合成的生物缀合物制造技术

本发明专利技术提供了生物缀合物及其使用方法，该生物缀合物包含骨架和至少一个支链或非支链的肽，该肽具有至少一个通过间隔物共价结合至其的胶原结合单元。

Synthetic conjugates

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】合成的生物缀合物相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2017年07月07日提交的美国临时专利申请号62/530,047的利益，其公开内容通过引用整体并入本文。
本专利技术提供包含骨架和至少一个支链肽或非支链肽的生物缀合物，该肽具有至少一个通过间隔物共价结合至其的胶原结合单元。
技术介绍
在组织中，细胞被包含各种大分子的细胞外基质(ECM)包围，所述大分子例如是生物缀合物、胶原、透明质酸、层粘连蛋白、纤连蛋白等。在哺乳动物中，生物缀合物是细胞外基质的主要成分，在此它们与其他生物缀合物、透明质酸、以及纤维基质蛋白质(例如胶原)形成大的复合物。随着哺乳动物年龄增长和在某些疾病状态中，身体的某些部位(例如滑膜关节、玻璃体液、脊椎盘、皮肤等)中的细胞外基质会降解，引起不良的症状，例如各种形式的关节炎、视力丧失等。另外，诸如血管损伤、角膜损伤和皮肤伤口的一些组织损伤导致细胞外基质和/或其组分(包括胶原)的暴露。专利技术概述令人惊讶地发现，在聚糖和肽之间具有某些键的生物缀合物导致某些肽与它们的靶标结合增加。还发现具有支链肽会导致结合改善。具体地，具有某些间隔物的生物缀合物提供了增强的胶原结合活性。本专利技术提供生物缀合物，其包含聚糖和至少一个共价结合至其的式(I)的结合单元：((X1)mX2)nX3-L(I)其中：X1是包含胶原结合单元的氨基酸序列；X2和X3独立地为不存在的；具有1至15个氨基酸的氨基酸序列；或基团其中p和q每一个都独立地为1至10的整数；L是5至20个氨基酸的间隔物，该氨基酸选自甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、精氨酸(R)和赖氨酸(K)、或基团条件是L在从聚糖开始的前五个氨基酸内包含至少两个精氨酸(R)，并且其中L进一步包含将该肽共价结合至该聚糖的任选的连接基团；m为1或2；并且n为1或2。在一个实施方式中，L不是GSGKRRGSG(SEQIDNO:)。在一个实施方式中，X1为肽的N端，并且X3在肽的C端。在一个实施方式中，式(I)不是RRRKKIQGRSKR(SEQIDNO:)或RRGGRKWGSFEG(SEQIDNO:)。在一个实施方式中，所述连接基团是-NHNH-。在一个实施方式中，本专利技术提供了下式的官能化的肽：L-NHNH2其中L是5至20个氨基酸的间隔物，该氨基酸选自甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、精氨酸(R)和赖氨酸(K)、或基团条件是L在从-NHNH2基团开始的前五个氨基酸内包含至少两个精氨酸(R)。在一个实施方式中，L是-GSGSGSRR-NHNH-(SEQIDNO:)。本专利技术还提供包含GSGSGSRR(SEQIDNO:)的肽。本专利技术还提供式(II)的结合单元：((X1)mX2)nX3-L(II)其中：X1是包含胶原结合单元的氨基酸序列；X2和X3独立地为不存在的；具有1至15个氨基酸的氨基酸序列；或基团其中p和q每一个都独立地为1至10的整数；L是5至20个氨基酸的间隔物，该氨基酸选自甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、精氨酸(R)和赖氨酸(K)、或基团条件是L在从末端开始的前五个氨基酸内包含至少两个精氨酸(R)，并且其中L进一步包含任选的连接基团；m为1或2；并且n为1或2；条件是式(II)不是RRRKKIQGRSKR(SEQIDNO:)或RRGGRKWGSFEG(SEQIDNO:)。在某些实施方式中，m为1及n为2。在某些实施方式中，m为2及n为1。在某些实施方式中，m为2及n为2。在某些实施方式中，X2和X3独立地是不存在的；具有1至15个氨基酸的氨基酸序列，该氨基酸选自甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、精氨酸(R)和赖氨酸(K)；或基团其中p和q每一个都独立地为1至10的整数。在某些实施方式中，X2和X3独立地是不存在的；或具有1至15个氨基酸的氨基酸序列，该氨基酸选自甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、精氨酸(R)和赖氨酸(K)。在某些实施方式中，当m和/或n不是1时，X2和X3中的至少一个包含至少一个精氨酸(R)或赖氨酸(K)。在某些实施方式中，其中当m和/或n不是1时，X2和X3不包含精氨酸(R)或赖氨酸(K)。在某些实施方式中，L包含酰肼。附图说明可以通过附图查看本专利技术的一些方面。本文包括以下附图：图1示出了生物缀合物化合物4、化合物8和化合物13的胶原结合的比较。图2示出了生物缀合物化合物4和化合物12的胶原结合的比较。图3示出了生物缀合物化合物4和化合物14的胶原结合的比较。图4示出了生物缀合物化合物4、化合物8和化合物11的胶原结合的比较。图5示出了生物缀合物化合物4、化合物9和化合物10的胶原结合的比较。图6示出了一些图1-5的生物缀合物的胶原结合的比较，以及图7示出了将对应EC50值进行比较的柱状图。图8示出了生物缀合物化合物4和化合物11的胶原结合的比较。图9示出了化合物16、化合物17和化合物18的胶原结合的比较。图10示出了生物缀合物化合物18和化合物19的胶原结合的比较。图11示出了化合物20、化合物4、化合物5和化合物3的胶原结合的比较。图12，小图A和小图B，示出了与化合物1(小图A)相比，化合物10(小图B)对血小板结合至胶原的影响。图13示出了与溶媒和替米沙坦(Telmisartan)相比，化合物10的通过天狼星红(SiriusRed)组织学上测量的肝脏中的胶原含量。图14示出了IVIS成像，其示出了在肾脏和膀胱中被荧光标记的分子的分布。在IV注射后五分钟获取了顶部图像，以及在注射后1小时获取了底部图像。左边的图像是腹侧，以及右边的图像是小鼠的背侧。图15示出了从聚糖(GAG)开始第一个精氨酸残基的位置对胶原结合序列GQLYKSILY(SEQIDNO:)的影响。图16示出了当被连接至GQLYKSILY(SEQIDNO:)胶原结合结构域时间隔物长度对胶原结合的影响。图17示出了GQLYKSILY(SEQIDNO:)胶原结合结构域中氨基酸改变对胶原结合的影响。(A)示出了用赖氨酸或D-精氨酸替换精氨酸的影响。(B)示出了与GQLYKSILYGSGSGSRR(SEQIDNO:)相比间隔物GSGSGSRR(SEQIDNO:)的胶原结合亲和力。(C)示出了在间隔物内插入特定序列或化学物质的影响。PAPAPRR(SEQIDNO:)为脯氨酸-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸-脯氨酸-精氨酸-精氨酸，AhxRR为6-氨基己酸-精氨酸-精氨酸，PEG6RR是(聚乙二醇)6-精氨酸-精氨酸，ahxRRAhx是6-氨基己酸-精氨酸-精氨酸-6-氨基己酸。图18示出了与没有间隔物的结合序列和作为对照的间隔物序列相比，具有优化的间隔物序列的GQLYKSILY(SEQIDNO:)结合序列的第二本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物缀合物，其包含聚糖和至少一个共价结合至其的式(I)的结合单元：/n((X

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170707 US 62/530,0471.一种生物缀合物，其包含聚糖和至少一个共价结合至其的式(I)的结合单元：
((X1)mX2)nX3-L
(I)
其中：
X1是包含胶原结合单元的氨基酸序列；
X2和X3独立地为不存在的；具有1至15个氨基酸的氨基酸序列；或基团或，其中p和q每一个都独立地为1至10的整数；
L是5至20个氨基酸的间隔物，该氨基酸选自甘氨酸（G）、丝氨酸（S）、精氨酸（R）和赖氨酸（K）、或基团，条件是L在从所述聚糖开始的前五个氨基酸内包含至少两个精氨酸（R），并且其中L进一步包含将肽共价结合至所述聚糖的任选的连接基团；
m为1或2；并且
n为1或2。


2.根据权利要求1所述的生物缀合物，其中L选自GSGRR(SEQIDNO:)、GSGSGRR(SEQIDNO:)、GSGSGSRR(SEQIDNO:)、GSGSGSGRR(SEQIDNO:)、GSGSGSGSRR(SEQIDNO:)、GSGSGSGSGSGRR(SEQIDNO:)、GSGSGSGSGSGSRR(SEQIDNO:)、GSGSGSGSGSGSGRR(SEQIDNO:)、GSRRGS(SEQIDNO:)、GSGRRGSG(SEQIDNO:)、GSGRRRGSG(SEQIDNO:)、GSGRRR(SEQIDNO:)、GSGRRRR(SEQIDNO:)、GSGSGSRRR(SEQIDNO:)、GSGSGSRRRR(SEQIDNO:)、GSGSGSRRRRR(SEQIDNO:)、GSGSGSRRRRRR(SEQIDNO:)和GSGSGSGSRRR(SEQIDNO:)。


3.根据权利要求1所述的生物缀合物，其中生物缀合物包含聚糖和1至约10个共价结合至其的式(I)的结合单元。


4.根据权利要求1所述的生物缀合物，其中生物缀合物包含聚糖和1至约8个共价结合至其的式(I)的结合单元。


5.根据权利要求1所述的生物缀合物，其中生物缀合物包含聚糖和约5个共价结合至其的式(I)的结合单元。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的生物缀合物，其中：
X2是包含GSG的氨基酸序列；并且
X3是包含XRR的氨基酸序列，其中X是不存在的或者是具有能够形成酰胺键的侧链的天然或非天然氨基酸。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的生物缀合物，其中：
X2是包含GSG的氨基酸序列；并且
X3是包含RR或KRR的氨基酸序列。


8.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中式(I)的结合单元是X1-GSGSGSRR-。


9.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含3至约20个氨基酸。


10.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含3至约10个氨基酸。


11.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含氨基酸序列GQLYKSILY(SEQIDNO:)。


12.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含氨基酸序列RRANAALKAGELYKSILY(SEQIDNO:)。


13.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含氨基酸序列GELYKSILY(SEQIDNO:)。


14.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X1包含氨基酸序列RRANAALKAGQLYKSILY(SEQIDNO:)。


15.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中X2包含3至5个氨基酸，并且X3包含2至4个氨基酸。


16.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中所述聚糖包含约1%至约50%的官能化、或约5%至约30%的官能化、或约25%的官能化，其中所述官能化百分比(%)由所述聚糖上被式(I)的结合单元官能化的二糖单元的百分比确定。


17.根据权利要求16所述的生物缀合物，其中所述聚糖包含约2.5%的官能化、或约5%的官能化、或约8%的官能化、或约10%的官能化、或约16%的官能化、或约32%的官能化，其中所述官能化百分比(%)由所述聚糖上被式(I)的结合单元官能化的二糖单元的百分比确定。


18.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中所述聚糖是肝素或其衍生物。


19.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中生物缀合物包含约8个共价结合至其的式(I)的结合单元。


20.根据前述任一项权利要求所述的生物缀合物，其中生物缀合物包含约5个共价结合至其的式(I)...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·埃里克·帕代里，茱莉娅·陈，萨曼莎·萨哈，
申请(专利权)人：斯米克IP有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US