剂。(3)本专利技术大肠杆菌噬菌体CL9、CL23以及D257P可选取一株或多株被制备成作为有效成分应用于携带携带大肠杆菌引起的仔猪黄痢，鸡白痢，犊牛腹泻，奶牛乳房炎综合征的快速检测试剂或试剂盒。其包括但不限于以试纸、试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐高温的大肠杆菌噬菌体，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体为大肠杆菌噬菌体CL9（

【技术特征摘要】
1.一种耐高温的大肠杆菌噬菌体，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体为大肠杆菌噬菌体CL9（EscherichiacoliphageCL9），保藏编号为CCTCCM2018937。


2.根据权利要求1所述耐高温的大肠杆菌噬菌体，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体CL9（EscherichiacoliphageCL9）为烈性噬菌体，有一呈多面体对称的头部和可伸缩的尾部，头部直径约为120nm,尾部长约200nm,属于肌尾科噬菌体；且在pH3～pH11、在4℃～70℃条件下具有耐性，MOI=1条件下培养6h，其效价为3.9×109pfu/mL。


3.根据权利要求1所述耐高温的大肠杆菌噬菌体，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体CL9（EscherichiacoliphageCL9）具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。


4.根据权利要求1所述宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体CL9（EscherichiacoliphageCL9）的主...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟，丁良，樊小九，肖逍，许小康，丛郁，徐旭凌，
申请(专利权)人：菲吉乐科南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32