岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖及其制备方法、组合物和用途技术

本发明专利技术公开了具有J所示结构的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖，其中取代基的定义详见说明书。此外，还公开了该岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖的制备方法：以硫酸软骨素A盐为原料，依次经过酶解、保护基操作、糖基化，合成该寡糖化合物，其结构的确定性使其能够应用到医药领域。

Fucosylated chondroitin sulfate oligosaccharide and its preparation, composition and use

【技术实现步骤摘要】
岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖及其制备方法、组合物和用途
本专利技术涉及药物化学
，更具体地说，涉及一种岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖，及其制备方法、组合物，和该化合物的用途。
技术介绍
岩藻糖基化硫酸软骨素是一类从海参中提取得到的糖胺聚糖，其结构以硫酸软骨素聚糖为骨架，同时在醛酸糖的3-位羟基连有岩藻糖侧链，并在不同位点具有磺酸根基团，由此组成三糖重复单元(J.Biol.Chem.1988,263,18176)。岩藻糖基化硫酸软骨素具有抗凝血、抗HIV、抗炎、创伤修复等生物学功能(Mar.Drugs2014,12,232)。其中抗凝血活性与肝素类药物相比具有不同的药理学机制，大大减小了出血风险(PNatlAcadSciUSA,2015,112,8284)，并且口服有效(Thromb.Haemostasis,2006,96,822)，因而具有良好的发展前景与较大的研究价值。天然提取的岩藻糖基化硫酸软骨素聚糖具有激活因子XII和血小板减少的副作用，为了解决该问题，发展了多种降解聚糖的方法，包括自由基降解(Food.Chem,20本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种如J所示的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖：/n

【技术特征摘要】
20180716 CN 20181077873361.一种如J所示的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖：



式J中Ac为乙酰基；q为正整数，且q≤10；Y为H、碱金属、碱土金属、或N(R6)4，这里，R6为C1-C4烷基；R为叠氮基、C1-C4烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷酰硫基、苯甲酰氧基、或苯甲酰硫基。


2.如权利要求1所述的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖，其中，R为叠氮基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷酰硫基、苯甲酰氧基、或苯甲酰硫基时，为β构型；R为C1-C4烷氧基时，为α构型。


3.如权利要求1所述的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖，其中，式J中q为1、2、3、或4；Y为H、钠、锂、钾、钙、或镁；优选地，式J中q为1、2、3、或4；Y为钠。


4.如权利要求1-3中任一项所述的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖的合成方法，所述方法包括如下步骤：
(1)式A化合物(即硫酸软骨素M盐，优选地，M为钠)在无机酸的C1-C4烷醇溶液中，脱除磺酸根，并用MOH碱处理，得到式B化合物；其中，式A中m和式B中n为正整数，且20≤n≤m；



(2)式B化合物在含有氯化钠的弱酸性缓冲溶液中，在透明质酸酶的作用下得到式C化合物；这里，所述的透明质酸酶来源于动物睾丸，活力400-1000IU/mg；选自牛睾丸或绵阳睾丸；优选自牛睾丸；q为1～10的正整数；



(3)式C化合物与亲核试剂RX反应，得到式D化合物；



(4)式D化合物在R1C(O)H或R1C(O)H缩二脂肪醇的存在下，在酸催化下选择性保护式D化合物乙酰氨基半乳糖残基的4,6二羟基，得到式E化合物；






(5)式E化合物在酸酐R2-O-R2的作用下环合，然后在碱的催化下，在R3OH溶液中打开内酯环，得到式F化合物；



(6)式F化合物在酸催化作用下，与岩藻糖供体式G化合物反应得到式H化合物；



(7)式H化合物在酸作用下脱除氨基半乳糖4,6-OH保护，然后选择性脱除岩藻糖上保护基R4得到式I化合物；



(8)式I化合物经过硫酸化与脱保护操作得到式J′化合物；



这里，式D～式J化合物、RX中，R为叠氮基、C1-C4烷氧基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷酰硫基、苯甲酰氧基、或苯甲酰硫基；优选地，R为叠氮基、苯氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷酰硫基、苯甲酰氧基、或苯甲酰硫基时，为β构型；R为C1-C4烷氧基时，为α构型；
RX中X为氢、或碱金属；
R1C(O)H或R1C(O)H缩二脂肪醇、式E～式H化合物中，R1为未取代的苯基或取代的苯基，这里，所述取代的苯基是指苯环被一个或两个以上取代基所取代，所述取代基选自卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、和C1-C4烷氧基中的一种或多种；并且，任选地，所述取代基在苯环的任意位置；优选地，选自苯基，4-甲氧基苯基，4-氯代苯基、和4-溴代苯基中的一种，更优选地，选自苯基、和4-甲氧基苯基中的一种；这里，所述R1C(O)H或R1C(O)H缩二脂肪醇中脂肪醇为C1-C4烷醇，优选地为甲醇；
酸酐R2-O-R2、或式F～式I化合物中，R2选自脂肪族酰基、未取代的苯甲酰基或取代的苯甲酰基、和乙酰丙酰基中的一种；这里，所述脂肪族酰基是指C2-C6烷酰基；所述取代的苯甲酰基是指苯环被一个或两个以上的取代基所取代、所述取代基选自卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、和C1-C4烷氧基中的一种或多种；并且，任选地，所述取代基在苯环的任意位置；优选地，R2选自乙酰基、苯甲酰基、4-氯代苯甲酰基、和4-溴代苯甲酰基中的一种，更优选地选自乙酰基、和苯甲酰基中的一种；
R3OH、或式F～式I化合物中，R3选自未取代的苄基或取代的苄基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和烯丙基中的一种；这里，所述取代的苄基是指苯环被一个或两个以上取代基所取代，所述取代基选自卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、和C1-C4烷氧基中的一种或多种；并且，任选地，所述取代基在苯环的任意位置；优选地，R3选自甲基、乙基、烯丙基、苄基、和4-甲氧基苄基中的一种，更优选地选自甲基、乙基、和苄基中的一种；
式G～式H化合物中，R4选自未取代苄基或者取代的苄基；所述取代的苄基是指苯环被一个或两个以上的取代基所取代、所述取代基选自卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、和C1-C4烷氧基中的一种或多种；并且，任选地，所述取代基在苯环的任意位置；优选地，R4为苄基或者对甲氧苄基；
式G～式I化合物中，R5选自脂肪族酰基、未取代的苯甲酰基或取代的苯甲酰基、和乙酰丙酰基中的一种；这里，所述脂肪族酰基是指C2-C6烷酰基；所述取代的苯甲酰基是指苯环被一个或两个以上的取代基所取代、所述取代基选自卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、和C1-C4烷氧基中的一种或多种；并且，任选地，所述取代基在苯环的任意位置；优选地，R5选自乙酰基、苯甲酰基、乙酰丙酰基、4-氯代苯甲酰基、和4-溴代苯甲酰基中的一种，更优选地为乙酰基、乙酰丙酰基或苯甲酰基；
式G化合物中Et为乙基；
式A～式D和MOH碱中，M为钠、钾、锂或钙，优选地选自钠。


5.如权利要求4所述的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖的合成方法，其中，所述步骤(1)，无机酸选自氯化氢、硫酸、硝酸、和磷酸中一种或多种，优选地，为氯化氢、或硫酸；C1-C4烷醇为甲醇、或乙醇，优选地，选自甲醇；所述MOH碱为NaOH、KOH、或LiOH，优选地，为NaOH。


6.如权利要求1所述的岩藻糖基化硫酸软骨素寡糖的合成方法，其中，所述步骤(2)中，作为优选，透明质酸酶的活度在400-1000IU/mg，加入量为软骨素即式B化合物质量的2.0-3.0％，反应温度为37℃；所述弱酸性指缓冲液pH值为3.0-6.5，优选地选自5.0-5.2；所述缓冲溶液指乙酸-乙酸钠缓冲液，乙酸-乙酸钾缓冲液，磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液或磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液的一种，优选自乙酸-乙酸钠缓冲液；所述缓冲液浓度选自0.01M到1M之间，优选地，选自0.1M乙酸-乙酸钠缓冲液；一定浓度的氯化钠指氯化钠浓度选自0.05M到0.5M之间，优选地，选自0.15M；所述透明质酸酶选自动物睾丸来源的透明质酸酶；
任选地，所述步骤(3)中，当RX为叠氮钠、苯酚钠、C1-C4烷硫基钠、C1-C4烷酰硫基钠、苯甲酸钠、或苯甲酰硫基钠时，式C化合物在碱性溶液中，在2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑啉作用下，与叠氮钠、苯酚钠、C1-C4烷硫基钠、C1-C4烷酰硫基钠、苯甲酸钠、或苯甲酰硫基钠反应，得到式D化合物，并且式D化合物中为β构型；这里，所述碱性溶液所用有机碱选自三乙胺、N-甲基吗啉、吡啶、2，6-二甲基吡啶、和二异丙基乙基胺中的一种或多种；当RX为C1-C4烷基醇时，式C化合物在HCl的烷基醇溶液中反应过夜，然后在碱性条件下释放羧基得到式D化合物，并且式D化合物中为α构型；这里，所述碱性条件下所用无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、和氢氧化锂中的一种或多种；
任选地，所述步骤(4)中，酸催化下指下列质子酸或路易斯酸存在下：优选地，在对甲基苯磺酸、或樟脑磺酸存在下；
任选地，所述步骤(5)中，所用的碱选自甲醇钠、和醋酸钠中的一种或多种；
任选地，所述步骤(6)中，酸催化下指下列质子酸或路易斯酸存在下：选自三氟甲磺酸、三氟甲磺酸烷基硅脂、三氟甲磺酸金属盐、和三氟化硼乙醚中的一种或多种，优选地，选自三氟甲磺酸金属盐；所述反应是在有机溶剂中进行的，所述有机溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、乙醚、和甲苯中的一种或多种，优选地，选自二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂，二氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：李中军，张肖，刘慧颖，姚望，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11