一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，包括如下步骤：茯苓菌丝体剂的制备；茯苓菌丝体木姜叶柯叶发酵处理；发酵茶的制备。本发明专利技术还提供了一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶提取物在对高脂喂养C57BL6J小鼠GDM模型缓解作用的应用。本发明专利技术的有益效果如下：汤色橙红明亮，香气由原来的略带青草气变得醇香，滋味变得更为醇和；人体所需的必需氨基酸含量增加；利用茶叶提取物辅助治疗妊娠糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus,GDM)模型小鼠，小鼠焦虑表型消失，葡萄糖耐量水平逐渐恢复至正常，胎儿和胎盘指数恢复至正常范围。

Preparation and application of a fermented tea from Poria cocos mycelia

【技术实现步骤摘要】
一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法及其应用。
技术介绍
妊娠糖尿病(GestationalDiabetesMellitus,GDM)发病率高，呈现逐年增加的趋势，严重危害母子妊娠期和产后健康。GDM的管控，主要沿用防治糖尿病的方式。尽管糖尿病防治取得了长足的进步，但对GDM的药物防治仍然存在许多不确定性，如给药途径、药物本身的毒副作用等，因此，从药食同源资源中开发GDM防治制剂非常必要。鉴于木姜叶柯叶资源丰富而利用率低，本试验以木姜叶柯粗老叶为原料，接种茯苓菌丝体，发酵制备木姜叶柯发酵茶，然后检测茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶对高脂喂养C57BL6J小鼠GDM模型的缓解作用，为有效合理开发利用木姜叶柯粗老叶提供理论及实践基础。木姜叶柯(Lithocarpuslitseifoliusfolium)又名甜茶(通称)、多穗石柯，为壳斗科石柯属植物，以野生形式零星分布于我国长江以南各省区的低山密林中，其中湖南中西部雪峰山脉一带分布较多。据《全国中草药汇编》记载，多穗柯茶能防治高血压、治疗湿热痢疾、皮肤瘙痒等症，而且具有滋养肝肾、和胃降逆、润肺止咳、解困醒酒等功效。现有科学研究表明，木姜叶柯的化学成分主要为黄酮类和三萜类成分，其中二氢查尔酮类是其主要的甜味成分和有效成分，在抗炎、镇痛、调节免疫、增强抗应激能力、降血脂、抗脂肪肝、抗II型糖尿病及糖尿病并发症、协同增进抗肿瘤药物疗效等方面有作用。鉴于木姜叶柯的甜度高、热量低、口感好，再加上其药用功效，已在2017年通过国家卫计委审批可以作为新资源食品使用。茯苓为多孔菌科真菌的干燥菌核，我国首载于《神农本草经》。作为我国传统的食药同源真菌，茯苓中富含多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶、矿质元素等多种活性成分，其中，茯苓多糖具有抗肿瘤、抗癌、抗病源微生物、抗炎、抗氧化、抗衰老、增强免疫力、保肝、催眠、消石、降血糖等药理活性。三萜类化合物具有调节免疫、抗肿瘤、抗HBV、保肝、抗白血病、抗衰老、抗炎、改善大脑记忆、防结石等功效。目前，茯苓的来源大多还是延续传统，以人工栽培为主，但是此方法容易受到外界环境以及生产条件的影响，存在生产周期长、对劳动力需求大、产品性质不稳定等缺点。现有研究表明，茯苓皮和茯苓发酵菌丝体中茯苓萜类化合物的含量显著高于茯苓块。因此，采用液态发酵技术生产茯苓功效成分，可达到缩短生长周期、活性成分稳定且可实现规模化自动化生产等优点。自20世纪70年代以来，中外学者己从茯苓皮、茯苓菌核或菌株培养液中提取分离了多种三萜类化合物。高学玲等研究了茯苓液态发酵产总三萜的提取工艺和最佳培养条件，张雪莉等研究了茯苓中三萜酸类化合物提取的最佳工艺，为提取研究实验提供了理论数据。张杨等茯苓发酵菌丝体中3种主要三萜酸类成分的积累动态，但是对于茯苓三萜类化合物的化学组成还有待研究。周燕丽等通过调控茯苓液态发酵条件，发现菌丝体的生长与其代谢产物的积累密切相关。微生物代谢产物的生理活性是目前国内外天然产物提取的研究热点，但是，关于茯苓菌丝体的代谢产物的生理活性研究的相关报道还非常有限，因此，从事相关科学研究具有很好的现实意义。发酵茶是以茶叶为基质，通过自然接种或人工接种微生物，借助微生物生长代谢作用使茶叶发生深度生化变化的产物，典型代表有黑茶(普洱茶和茯砖茶)。在黑茶渥堆发酵过程中，微生物产生的胞外酶作用和微生物呼吸产热作用下发生复杂的物质转化，如碳水化合物被分解成小分子的糖及可溶性糖，现出感官上的＂甘＂；叶中所含蛋白质在蛋白酶作用多种氨基酸，增加茶汤＂鲜爽＂；香物质及糖类反应产生萜烯醇类化合物呈现出陈香味；茶多酚经发酵部分转化为茶色素，赋予其独特的红褐汤色；同时微生物通过自身的代谢产生氨基酸、维生素、矿物质等营养物质一同进入茶汤被人们饮用，利于于人体的健康。魏晓惠向粗老绿毛茶中人工接种不同浓度的茯苓菌丝体进行发酵，发现可以缩短发花周期，改善绿毛茶原有的粗涩品质，形成独特的色香味品质。赵云林等研究了在绿茶样品接种茯苓菌丝体，通过控制温度和湿度，使得发酵茶兼具传统绿茶和茯砖茶的特点，提升了绿茶的内在品质及附加值。另外，还有科研工作者将茯苓菌丝体与荷叶茶、普洱茶、台湾茶、夏秋茶鲜叶的制备工艺结合，改善茶叶品质，提供茶叶附加值，开发新的茶叶加工工艺。近年来，发酵茶因为其独特的品质特点和保健功效，收到消费者的广泛喜爱，其中，茯砖茶作为黑茶中较为独特的一种，收到越来越多人的关注，引发许多学者的研究兴趣，而茯砖茶中特有的茯苓菌丝体是大家关注及研究的热点。茯苓菌丝体作为一种利于人体健康的优势菌种在茶产品加工、研制茶叶新产品方面还有待进一步的开发利用。俗话说：“春茶香，夏茶涩，秋茶好喝无人摘”。春茶滋味浓醇鲜爽，香气高雅而持久，适宜用于加工名茶，而夏秋茶中多酚类物质含量较高，氨基酸、维生素、芳香物质等含量偏低，使得夏秋茶口感苦涩，清香缺乏。但是，按照木姜叶柯树叶的生长规律及其叶片在生长不同阶段中活性成分的含量变化，仅对其嫩叶进行开发利用，造成了资源的极大浪费，因此，木姜叶柯粗老鲜叶的充分利用已是木姜叶柯生产基地一个亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于利用木姜叶柯粗老鲜叶进行茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的研究，分析JH-1木姜叶柯发酵茶产品发酵过程中化学成分和品质特征的变化，得出切实可行的发酵工艺，最终得到茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶产品，不仅可以提高木姜叶柯粗老鲜叶的利用率，同时，还可以利用微生物发酵技术，开发具有特殊风味及营养保健功效的新型微生物发酵茶制品，使产品品质得到改善，丰富了产品种类。最后，在得到茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶产品的基础上，研究其对高脂喂养C57BL6J小鼠GDM模型的缓解作用，促进了茶叶生物技术的研究，为功能性食品的研究提供科学的理论依据。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，包括如下步骤：步骤一、茯苓菌丝体剂的制备；挑取茯苓菌丝体保存菌株，接种入PDB培养液体基，28℃静置培养24h，震荡混匀，倍比稀释，以105-108稀释度涂布入PDA培养固体基，28℃倒置培养3d，直至出现典型单菌落；挑取典型单菌落接种入PDB培养液体基，28℃培养3d，收集培养液，在4℃温度下，5000rpm离心5min分离收集菌体，用无菌生理盐水洗涤3次，加入无盐离子的营养液，震荡混匀，在-20℃温度冷冻过夜，在-80℃温度冷冻40min，再进行冷冻干燥处理，冷冻干燥处理后的菌种以1mg/瓶，装瓶，置于-20℃温度冰箱保存，即为茯苓菌丝体剂；步骤二、茯苓菌丝体木姜叶柯叶发酵处理；准确称取一定量经过杀青处理的木姜叶柯叶和质量体积1:1的饮用水，混匀，装入干湿分离的发酵容器，121℃温度灭菌30min，取出冷却，按照1mg/100g的木姜叶柯叶接种茯苓菌丝体剂，摇匀，28℃温度培养4d；步骤三、发酵茶制备；充分发酵后的木姜叶柯叶经过121℃温度灭菌30min，成型，烘干，得到茯苓菌丝体木姜叶柯叶发酵茶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一、茯苓菌丝体剂的制备；/n挑取茯苓菌丝体保存菌株，接种入PDB培养液体基，28℃静置培养24h，震荡混匀，倍比稀释，以10

【技术特征摘要】
1.一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、茯苓菌丝体剂的制备；
挑取茯苓菌丝体保存菌株，接种入PDB培养液体基，28℃静置培养24h，震荡混匀，倍比稀释，以105-108稀释度涂布入PDA培养固体基，28℃倒置培养3d，直至出现典型单菌落；
挑取典型单菌落接种入PDB培养液体基，28℃培养3d，收集培养液，在4℃温度下，5000rpm离心5min分离收集菌体，用无菌生理盐水洗涤3次，加入无盐离子的营养液，震荡混匀，在-20℃温度冷冻过夜，在-80℃温度冷冻40min，再进行冷冻干燥处理，冷冻干燥处理后的菌种以1mg/瓶，装瓶，置于-20℃温度冰箱保存，即为茯苓菌丝体剂；
步骤二、茯苓菌丝体木姜叶柯叶发酵处理；
准确称取一定量经过杀青处理的木姜叶柯叶和质量体积1:1的饮用水，混匀，装入干湿分离的发酵容器，121℃温度灭菌30min，取出冷却，按照1mg/100g的木姜叶柯叶接种茯苓菌丝体剂，摇匀，28℃温度培养4d；
步骤三、发酵茶制备；
充分发酵后的木姜叶柯叶经过121℃温度灭菌30min，成型，烘干，得到茯苓菌丝体木姜叶柯叶发酵茶。


2.根据权利要求1所述的一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，其特征在于，所述发酵容器为带隔层滤网的广口发酵瓶。


3.根据权利要求1所述的一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶的制备方法，其特征在于，在步骤二中，准确称取500.00g木姜叶柯和500mL饮用水，并接种5～10支茯苓菌丝体剂。


4.一种茯苓菌丝体木姜叶柯发酵茶对高脂喂养C57BL6J小鼠GDM模型的缓解作用的应用，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、发酵茶浸提液制备及冻干；
称取500g茶叶，加入8倍质量体积分数的60％的乙醇溶液，室温浸提4h，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐君飞，张居作，张琴，彭瑶，郑芳秋，
申请(专利权)人：怀化学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43