一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法技术

本发明专利技术涉及中性粒细胞测定技术领域，具体地说，涉及一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法。其方法包括如下步骤：样本采集；流式检测；CD64指数计算：其公式为：CD64指数＝(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)/【(单核细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)－(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)】。该用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法中，用单核细胞荧光强度作为阳性对照，用淋巴细胞荧光强度作为阴性对照，可排除仪器、试剂、电压等因素对结果的影响，利于结果的标准化。

A method for the determination of neutrophil CD64 in clinical infectious diseases

【技术实现步骤摘要】
一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法
本专利技术涉及中性粒细胞测定
，具体地说，涉及一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法。
技术介绍
CD64又称作Fc-gamma受体蛋白1(FcyRI)。CD64在外周血中性粒细胞表面呈现低表达，当机体受到感染后细菌细胞壁脂多糖、粒细胞集落刺激因子以及干扰素等刺激因子可引起中性粒细胞表面CD64由低表达迅速转变为高表达，并活化中性粒细胞，因此被作为一种感染指标门。不同病原体引起的活化程度具有差异,研究发现其对细菌和病毒感染有一定的鉴别能力。CD64的测定对临床感染性疾病的诊断意义重大，但由于其荧光强度的测定受到仪器、试剂、电压等因素的影响，无法标准化，导致一致未被临床广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，其方法包括如下步骤：S1、样本采集：采集空腹静脉血1-2mL，采用乙二胺四乙酸抗凝；S2、流式检测：对样本进行处理，采用流式细胞仪检测处理后的样本血液，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度；S3、CD64指数计算：其公式为：CD64指数＝(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)/【(单核细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)－(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)】。r>作为优选，所述S1的样本采样中，空腹静脉血选取当天采集的空腹静脉血。作为优选，所述S2流式检测中，样本处理的方法包括如下步骤：S2.1.1、分别向已编好号的试管中加入20μLCD64-PE单克隆荧光抗体和50μL抗凝全血混匀；S2.1.2、室温避光孵育15min；S2.1.3、向试管中加入FACSLysin1mL，混匀；S2.1.4、室温避光孵育10min；S2.1.5、用2mLPBS缓冲液洗涤细胞2次；S2.1.6、用450μLPBS缓冲液悬浮细胞。作为优选，所述S2流式检测中，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度的方法包括如下步骤：S2.2.1、在FSC/SSC散点图中分别圈出淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞；S2.2.2、分别建立直方图，显示三群细胞的几何平均荧光强度；S2.2.3、每个样本获取10000个细胞，获得每种细胞的CD64平均荧光强度数据。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：该用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法中，用单核细胞荧光强度作为阳性对照，用淋巴细胞荧光强度作为阴性对照，可排除仪器、试剂、电压等因素对结果的影响，利于结果的标准化。附图说明图1为本专利技术的整体方法流程框图；图2为本专利技术的样本处理处理方法流程框图；图3为本专利技术的获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度方法流程框图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-图3所示，本专利技术提供一种技术方案：本专利技术提供一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，包括其方法包括如下步骤：S1、样本采集：采集空腹静脉血1-2mL，采用乙二胺四乙酸抗凝；S2、流式检测：对样本进行处理，采用流式细胞仪检测处理后的样本血液，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度；S3、CD64指数计算：其公式为：CD64指数＝(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)/【(单核细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)－(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)】。对数据进行正态性检验，符合正态的数据以表示，进行one-wayANOVA分析，不符合正态分布的数据使用中位数(四分位数)[M(P25,P75)]描述，进行非参数检验(Kruskal-Wallis检验)和两两比较(Mann-Whitney检验)检验各组间的差异。分类变量以[n(％)]表示，采用x2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。本实施例中，S1的样本采样中，空腹静脉血选取当天采集的空腹静脉血。进一步的，S2流式检测中，样本处理的方法包括如下步骤：S2.1.1、分别向已编好号的试管中加入20μLCD64-PE单克隆荧光抗体和50μL抗凝全血混匀；S2.1.2、室温避光孵育15min；S2.1.3、向试管中加入FACSLysin1mL，混匀；S2.1.4、室温避光孵育10min；S2.1.5、用2mLPBS缓冲液洗涤细胞2次；S2.1.6、用450μLPBS缓冲液悬浮细胞。S2流式检测中，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度的方法包括如下步骤：S2.2.1、在FSC/SSC散点图中分别圈出淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞；S2.2.2、分别建立直方图，显示三群细胞的几何平均荧光强度；S2.2.3、每个样本获取10000个细胞，获得每种细胞的CD64平均荧光强度数据。用单核细胞荧光强度作为阳性对照，用淋巴细胞荧光强度作为阴性对照，可排除仪器、试剂、电压等因素对结果的影响，在不同的流式细胞仪上试验结果较稳定，经统计学分析无显著性差异。并对126名正常人进行了检测，建立了正常参考值。使得CD64测定标准化，消除了不同仪器、不同试剂、不同操作者的影响，并可消除仪器电压的波动影响。以上显示和描述了本专利技术的基本原理、主要特征和本专利技术的优点。本行业的技术人员应该了解，本专利技术不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本专利技术的优选例，并不用来限制本专利技术，在不脱离本专利技术精神和范围的前提下，本专利技术还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本专利技术范围内。本专利技术要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，其方法包括如下步骤：/nS1、样本采集：采集空腹静脉血1-2mL，采用乙二胺四乙酸抗凝；/nS2、流式检测：对样本进行处理，采用流式细胞仪检测处理后的样本血液，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度；/nS3、CD64指数计算：其公式为：CD64指数＝(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)/【(单核细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)－(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)】。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，其方法包括如下步骤：
S1、样本采集：采集空腹静脉血1-2mL，采用乙二胺四乙酸抗凝；
S2、流式检测：对样本进行处理，采用流式细胞仪检测处理后的样本血液，获取淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的荧光强度；
S3、CD64指数计算：其公式为：CD64指数＝(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)/【(单核细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)－(中性粒细胞CD64荧光强度－淋巴细胞CD64荧光强度)】。


2.根据权利要求1所述的用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，其特征在于：所述S1的样本采样中，空腹静脉血选取当天采集的空腹静脉血。


3.根据权利要求1所述的用于临床感染性疾病的中性粒细胞CD64测定方法，其特征在于：所述S2流式检测中，样本处理的方法包括如下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：方代华，
申请(专利权)人：徐州市儿童医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32