一种丙酮酸(PYR)的特异性生物传感器及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种快速检测丙酮酸(pyruvic acid，PYR)的方法，属于生物传感、分子检测和基因工程技术领域。本发明专利技术以来源于大肠杆菌(Escherichia coli K12)的转录调控因子PdhR，绿色荧光蛋白为报告基因构建了PYR特异性的生物传感器，建立了PYR与荧光强度的有效关系，并通过突变建库，筛选出对PYR响应度提高的PdhR突变体R1.0、R1.1和R1.3。该生物传感器在检测PYR及筛选PYR生产菌株及以PYR为前体的代谢产物的微生物方面具有重要的应用前景。

A pyruvate specific biosensor and its application

【技术实现步骤摘要】
一种丙酮酸(PYR)的特异性生物传感器及其应用
本专利技术涉及一种丙酮酸(pyruvicacid，PYR)的特异性生物传感器及其应用，属于基因工程

技术介绍
微生物合成途径提供了从廉价的可再生资源到有价值代谢产物的平台，如药品和化妆品等的生产。识别代谢途径潜在的限速步骤对调控目标产物的代谢流具有非常重要的指导意义，特别是检测代谢途径中的关键酶或者重要中间代谢物对代谢途径改造及评价至关重要。PYR是糖酵解途径(glycolysis)的产物，是合成苏氨酸和精氨酸等氨基酸和琥珀酸等产品极其重要的前体，同时也是进入三羧酸循环(TCA)的必经之路。因此建立对PYR的检测方法对很多有价值的产品的生产具有重要意义。现在普遍运用的HPLC、LC-MS和Westernblot等检测技术不仅繁琐而且不能及时检测分子浓度。特别是在高通量筛选高产菌株的过程中，代谢物检测大大限制了筛选效率。能够在体内感知和响应代谢物的生物传感器在生物研究和生物技术中有着广泛的应用。生物传感器在筛选中具有高通量鉴别小分子的优势，并且稳定性好，易于操作，为昂贵的体外筛选提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物传感器，其特征在于，含有启动子P

【技术特征摘要】
1.一种生物传感器，其特征在于，含有启动子PAP、PdhR基因、PdhR基因结合位点和编码标记物的基因；所述PAP上整合调控PdhR基因结合位点的序列，并调控编码标记物的基因表达；所述PdhR和编码标记物基因转录方向相反。


2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，启动子PAP、PdhR基因和PdhR基因结合位点位于载体上。


3.根据权利要求1或2所述的生物传感器，其特征在于，所述载体包括ptrc系列质粒。


4.根据权利要求1～3任一所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物为荧光蛋白。


5.含有权利要求1～4任一所述生物传感器的菌株。


6.一种构建权利要求1～4任一所述生物传感器的方法，其特征在于，将编码如SEQIDNO.2所示PdhR基因的核苷酸序列，如SEQIDNO.1所示的编码启动子PAP(包含SEQIDNO.3所示的PdhR结合位点)和标记物基因依次连接到载体ptrc99a上。


7.Pd...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大伟，丁冬芹，柏丹阳，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12