碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0‑9.0，所述碱性金属蛋白酶取自黏质沙雷氏菌。该制剂性质稳定，通过对寄主植物和对病毒两个方面起作用，具有良好抗病毒效果，并且对环境友好。

【技术实现步骤摘要】
碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂及其应用
本专利技术涉及农药
，尤其涉及碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用。
技术介绍
烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus，TMV)是烟草花叶病等的病原体，具有广泛的寄主范围，可侵染十字花科、茄科和葫芦科等至少9个科125种植物，其发生频率高、流行快、为害重、难治理，一旦植物染病，无法得到有效的控制，极易引发病毒病的流行，造成严重的经济损失。每年因TMV造成的经济损失高达数十亿美元。目前在病毒病害治理中主要采用抗病毒品种的选育、传毒媒介防控及交叉保护等方式，而针对植物病毒病的有效化学农药种类少，亟待农业科研人员去解决。黏质沙雷氏菌是一种在自然生境中广泛存在的革兰氏阴性细菌，在土壤、水等环境中都可以生存。在土壤中，有些菌株是植物根际促生菌，例如，自土壤中分离得到的Serratiamarcescens-90-166可以通过群体感应机制诱导植物产生系统抗性，并能提高植物对包括黄瓜花叶病毒在内的几种植物病原体的侵染。此外，黏质沙雷氏菌还能产生多种胞外酶，包括丝胶酶、几丁质酶、金属蛋白酶、脂肪酶、硫醇蛋白酶和核酸酶等。黏质沙雷氏菌属胞外蛋白在医药、工业等领域都有研究应用，但在农业方面研究极少，而且市场上也没有相关产品的应用。因此，针对上述问题，有必要提出进一步地解决方案。
技术实现思路
本专利技术旨在提供碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用，以克服现有技术中存在的不足。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：碱性金属蛋白酶在防治烟草花叶病毒中的应用。优选地，所述碱性金属蛋白酶取自黏质沙雷氏菌。优选地，所述碱性金属蛋白酶的质量为45-55kDa。优选地，所述碱性金属蛋白酶的质量为50kDa。优选地，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0-9.0。本专利技术还公布了一种含碱性金属蛋白酶的制剂，所述制剂的有效成分为碱性金属蛋白酶，以及植物生长调节剂和/或稳定剂。优选地，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0-9.0。优选地，所述制剂中碱性金属蛋白酶的浓度为80-120μg/mL。优选地，所述植物生长调节剂为氨基寡糖素，优选地，所述稳定剂为海藻糖。本专利技术还公布了一种含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用。优选地，将所述含碱性金属蛋白酶的制剂加热至40-50℃后喷洒。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术公开了一种碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用，其性质稳定，通过对寄主植物和对病毒两个方面起作用，具有良好抗病毒效果，并且对环境友好。附图说明图1为抗TMV菌株的16SrRNA片段琼脂糖凝胶电泳图；图2为黏质沙雷氏菌菌株形态特征、抗TMV效果及系统进化树，其中，a:半叶法显示S3对TMV的抑制效果；b:菌落形态；c:S3电镜图片；d:利用ClustalW方法分析得到的S3的16S序列的系统进化树，标尺：5％；图3为S3菌株发酵上清的催芽效果；图4为S3菌株发酵上清的促生效果；图5为S3菌株在叶片和土壤中的存活情况；图6为络氨酸标准曲线图；图7为酸碱度对SAMP酶活力和酶稳定性的影响；图8为温度对SAMP酶活力和酶稳定性的影响；图9为不同浓度SAMP对TMV的抑制效果；图10为在本氏烟叶片内SAMP对TMV的抑制效果。具体实施方式参选以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本专利技术的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本专利技术并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本专利技术不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。此外，本专利技术要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。本实施例中所用植物材料为TMV的枯斑寄主三生烟(Nicotiana.tabacumcv.SunsamNN)，由本申请人留种繁殖，培养于温室中。植物培养条件：光照16h，温度25±1℃，光照强度2000lux，相对湿度60％；黑暗时长8h，温度25±1℃，相对湿度60％。所用营养基质由山东省寿光市沃德营养土加工厂生产，植物生长期间无需额外施肥。TMV毒源采集于山东省青岛市，并于温室中栽培的普通烟草NC89上繁殖保存。将黏质沙雷氏菌接种到含有利福平的培养基平板上培养，利福平的浓度从低至高(50-250μmol/mL)慢慢增加，最终通过梯度筛选得到对250μmol/mL利福平具有抗性的黏质沙雷氏菌。将带有利福平抗性的黏质沙雷氏菌过夜振荡培养(28℃，120rpm)平均分为3份，其中两份分别与自然土样和灭菌的土样混匀，另一份喷洒到K326烟草的叶片上。处理后当本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.碱性金属蛋白酶在防治烟草花叶病毒中的应用，其特征在于，所述碱性金属蛋白酶的质量为45-55kDa，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0-9.0。/n

【技术特征摘要】
1.碱性金属蛋白酶在防治烟草花叶病毒中的应用，其特征在于，所述碱性金属蛋白酶的质量为45-55kDa，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0-9.0。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述碱性金属蛋白酶取自黏质沙雷氏菌。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述碱性金属蛋白酶的质量为50kDa。


4.一种含碱性金属蛋白酶的制剂，其特征在于，所述制剂的有效成分为碱性金属蛋白酶，以及植物生长调节剂和/或稳定剂。


5.根据权利要求4所述的含碱性金属蛋白酶的制剂，其特征在于，调节所述碱性金属蛋白酶的pH...

【专利技术属性】
技术研发人员：王杰，王凤龙，江连强，秦元霞，刘东阳，杨金广，凌爱芬，申莉莉，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，四川省烟草公司凉山州公司，
类型：发明
国别省市：山东;37