矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，包括S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2‑3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定、评分；S2：对上述叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标的得分进行加和，确定矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝等级。本发明专利技术通过叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标对矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，操作方法简便，鉴定结果准确，有利于筛选耐涝种质资源，为矮牵牛耐涝分子育种奠定了基础。

Identification of Waterlogging Tolerance of Petunia pherf2 transgenic line and its wild type

【技术实现步骤摘要】
矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法
本专利技术涉及植物栽培与育种
，尤其涉及矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法。
技术介绍
矮牵牛(Petunia×hybrida)为茄科多年生草本植物，是重要的园林景观花卉，市场需求量大，涝渍胁迫是制约其生产应用的主要因素。减少涝害的主要途径除通过水利设施降低地下水位外，最根本有效的方法是进行抗逆分子育种，选育耐涝性较好的品种应用于生产。ERF(EthyleneResponsiveFactor)转录因子是植物AP2/ERF转录因子超家族的一个亚家族，广泛参与植物各种逆境胁迫反应的调控，在转基因育种应用中具有巨大潜力。矮牵牛乙烯响应因子PhERF2属于ERF型转录因子VII亚族，与拟南芥AtRAP2.2(RelatedtoApetala2.2)高度同源，现有的研究已证实RAP2.2是拟南芥调控涝渍响应的重要基因。PhERF2作为转录激活因子或转录抑制因子在转录水平激活或抑制靶标基因表达，在植物抗逆反应中起重要作用。ERF转录因子在转基因育种应用中具有巨大的潜力。通过转基因技术改变ERF基因表达水平或ERF蛋白活性有可能获得抗逆性转基因作物新品种或新材料。改变ERF基因后可同时提高抗病性和非生物逆境抗性，表现出广谱性，为通过改变一个ERF转录因子基因的表达或其蛋白活性达到改良多个生物学性状提供可能。前人在矮牵牛的抗热、抗病等方面的研究都取得了一些成就，但对矮牵牛耐涝性的研究却鲜见报道。因此，急需开发一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法以利于筛选耐涝种质资源，为矮牵牛耐涝分子育种奠定基础。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，通过叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三个生理指标对矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，操作方法简便，鉴定结果准确，有利于后续矮牵牛种质资源耐涝性评价、耐涝机理研究，并改良和利用耐性种质，为耐性分子育种奠定了基础。为了实现上述目的，本专利技术提供的一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，各指标的定级范围及得分标准分别为：(1)叶绿素(a+b)含量指标定级范围及得分标准为：I级：叶绿素≥1.2mg/g·FW，得5分；II级：叶绿素1.0～1.2mg/g·FW，得4分；III级：叶绿素0.9～1.0mg/g·FW，得3分；IV级：叶绿素0.7～0.9mg/g·FW，得2分；V级：叶绿素≤0.7mg/g·FW，得1分；(2)叶片丙二醛含量指标定级范围及得分标准为：I级：叶片丙二醛≤3μmol/g·FW，得5分；II级：叶片丙二醛3～4μmol/g·FW，得4分；III级：叶片丙二醛4～6μmol/g·FW，得3分；IV级：叶片丙二醛6～7μmol/g·FW，得2分；V级：叶片丙二醛≥7μmol/g·FW，得1分；(3)根系活力指标定级范围及得分标准为：I级：根系活力≥700μgTTC/g·h，得4分；II级：根系活力600～700μgTTC/g·h，得3分；III级：根系活力500～600μgTTC/g·h，得2分；IV级：根系活力≤500μgTTC/g·h，得1分；S2：对上述叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标的得分进行加和，确定矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝等级，耐涝等级确定标准为：综合筛选等级I：总分值13～14，耐涝；综合筛选等级II：总分值9～12，中度耐涝；综合筛选等级III：总分值≤8，不耐涝。本专利技术提供的矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，具有如下有益效果。本专利技术针对目前矮牵牛耐涝研究工作基础薄弱以及耐涝鉴定方法不完善等缺陷，通过叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三个生理指标对矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，操作方法简便，鉴定结果准确，有利于后续矮牵牛种质资源耐涝性评价、耐涝机理研究，并改良和利用耐性种质，为耐性分子育种奠定了基础，可用于矮牵牛耐涝育种，优选耐涝资源的研究和利用。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，以助于理解本专利技术的内容。本专利技术提供的矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，具体包括如下步骤：S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，各指标的定级范围及得分标准分别为：(1)叶绿素(a+b)含量指标定级范围及得分标准为：I级：叶绿素≥1.2mg/g·FW，得5分；II级：叶绿素1.0～1.2mg/g·FW，得4分；III级：叶绿素0.9～1.0mg/g·FW，得3分；IV级：叶绿素0.7～0.9mg/g·FW，得2分；V级：叶绿素≤0.7mg/g·FW，得1分；(2)叶片丙二醛含量指标定级范围及得分标准为：I级：叶片丙二醛≤3μmol/g·FW，得5分；II级：叶片丙二醛3～4μmol/g·FW，得4分；III级：叶片丙二醛4～6μmol/g·FW，得3分；IV级：叶片丙二醛6～7μmol/g·FW，得2分；V级：叶片丙二醛≥7μmol/g·FW，得1分；(3)根系活力指标定级范围及得分标准为：I级：根系活力≥700μgTTC/g·h，得4分；II级：根系活力600～700μgTTC/g·h，得3分；III级：根系活力500～600μgTTC/g·h，得2分；IV级：根系活力≤500μgTTC/g·h，得1分；S2：对上述叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标的得分进行加和，确定矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝等级，耐涝等级确定标准为：综合筛选等级I：总分值13～14，耐涝；综合筛选等级II：总分值9～12，中度耐涝；综合筛选等级III：总分值≤8，不耐涝。采用PhERF2过表达株系C、D、I和RNAi沉默株系1A、1B、4B以及野生型WT为试材，将上述矮牵牛PhERF2的六个转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，三种生理指标测定结果详见表1。接着对矮牵牛PhERF2的六个转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，鉴定结果详见表2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，其特征在于，具体包括如下步骤：/nS1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，各指标的定级范围及得分标准分别为：/n(1)叶绿素(a+b)含量指标定级范围及得分标准为：/nI级：叶绿素≥1.2mg/g·FW，得5分；/nII级：叶绿素1.0～1.2mg/g·FW，得4分；/nIII级：叶绿素0.9～1.0mg/g·FW，得3分；/nIV级：叶绿素0.7～0.9mg/g·FW，得2分；/nV级：叶绿素≤0.7mg/g·FW，得1分；/n(2)叶片丙二醛含量指标定级范围及得分标准为：/nI级：叶片丙二醛≤3μmol/g·FW，得5分；/nII级：叶片丙二醛3～4μmol/g·FW，得4分；/nIII级：叶片丙二醛4～6μmol/g·FW，得3分；/nIV级：叶片丙二醛6～7μmol/g·FW，得2分；/nV级：叶片丙二醛≥7μmol/g·FW，得1分；/n(3)根系活力指标定级范围及得分标准为：/nI级：根系活力≥700μgTTC/g·h，得4分；/nII级：根系活力600～700μgTTC/g·h，得3分；/nIII级：根系活力500～600μgTTC/g·h，得2分；/nIV级：根系活力≤500μgTTC/g·h，得1分；/nS2：对上述叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标的得分进行加和，确定矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝等级，耐涝等级确定标准为：/n综合筛选等级I：总分值13～14，耐涝；/n综合筛选等级II：总分值9～12，中度耐涝；/n综合筛选等级III：总分值≤8，不耐涝。/n...

【技术特征摘要】
1.矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，各指标的定级范围及得分标准分别为：
(1)叶绿素(a+b)含量指标定级范围及得分标准为：
I级：叶绿素≥1.2mg/g·FW，得5分；
II级：叶绿素1.0～1.2mg/g·FW，得4分；
III级：叶绿素0.9～1.0mg/g·FW，得3分；
IV级：叶绿素0.7～0.9mg/g·FW，得2分；
V级：叶绿素≤0.7mg/g·FW，得1分；
(2)叶片丙二醛含量指标定级范围及得分标准为：
I级：叶片丙二醛≤3μmol/g·FW，得5分；
II级：叶片丙二醛3～4μmol/g...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹冬梅，韩竹青，高腾，高巍，王月悦，赵安琪，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：上海;31