土大黄中药饮片的检测方法技术

本发明专利技术公开了土大黄中药饮片的检测方法，属于中药分析技术领域，包括：制备芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚五种对照品溶液的混合液；土大黄中药饮片粉末加入甲醇，加热回流，滤液挥去溶剂，加盐酸溶液水解，再加三氯甲烷提取，分取三氯甲烷溶液，减压回收溶剂至干，残渣溶于甲醇，制得总蒽醌供试品溶液；土大黄中药饮片粉末加入甲醇，加热回流，过滤，制得游离蒽醌供试品溶液；将上述三种溶液分别注入高效液相色谱仪测定；根据色谱图计算出土大黄中药饮片中总蒽醌、游离蒽醌的含量，本发明专利技术克服了原标准只能定性鉴别的缺陷，填补了土大黄中药饮片定量分析的空白，具有开创性。

Detection method of Chinese herbal pieces of rhubarb

【技术实现步骤摘要】
土大黄中药饮片的检测方法
本专利技术涉及中药分析
，具体涉及土大黄中药饮片的检测方法。
技术介绍
土大黄来源于蓼科植物巴天酸模RumexpatientiaL.或皱叶酸模RumexcrispusL.的干燥根。历代医书中最早记载土大黄的是宋代苏颂主持编撰的《图经本草》，后来，明代李时珍编著《本草纲目》中记载描述的土大黄与现今酸模属的巴天酸模及皱叶酸模极其相似，清代吴其濬(音同俊)在编著《植物名实图考》时沿用了这一记录。自上世纪60年代之后，酸模属的土大黄成为北京药材市场该品种的主流，从1986年版《北京中药炮制规范》到1998年版《北京市中药材标准》再到后来的2008年版《北京市中药饮片炮制规范》，其收录的土大黄来源均为巴天酸模与皱叶酸模。土大黄(巴天酸模)与土大黄(皱叶酸模)在化学成分上有许多共性，根部中含总蒽醌，还含酸模素(musizin)、鞣质、6-O-丙二酰基-β-甲基-D-吡喃葡萄糖苷(6-O-malonyl-β-methyl-D-glucopyranoside)、阿斯考巴拉酸(ascorbalamicacid)、槲皮素(quercetin)。总蒽醌包括游离蒽醌和结合蒽醌，游离蒽醌主要包括大黄酚(Chrysophanol)、大黄素(Emodin)，大黄素甲醚(Physcion)、大黄酸(Rhein)及芦荟大黄素(Aloe-emodin)五种成分，结合蒽醌是以游离蒽醌为苷元的单糖苷或多糖苷的结合。大黄酚的结构式如下：大黄素的结构式如下：大黄素甲醚的结构式如下：大黄酸的结构式如下：芦荟大黄素的结构式如下：土大黄中含有抑制真菌、细菌和莴苣秧苗生长的成分，所含酸模素具有强大抗菌作用。土大黄含有大黄素、大黄酚、酸模素等，其中大黄素、大黄酚能促进血液凝固，降低血管通透性，加强血管收缩性。药理实验表明，土大黄注射液能缩短家兔出、凝血时间及凝血酶原时间，延长家兔血浆复钙时间。土大黄具有清热解毒，凉血止血，祛瘀消肿，通便杀虫的作用，主治肺痨咯血，肺痈，吐血，瘀滞腹痛，跌打损伤，大便秘结，痄腮，痈疮肿毒，烫伤，疥廯，湿疹。土大黄是北京常用中药材，而《中华人民共和国药典》现行版并未收载，《北京市中药材标准》1998年版及《北京市中药饮片炮制规范》2008年版虽然已收载土大黄，但检测项目简单，只能定性鉴别，而无含量测定项目，导致其内在质量无法控制。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术的一个目的在于提供一种土大黄中药饮片的检测方法，对土大黄指标成分总蒽醌和游离蒽醌进行了定量测定，提高了对土大黄中药饮片的质量控制，确保了患者用药安全。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现：土大黄中药饮片的检测方法，包括有以下步骤：S1制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品的混合液；S2制备总蒽醌供试品溶液：取一定量的土大黄中药饮片粉末，按土大黄中药饮片粉末质量:甲醇体积为0.15g:20-30mL的比值，加入甲醇，加热回流80-40min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；取一定体积的续滤液，挥去溶剂，按续滤液中对应的土大黄中药饮片粉末质量:盐酸溶液体积为0.003g:1mL的比值，加质量浓度为8％的盐酸溶液，超声处理2min；再加与8％盐酸溶液等体积的三氯甲烷，加热回流1h；分取三氯甲烷层，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，取续滤液，即得；S3测定：分别将对照品溶液和总蒽醌供试品溶液注入液相色谱仪，检测；S4计算：根据对照品溶液色谱图与总蒽醌供试品溶液色谱图的峰面积，计算出土大黄中总蒽醌的含量。通过采用上述技术方案，制备总蒽醌供试品溶液时，根据土大黄的总蒽醌成分中含有结合蒽醌和游离蒽醌的性质，先将土大黄中药饮片粉末加入甲醇提取，将结合蒽醌和游离蒽醌提取至甲醇中，再加入盐酸使结合蒽醌水解成为游离蒽醌，然后，用三氯甲烷提取出游离蒽醌，过滤蒸干，再用甲醇定容测定。制备总蒽醌供试品溶液时，经过两次提取，最终的总蒽醌供试品溶液纯度高，能够用于精确测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚五种成分的含量，为判定土大黄中药饮片的质量提供精准多样的数据参考。而且，通过多批验证认为，本专利技术的土大黄含量测定方法成熟可行，可操作性强，便于推广。综上，本专利技术的检测方法，既完善了标准，填补了土大黄标准无含量测定的空白，又保证了药品质量，确保了患者用药安全，具有很高的应用价值。较佳的，制备总蒽醌供试品溶液时，步骤S2中，分取三氯甲烷层之后的酸液再用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，再进行减压回收溶剂至干的操作。本专利技术的目的二在于提供另一种土大黄中药饮片的检测方法，包括有以下步骤：S1制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品的混合液；减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；S3测定：分别将对照品溶液和游离蒽醌供试品溶液注入液相色谱仪，检测；S4计算：根据对照品溶液色谱图与游离蒽醌供试品溶液色谱图的峰面积，计算出土大黄中游离蒽醌的含量。通过采用上述技术方案，根据土大黄的游离蒽醌成分的性质，将土大黄中药饮片粉末直接加入甲醇提取，测定出游离蒽醌中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚五种成分的含量，与总蒽醌的检测数据一同用于判定土大黄中药饮片的质量，丰富了数据参考，进一步提高了土大黄中药饮片质量判定的精准度。较佳的，上述总蒽醌供试品溶液或游离蒽醌供试品溶液的制备中，土大黄中药饮片粉末的粒径为65目。通过采用上述技术方案，可以使供试品粉末达到检测要求，不会因为粉末太粗影响含量测定，也不会因为太细而破坏供试品细胞，影响检测结果，提高了检测的准确度。较佳的，上述总蒽醌测试或游离蒽醌测试中，芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品的浓度均为16ug/mL，大黄素甲醚对照品的浓度为8ug/mL。较佳的，上述总蒽醌测试或游离蒽醌测试中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为85：15的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相。较佳的，上述总蒽醌测试或游离蒽醌测试中，检测波长为254nm。通过采用上述技术方案，254nm检测波长下，样品的峰形左右对称，受干扰最小，因此检测结果精确。较佳的，上述总蒽醌供试品溶液的浓度为0.0025-0.00375g/ml。较佳的，上述游离蒽醌供试品溶液浓度为0.015-0.025g/ml。综上所述，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术提供了土大黄中药饮片总蒽醌、游离蒽醌两种指标成分的检测方法，准确可行，克服了原标准只能定性鉴别的缺陷，填补了土大黄中药饮片定量分析的空白，为药检系统与中药企业质检测定土大黄中药饮片提供了参考依据，有利于完善检测标准，保证药品质量，确保患者用药安全，具有开创性；...

【技术保护点】
1.土大黄中药饮片的检测方法，其特征在于，包括有以下步骤：/nS1制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品的混合液；/nS2制备总蒽醌供试品溶液：取一定量的土大黄中药饮片粉末，按土大黄中药饮片粉末质量:甲醇体积为0.15g:20-30mL的比值，加入甲醇，加热回流80-40min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；取一定体积的续滤液，挥去溶剂，按续滤液中对应的土大黄中药饮片粉末质量:盐酸溶液体积为0.003g:1mL的比值，加质量浓度为8%的盐酸溶液，超声处理2min；再加与8%盐酸溶液等体积的三氯甲烷，加热回流1h；分取三氯甲烷层，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，取续滤液，即得；/nS3测定：分别将对照品溶液和总蒽醌供试品溶液注入液相色谱仪，检测；/nS4计算：根据对照品溶液色谱图与总蒽醌供试品溶液色谱图的峰面积，计算出土大黄中总蒽醌的含量。/n

【技术特征摘要】
1.土大黄中药饮片的检测方法，其特征在于，包括有以下步骤：
S1制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品的混合液；
S2制备总蒽醌供试品溶液：取一定量的土大黄中药饮片粉末，按土大黄中药饮片粉末质量:甲醇体积为0.15g:20-30mL的比值，加入甲醇，加热回流80-40min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；取一定体积的续滤液，挥去溶剂，按续滤液中对应的土大黄中药饮片粉末质量:盐酸溶液体积为0.003g:1mL的比值，加质量浓度为8%的盐酸溶液，超声处理2min；再加与8%盐酸溶液等体积的三氯甲烷，加热回流1h；分取三氯甲烷层，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，取续滤液，即得；
S3测定：分别将对照品溶液和总蒽醌供试品溶液注入液相色谱仪，检测；
S4计算：根据对照品溶液色谱图与总蒽醌供试品溶液色谱图的峰面积，计算出土大黄中总蒽醌的含量。


2.根据权利要求1所述的土大黄中药饮片的检测方法，其特征在于：步骤S2中，分取三氯甲烷层之后的酸液再用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷溶液，再进行减压回收溶剂至干的操作。


3.土大黄中药饮片的检测方法，其特征在于，包括有以下步骤：
S1制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品的混合液；
S2制备游离蒽醌供试品溶液：取一定量的土大黄中药饮...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟燕，刘玉玲，杨蕊，王欣欣，刘静，陈光，宋晓斐，石渊博，林青，张雪芹，李国兴，
申请(专利权)人：北京紫云腾中药饮片有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11