人白细胞介素27α-亚基的能够分泌的突变蛋白制造技术

本发明专利技术涉及一种人白细胞介素27的α‑亚基的能够分泌的突变蛋白和涉及一种人异二聚体白细胞介素27。本发明专利技术进一步涉及一种核酸分子，所述核酸分子包含编码人白细胞介素27的α‑亚基的能够分泌的突变蛋白或所述人异二聚体白细胞介素27的核苷酸序列，涉及一种宿主细胞，所述宿主细胞含有一种核酸分子，所述核酸分子包含编码人白细胞介素27的α‑亚基的能够分泌的突变蛋白或人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白的核苷酸序列。本发明专利技术还涉及一种免疫调节剂，所述免疫调节剂包含人白细胞介素27的α‑亚基的能够分泌的突变蛋白或人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白，涉及其相应的用途以及涉及一种生产所述能够分泌的突变蛋白的方法和涉及一种小鼠白细胞介素27的α‑亚基的不能分泌的突变蛋白和小鼠白细胞介素27的β‑亚基的能够分泌的突变蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人白细胞介素27α-亚基的能够分泌的突变蛋白
本专利技术涉及一种人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的能够分泌的(secretion-competent)突变蛋白(突变体蛋白)和涉及一种人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白，其中该突变蛋白的α-亚基为人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的能够分泌的突变蛋白。本专利技术还涉及一种人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白，其中所述突变蛋白与人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)具有至少76％的序列同一性。本专利技术还涉及一种人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白，其中所述突变蛋白的α-亚基与人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)具有至少76％的序列同一性。白介素27包含α-亚基p28和β-亚基EBI3。本专利技术进一步涉及一种核酸分子，其包含编码人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或编码人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白的核苷酸序列，其中所述突变蛋白的α-亚基为如本文所述的人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白。本专利技术进一步涉及一种宿主细胞，其含有一种核酸分子，所述核酸分子包含编码人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白的核苷酸序列，其中所述突变蛋白的α-亚基为如本文所述的人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白。本专利技术还涉及一种免疫调节剂，所述免疫调节剂包含人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或包含人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白，其中该突变蛋白的α-亚基为如本文所述的人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白；涉及如本文所述的人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或如本文所述的人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白在制备药物中的用途；涉及一种治疗白细胞介素27介导的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳动物施用包含本专利技术所述的突变蛋白的组合物的步骤；以及涉及一种生产人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或人异二聚体白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白的方法，其中该突变蛋白的α-亚基为如本文所述的人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白或与人白细胞介素27的α-亚基具有至少76％的序列同一性的能够分泌的突变蛋白。此外，本专利技术还涉及如本文所述的任何突变蛋白用在感染性疾病、自身免疫病、癌症、比如移植物抗宿主病的移植相关疾病、比如慢性炎性肠病的慢性炎性疾病、急性炎性疾病、败血症、败血性休克、糖尿病或哮喘的治疗中。本专利技术进一步涉及一种小鼠白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：10)的不能分泌的(secretion-incompetent)突变蛋白，其中在氨基酸位置103和158处的两个半胱氨酸残基中的至少一个突变或缺失。由于这种突变或缺失，通常能够分泌的小鼠白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：10)变得不能分泌，这意味着所述分泌取决于EBI3的存在。由此，小鼠白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：10)的行为类似于人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)，这对于旨在模拟(imaging)人免疫系统的小鼠模型而言是极为必要的。本专利技术还提供了一种小鼠白细胞介素27的β-亚基(SEQIDNO：35)的能够分泌的突变蛋白，其中在氨基酸位置198处的氨基酸残基中的至少一个突变或缺失。人的白细胞介素27的β-亚基可以单独分泌，而小鼠的白细胞介素27的β-亚基天然地不能分泌。如本文所述，小鼠白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：10)的突变蛋白与小鼠白细胞介素27的β-亚基(SEQIDNO：35)的能够分泌的突变蛋白一起展示人系统的拟表型。此外，本专利技术还提供一种小鼠白细胞介素27的突变蛋白，其包含α-亚基p28和β-亚基EBI3，其中所述α-亚基为如本文所述的小鼠白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：10)的不能分泌的突变蛋白，和/或其中所述β-亚基为如本文所述的小鼠白细胞介素27的β-亚基(SEQIDNO：35)的能够分泌的突变蛋白。
技术介绍
人免疫系统的中心原则是促炎和抗炎应答的平衡调节。这一原则使得在保护宿主的同时快速消除威胁。白细胞介素(IL)是结构多样的小分泌蛋白，其介导促炎和抗炎应答以维持这种平衡。在白细胞介素中，包含四个已确定的成员(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35)1的白细胞介素12(IL-12)家族集中体现了这种平衡的免疫调节概念：IL-12和IL-23主要是促炎细胞因子，而IL-35起免疫抑制作用1，2。IL-27是功能多样的，具有免疫调节性促炎和抗炎功能，作用于不同类型的T细胞3。IL-27可以促进促炎应答，并与IL-12协同诱导初始T细胞和自然杀伤(NK)细胞产生干扰素γ(IFNγ)4；然而IL-27也可以通过诱导IL-10作为抗炎细胞因子5-7或抑制TH17细胞的应答8，9来抑制免疫应答，TH17细胞是一种因其在多种免疫介导的人类疾病中的作用而备受关注的细胞类型10。白细胞介素12(IL-12)细胞因子调节T细胞功能和发育，决定性地影响促炎与抗炎应答。每个家族成员都是异二聚体，此外，它们的分离的亚基还调节免疫反应。这赋予了IL-12家族无与伦比的调节能力，但同时也对其生物合成提出了很高的要求。本专利技术的专利技术人惊讶地发现，单个氨基酸的差异决定了IL-12家族亚基是否可以自主地分泌，从而作为独立的细胞因子，或者决定了这些亚基是否依赖于异二聚化作用来分泌。然而，IL-12家族所共有的特征在连接先天和适应性免疫方面超出了这一中心作用。所有IL-12细胞因子均显示出使该家族与其他白细胞介素不同的结构特征：每个IL-12家族成员均是由4-螺旋束α-亚基(分别为IL-12α/p35、IL-23α/p19和IL-27α/p28)和β-亚基组成的异二聚体，所述β-亚基由两个纤连蛋白(Fn)结构域(EBI3)或两个Fn和一个免疫球蛋白(Ig)结构域(IL-12β/p40)组成11，12。值得注意的是，尽管IL-12家族成员在调节免疫应答中具有不同的作用，但所有异二聚体IL-12家族成员仅由这三种α-亚基和两个β-亚基组成，甚至可能还存在其他成员13。IL-12β由促炎家族成员IL-12和IL-23共有，而EBI3由免疫调节/抗炎成员IL-27和IL-35共有。由此提出了关于该家族中介导装配特异性与装配混乱性的结构特征的重要问题。其还对内质网(ER)中蛋白质折叠和质量控制的机制提出了额外的要求，在分泌前所有IL-12家族成员均在内质网中进行装配。迄今为止，对IL-12家族细胞因子折叠和装配的了解非常有限。研究表明，所有人α-亚基均被独立地(inisolation)保留在细胞中，并依赖于和与它们同源的β-亚基的装配才能被分泌4，14，15。就该家族的创始成员IL-12而言，由IL-12β装配诱导的IL-12α-亚基折叠是这些过程的基础16，但除此之外，其潜在机制仍然是不明确的。就本专利技术而言，专利技术人聚焦于结构尚未明确表征且功能上高度多样的家族成员IL-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人白细胞介素27的α-亚基(SEQ ID NO：1)的能够分泌的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQ ID NO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170504 EP 17169358.31.一种人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的能够分泌的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


2.根据权利要求1所述的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


3.根据权利要求1或2所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白与人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)具有至少76％的序列同一性。


4.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160至165处的氨基酸残基中的至少一个突变，和/或其中在序列位置180至182处的氨基酸残基中的至少一个突变。


5.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置161、162、163、164和165的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


6.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


7.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


8.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置161、162、163、164和165的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


9.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160至163处的氨基酸残基中的至少一个突变。


10.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置161至163处的氨基酸残基中的至少一个突变。


11.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置180至182处的氨基酸残基中的至少一个突变。


12.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：3)。


13.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置161处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：4)。


14.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置162处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：2)。


15.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置163处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：5)。


16.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置164处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：33)。


17.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置165处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：34)。


18.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置180处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：6)。


19.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置181处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：7)。


20.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置182处的氨基酸残基被半胱氨酸替换(SEQIDNO：8)。


21.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白进一步包含一个或多个盐桥，优选地，其中通过用相等带电氨基酸替换序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182中的至少两处，更优选地，通过用天冬氨酸和谷氨酸或精氨酸和赖氨酸替换序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182中的两处，建立所述一个或多个盐桥。


22.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白进一步包含一个或多个二硫桥。


23.一种人白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白，其包含α-亚基p28和β-亚基EBI3，其中所述α-亚基为权利要求1至22中任一项所述的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的能够分泌的突变蛋白。


24.根据权利要求23所述的突变蛋白，其中所述α-亚基与人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)具有至少76％的序列同一性。


25.根据权利要求23或24所述的突变蛋白，其中在序列位置160至165处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变，和/或其中在序列位置180至182处的氨基酸残基中的至少一个突变。


26.根据权利要求23至25中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置161、162、163、164和165的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


27.根据权利要求23至26中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


28.根据权利要求23至27中任一项所述的突变蛋白，其中选自序列位置161、162、163、164和165的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


29.根据权利要求23至28中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160至163处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


30.根据权利要求23至29中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160至163处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


31.根据权利要求23至30中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置161至163处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


32.根据权利要求23至31中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置161至163处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变为半胱氨酸。


33.根据权利要求23至32中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置180至182处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基中的至少一个突变。


34.根据权利要求23至33中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置160处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


35.根据权利要求23至34中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置161处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


36.根据权利要求23至35中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置162处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


37.根据权利要求23至36中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置163处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


38.根据权利要求23至37中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置164处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


39.根据权利要求23至38中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置165处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


40.根据权利要求23至39中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置180处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


41.根据权利要求23至40中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置181处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


42.根据权利要求23至41中任一项所述的突变蛋白，其中在序列位置182处的人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)的氨基酸残基被半胱氨酸替换。


43.根据权利要求23至41中任一项所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白进一步包含一个或多个盐桥，优选地，其中通过用相等带电氨基酸替换序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182中的至少两处，更优选地，通过用天冬氨酸和谷氨酸或精氨酸和赖氨酸替换序列位置160、161、162、163、164、165、180、181和182中的两处，建立所述一个或多个盐桥。


44.根据权利要求23至43中任一项所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白进一步包含一个或多个二硫桥。


45.一种核酸分子，其包含编码权利要求1-44中任一项所述的人白细胞介素27的能够分泌的突变蛋白或人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白的核苷酸序列。


46.根据权利要求45所述的核酸分子，其中所述核苷酸序列编码人白细胞介素27的α-亚基的能够分泌的突变蛋白，其中所述突变蛋白与人白细胞介素27的α-亚基(SEQIDNO：1)具有至少76％的序列同一性。


47.根据权利要求45或46所述的核酸分子，其包含编码SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7或SEQIDNO：8的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·菲戈，S·穆勒，
申请(专利权)人：慕尼黑科技大学，
类型：发明
国别省市：德国;DE