一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法及其产品技术

本发明专利技术公开了一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法及其产品。本发明专利技术基于漆酚过敏的机理，令漆酚在体外与蛋白质或肽或氨基酸其中的一种或几种组合形成漆酚络合物，在增强机体的对过敏反应的耐受性，同时使其失去与直接皮肤蛋白结合的机会，避免引起皮肤的过敏反应，得到非过敏生漆或漆酚。蛋白质或肽或氨基酸与漆酚可逆络合，并没有真正破坏漆酚的结构，使漆酚的抗氧化、抗肿瘤、抗菌等原有的生物活性没有改变或丧失，而且在体内极易被消化分解代谢；可用于生漆或漆酚食品、保健品和药品开发；本发明专利技术设计巧妙，制备过程中无有毒有害试剂的添加和残留，保证成品的安全。

【技术实现步骤摘要】
一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法及其产品
本专利技术涉及食品、保健品和药品领域，具体是一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法及其产品。
技术介绍
生漆为漆树科植物漆树Rhusvernicifera、Rhussuccedanea和Melanorrhoeausitata韧皮部的分泌物，传统上主要应用于涂料行业，制作漆器、漆画等；干漆还有破瘀通经、消积杀虫和保护心血管等功效，广泛用于制药。生漆的主要成分为漆酚(60-70％)、水分(20-30％)、植物胶(4-10％)、漆酶(1.5-2％)和水不溶性糖蛋白(3-5％)等。漆酚是侧链含有15个或17个碳原子、链上带有1个、2个或3个不饱和键的烯烃的邻苯二酚。漆酚是一种半抗原，当半抗原漆酚与皮肤接触时，体内酶的催化反应将漆酚氧化形成亲电的邻醌类化合物，在邻苯二酚环的4，5，6位置与细胞膜上的角蛋白反应，形成一个完整的抗原；蛋白-漆酚复合物形成完全抗原以后，被朗格汉斯细胞(Langerhanscell)捕获，活化的朗格汉斯细胞在淋巴结聚集，并将抗原信息呈现给效应T细胞，效应细胞释放细胞因子，细胞因子和巨噬细胞、淋巴细胞及其他不同的类型靶标细胞结合，最后表现出接触性皮炎、红斑、丘疹、小泡和肿胀等病理性反应，轻者全身发痒，皮肤溃烂，重者可能引起双眼失明、手指干性坏疽、心律失常及多浆膜腔积液导致死亡等病症，严重制约了生漆或漆酚的利用和发展。现代药理学研究发现漆酚具有很好的抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗病毒和治疗脂肪肝等多种功效，所以消除漆酚过敏的障碍之后的生漆或漆酚在食品、保健品、药品领域有很大用途。目前生漆脱敏的主要方法是对漆酚进行结构修饰和利用菌株对过敏原漆酚进行降解。现有对漆酚进行结构修饰的技术方法存在的缺陷是改变了生漆中漆酚官能团的结构、而且对漆酚进行结构修饰时，一般使用或引入有毒有害试剂或基团，使生漆的食用、保健和药用价值受到威胁，而且脱敏效果不彻底；专利CN106075795B公开了利用灰色链霉菌锈色变种(Streptomycesgriseusvar.ferrugineus)对漆酚进行了降解，导致漆酚的价值丧失，造成了资源浪费。目前还没有不破坏漆酚的基本结构、不改变漆酚生物活性而消除生漆或漆酚过敏的方法和产品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法及其产品，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术是针对生漆过敏的机理，通过以下的方法实现的：是在特定条件下，按照一定工艺，给生漆或漆酚中配加免疫球蛋白，添加蛋白质、肽和氨基酸其中一种或几种组合，令漆酚在体外与蛋白质或肽或氨基酸其中的一种、或几种组合形成漆酚络合物。一方面免疫球蛋白是抗体，起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而使漆酚失去致敏作用；另一方面蛋白质、肽类和氨基酸是两性化合物，含有碱性基团-NH2，漆酚含有酸性酚羟基基团，酸碱基团结合使漆酚与蛋白质、肽和氨基酸在体外形成络合物，使漆酚失去了与皮肤角蛋白或细胞膜蛋白接触时的氧化反应，避免了体内漆酚-蛋白质抗原的形成。即使漆酚与皮肤接触，被氧化成亲电的邻苯二醌类化合物，但与漆酚络合的蛋白质、肽、氨基酸的酸性基团会立刻竞争性与邻苯二酚环的4，5，6位置结合形成体外蛋白质-漆酚络合物，避免了漆酚与皮肤角蛋白、细胞膜蛋白质的结合形成抗原。本专利技术得到的非过敏的生漆或漆酚与蛋白质、肽或氨基酸其中的一种或几种形成的漆酚络合物，其中蛋白质或肽或氨基酸与漆酚属于可逆络合，并没有真正破坏漆酚的结构，使漆酚抗氧化、抗肿瘤、抗菌等原有的生物活性没有改变或丧失，而且在体内极易被消化分解代谢，可用于生漆或漆酚食品、保健品和药品开发。具体的，一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法，包括以下步骤：S1、制备免疫球蛋白活化液：在无菌环境中，按照枸橼酸三钠:枸橼酸:葡萄糖:0.9％生理盐水＝(22.0-25.0)kg:(8.0-10.0)kg:(24.5-27.5)kg:1000L的质量体积比，溶解配置免疫球蛋白活化基质，置于28℃-32℃恒温培养箱活化2-4h，加入免疫球蛋白，制成免疫球蛋白活化液；所述免疫球蛋白活化液中活化基质：免疫球蛋白的体积质量比为(100-150)L：(5-8)kg。生漆来自漆树Rhusvernicifera、Rhussuccedanea和Melanorrhoeausitata等天然漆和精制漆。免疫球蛋白和可食蛋白、肽类和氨基酸可以是市售，也可以自制。S2、非过敏生漆或漆酚的制备：室温条件下，取免疫球蛋白活化液，按照生漆或漆酚:免疫球蛋白活化液＝100L:(10-17)L体积比，边搅拌边缓慢将免疫球蛋白活化液加入到生漆或漆酚中，搅拌均匀之后，再按照生漆或漆酚:可食蛋白质/肽类/氨基酸/可食蛋白质+肽类+氨基酸＝100L:(20-30)kg/(5-10)kg/(10-20)kg/(5-30)kg体积质量比，分别加入可食蛋白质、肽类、氨基酸、或可食蛋白质、肽类和氨基酸其中一种或几种混合物(当加入的为可食蛋白质、肽类和氨基酸中几种混合物时，生漆或漆酚：可食蛋白质+肽类+氨基酸的体积质量比为100L：(5-30)kg)，搅拌至溶液呈均匀凝胶状。进一步的，所述步骤S1中免疫球蛋白可以是免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)其中一种或几种的组合。进一步的，所述步骤S1中蛋白质可以是蛋清、奶类、豆类、谷物类、畜蛋白等其中一种或几种的组合。进一步的，所述的肽类化合物可以是如乳肽、豆类肽、谷物肽、卵白肽、畜产肽、水产肽、丝蛋白肽、复合肽、谷胱甘肽等其中一种或几种的组合。进一步的，所述的氨基酸可以是丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)等其中一种或几种的任意组合。上述制备非过敏生漆或漆酚方法制备的产品。本专利技术制备的产品还通过了豚鼠脱敏检验：选择SD豚鼠，体重(300±20)g，脱毛面积30mm2脱毛后24h后，选择脱毛合格的豚鼠50只，雌雄各半随机分为白凡士林对照组(基质对照组)、生漆原液对照组、将第三步中改造生漆或漆酚高、中、低剂量组给药涂抹剂量依次为0.2g/kg、0.1g/kg、0.05g/kg(分别相当于临床剂量的50倍、25倍和12.5倍)，每组动物10只；给药24h后，除受试物，连续观察12-15d，豚鼠毛发正常,高、中、低剂量组豚鼠皮肤光滑、红润，无瘙痒，无红肿、无溃烂等现象。本专利技术制备的产品通过了人体脱敏检验：选用合格的斑试器，210名作为斑贴试验志愿者，以封闭式斑贴试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、制备免疫球蛋白活化液：/n在无菌环境中，按照枸橼酸三钠:枸橼酸:葡萄糖:0.9％生理盐水＝(22.0-25.0)kg:(8.0-10.0)kg:(24.5-27.5)kg:1000L的质量体积比，溶解配置免疫球蛋白活化基质，置于28℃-32℃恒温培养箱活化2-4h，加入免疫球蛋白，制成免疫球蛋白活化液；/nS2、非过敏生漆或漆酚的制备：/n室温条件下，取免疫球蛋白活化液，按照生漆或漆酚:免疫球蛋白活化液＝100L:(10-17)L的体积比，边搅拌边缓慢将免疫球蛋白活化液加入到生漆或漆酚中，搅拌均匀之后，再按照生漆或漆酚：可食蛋白质/肽类/氨基酸/可食蛋白质+肽类+氨基酸＝100L:(20-30)kg/(5-10)kg/(10-20)kg/(5-30)kg体积质量比，分别加入可食蛋白质、肽类、氨基酸、或可食蛋白质、肽类和氨基酸其中一种或几种混合物，搅拌至溶液呈均匀凝胶状。/n

【技术特征摘要】
1.一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备免疫球蛋白活化液：
在无菌环境中，按照枸橼酸三钠:枸橼酸:葡萄糖:0.9％生理盐水＝(22.0-25.0)kg:(8.0-10.0)kg:(24.5-27.5)kg:1000L的质量体积比，溶解配置免疫球蛋白活化基质，置于28℃-32℃恒温培养箱活化2-4h，加入免疫球蛋白，制成免疫球蛋白活化液；
S2、非过敏生漆或漆酚的制备：
室温条件下，取免疫球蛋白活化液，按照生漆或漆酚:免疫球蛋白活化液＝100L:(10-17)L的体积比，边搅拌边缓慢将免疫球蛋白活化液加入到生漆或漆酚中，搅拌均匀之后，再按照生漆或漆酚：可食蛋白质/肽类/氨基酸/可食蛋白质+肽类+氨基酸＝100L:(20-30)kg/(5-10)kg/(10-20)kg/(5-30)kg体积质量比，分别加入可食蛋白质、肽类、氨基酸、或可食蛋白质、肽类和氨基酸其中一种或几种混合物，搅拌至溶液呈均匀凝胶状。


2.根据权利要求1所述的一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法，其特征在于，所述步骤S1中的免疫球蛋白是免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)其中一种。


3.根据权利要求1所述的一种生物化学法制备非过敏生漆或漆酚的方法，其特征在于，所述步骤S1中的免疫球蛋白活化液中活化基质：免疫球蛋白的体积质量比为(100-150)L：(5-8)kg。

【专利技术属性】
技术研发人员：张存莉，范晨，王乾，苏嘉烨，聂俊莲，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61