一种口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法及其制备的口蹄疫病毒样颗粒抗原和应用技术

本发明专利技术提供了一种口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法，该方法通过表达的豆蔻酰化转移酶对口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1进行豆蔻酰化修饰，改善了3C蛋白酶酶切后VP0，VP3和VP1衣壳蛋白组装形成所述口蹄疫病毒样颗粒的稳定性。其制备的疫苗组合物具有良好的免疫原性，较相同血清型的商业疫苗产生抗体更快、产生的抗体滴度更高，维持期也更长。

A preparation method of FMD virus like particle antigen and its application

【技术实现步骤摘要】
一种口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法及其制备的口蹄疫病毒样颗粒抗原和应用
本专利技术涉及口蹄疫病毒前体蛋白P1的修饰后表达、组装口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法，及其制备的口蹄疫病毒样颗粒抗原，以及含有该抗原的疫苗组合物和应用，属于兽用生物制品领域。
技术介绍
口蹄疫(FMD)为一种急性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病，是哺乳动物中感染性最强的疾病，其中偶蹄类动物染病更会造成全球重大的经济损失。遭受口蹄疫危害的动物包括牛，羊、山羊和猪。致病因子为口蹄疫病毒(FMDV)，是小核糖核酸病毒属家族的一种口疮病毒。该病毒分为7个血清型(A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型)，其中O型口蹄疫病毒流行最为广泛。疫苗免疫是控制此病、保护家畜免受危害的有效措施。病毒样颗粒(VLPs)是一种在体外和/或体内表达时能够自组装成病毒外壳结构的类病毒粒子，它们是具有病毒的相似外壳结构但是不具有病毒复制能力的假病毒。VLPs疫苗能有效地激发机体产生抗感染，抗肿瘤免疫，基于病毒样颗粒设计的疫苗是一种较为理想的疫苗形式。大肠本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法，其中，所述方法包括：/n步骤(1)分别克隆、重组口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1全长基因和豆蔻酰化转移酶的基因到表达载体，获得口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的重组表达质粒和豆蔻酰化转移酶的重组表达质粒；/n步骤(2)将所述步骤(1)获得的所述口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的重组表达质粒和所述豆蔻酰化转移酶的重组表达质粒转化到大肠杆菌，获得所述大肠杆菌的重组表达菌株；/n步骤(3)将所述步骤(2)的所述大肠杆菌的重组表达菌株培养表达，诱导豆蔻酰化转移酶的表达，然后诱导可溶性P1蛋白的表达；/n步骤(4)从所述步骤(3)的表达体系中分离所述大肠杆菌的重组表达菌株，破碎菌体...

【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫病毒样颗粒抗原的制备方法，其中，所述方法包括：
步骤(1)分别克隆、重组口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1全长基因和豆蔻酰化转移酶的基因到表达载体，获得口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的重组表达质粒和豆蔻酰化转移酶的重组表达质粒；
步骤(2)将所述步骤(1)获得的所述口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的重组表达质粒和所述豆蔻酰化转移酶的重组表达质粒转化到大肠杆菌，获得所述大肠杆菌的重组表达菌株；
步骤(3)将所述步骤(2)的所述大肠杆菌的重组表达菌株培养表达，诱导豆蔻酰化转移酶的表达，然后诱导可溶性P1蛋白的表达；
步骤(4)从所述步骤(3)的表达体系中分离所述大肠杆菌的重组表达菌株，破碎菌体后分离上清液并纯化其中的P1蛋白；
步骤(5)使用3C蛋白酶酶切豆蔻酰化修饰的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1，得到VP0，VP3和VP1衣壳蛋白，其自我组装形成所述口蹄疫病毒样颗粒。


2.根据权利要求1所述的口蹄疫病毒样颗粒的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1基因为A型、Asia1型或O型的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1基因，所述豆蔻酰化转移酶基因为牛源的豆蔻酰化转移酶基因。


3.根据权利要求1所述的口蹄疫病毒样颗粒的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1基因如SEQID.No.1或其简并序列所示，所述豆蔻酰化转移酶基因如SEQID.No.2或其简并序列所示，所述表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的质粒为PET28a，所述表达豆蔻酰化转移酶的质粒为PET32a；
所述步骤(2)中所述大肠杆菌表达菌株为BL21(DE3)，所述口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，张素玲，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41