EB病毒相关抗原短肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了EB病毒相关抗原短肽及其应用。所述EB病毒相关抗原短肽序列如SEQ ID NO:1‑16任一所示。该短肽具有与DC细胞上MHC I类和MHC II分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。将该短肽中的至少一条体外致敏树突状细胞，制备的DC疫苗能够预防EB病毒相关疾病，具有良好的临床转化前景。而且，本发明专利技术的抗原短肽长度较短，化学合成难度小，可以直接合成得到高纯的产物，应用成本大大降低，同时效果明确，具有很好的应用前景。

Epstein Barr virus associated antigen short peptide and its application

【技术实现步骤摘要】
EB病毒相关抗原短肽及其应用
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及EB病毒相关抗原短肽及其应用。
技术介绍
EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，是一种传染性单核细胞增多症的病原体，具有在体内外专一性地感染人类及某些灵长类B细胞的生物学特性，主要通过唾液传播。EBV在电镜下与其他疱疹病毒相似，但抗原性不同，EBV基因组约172KB，至少可以编码100多种蛋白，B细胞为其主要感染靶细胞，其进入人体后可以直接进入潜伏状态，其特征为，病毒持续存在、有限的病毒蛋白表达、具有被集火进入复制周期的潜能。EB病毒与鼻咽癌、儿童淋巴瘤的发生有密切相关性，被列为可能致癌的人类肿瘤病毒之一，EB病毒感染可促进血液肿瘤的发展。另外目前已证实，阿尔默茨海莫病人的EB病毒抗体明显升高；1型糖尿病人的EB病毒引起的免疫反应更强烈；乳腺癌组织的EB病毒表达升高，乳腺癌患者的EB病毒基因表达和抗体均高于对照组。可能通过激活HER2/HER3信号通路促使乳腺上皮细胞恶变；在胃癌患者中，EB病毒促进基因乙酰化、基因突变参与癌变过程。目前对EBV感染尚缺乏疗效肯定的抗病毒药物。如阿昔洛韦用药期间，能减少EBV从咽部排毒，但不能改善传染性单核细胞增多症的症状，对免疫缺陷患者中的EBV淋巴瘤治疗也无效。近年来，对纯化EBV多肽取得了进展，有可能借助抗体或细胞免疫以阻断EBV的原发感染。其原发感染可以促使机体产生特异性中和抗体和细胞免疫应答，细胞免疫和中和抗体在防止外源性再感染和限制原发性感染和慢性感染起着重要作用。但其免疫力往往不持久且不强。疫苗是预防EBV感染最有效的方法，但我国研制的基因重组疫苗正在观察中。免疫学表明，树突状细胞(dendriticcell，DC)是目前所知的，功能最强的抗原提呈细胞，被认为是机体免疫反应的始动者，在免疫应答中处在中心位置。成熟的DC表达丰富的、与抗原提呈相关的MHCI类和MHCII类分子，其可以摄取、加工处理并提呈抗原；参与免疫记忆的维持；分泌细胞因子调节免疫应答。而能与MHCI类和MHCII类分子结合的EB病毒抗原多肽尤为关键。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有EB病毒疫苗的不足，提供能与MHCI类和MHCII类分子结合的EB病毒抗原多肽，提供基于DC技术的EBV疫苗，可应用于采用DC技术防治EBV相关慢性疾病，联合干细胞因子/vitrogen增加成熟DC细胞活性，同时通过多种EBV特异性抗原肽，促进DC细胞活化，达到预防EB病毒感染和治疗的目的，具有很好的应用前景。本专利技术的目的是提供EBV抗原相关短肽。本专利技术另一目的是提供所述EBV抗原相关短肽在制备EBV抗原多肽DC疫苗方面的应用。本专利技术再一目的是提供一种EBV抗原多肽DC疫苗。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：提供EBV相关抗原短肽，其序列如SEQIDNO:1-16任一所示。提供所述EBV相关抗原短肽在制备EB病毒抗原多肽DC疫苗方面的应用。提供所述EBV相关抗原短肽在制备EBV相关疾病的防治药物中的应用。另外还提供一种EB病毒相关慢病防治的DC疫苗，由上述EB病毒相关抗原短肽和树突状细胞加载得到。具体地，是由SEQIDNO:1-16中至少一条所示短肽联合体外致敏树突状细胞，从而获得的自体树突状细胞制剂。SEQIDNO:1-SEQIDNO:16所述的EB病毒相关抗原短肽能够诱导DC起到抗原提呈作用。具体地，疫苗为静脉回输型疫苗。在所述EB病毒相关慢病防治的DC疫苗的制备方法中，选用干细胞因子或vitrogen因子作为佐剂增加DC细胞活性，特异性的抗原肽体外致敏树突状细胞，获得自体树突状细胞制剂，作为静脉回输型EB病毒相关慢病防治疫苗。具体制备方法为：以成熟促进因子，同时以干细胞因子或Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；然后向诱导成熟的DC细胞培养体系中加入权利要求1所述短肽，收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤后，用生理盐水重悬即得到DC疫苗。更具体地，作为一种可选择的方案，所述EB病毒相关慢病防治的DC疫苗的制备步骤如下：S1.DC细胞的提取与诱导：S11.获取未成熟DC细胞采集健康捐献者的外周血，通过淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，培养基中，37℃、5％CO2条件下常规培养3小时后，贴壁细胞为未成熟DC细胞；S12.未成熟DC细胞的扩增培养37℃、5％CO2条件下培养5天，期间隔天换液，完成未成熟DC细胞(imDC细胞)的扩增培养；S13.DC细胞的诱导加入成熟促进因子，同时以干细胞因子或Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；S2.多肽的负载：诱导DC细胞成熟5天后，向培养体系中加入权利要求1所述短肽；S3.制备DC疫苗：离心收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤细胞3次，最后将负载有短肽片段的DC细胞用生理盐水重悬，即得到DC疫苗。另外所述DC疫苗在制备EB病毒相关慢性疾病的防治药物中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。本专利技术结合生物信息学技术预测EBV自身可以做为抗原的序列簇，并经过大量研究摸索，得到的16条EB病毒抗原肽具有与DC细胞上MHCI类和MHCII分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，并且提示其具有良好的临床转化及疾病防治前景。本专利技术选用特异性的表位多肽，体外致敏自体DC细胞，制备DC细胞制剂，对患者进行静脉回输，重建机体全身免疫平衡，启动免疫系统，对感染微生物的特异性预防。本专利技术采用的DC技术，用多种特异性抗原肽联合激活树突细胞，这些抗原肽具有极强的特异性，诱导具有更高活性的树突状细胞携带多种抗原信息，回输进入人体后可刺激机体免疫，可以达到诱导人体产生针对EB病毒产生特异性抗体，及针对EB病毒特异性的CTL细胞，从而可以有效防治EB病毒相关慢性疾病的发生发展。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了序列如SEQIDNO:1-16所示的EB病毒抗原多肽，这些抗原肽具有与DC细胞上MHCI类和MHCII分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。而且本专利技术的短肽长度较短，化学合成难度小，可以直接合成得到高纯的产物，应用成本大大降低，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，能够预防EB病毒相关疾病，尤其是相关慢性疾病，具有良好的临床转化及实际应用前景。基于本专利技术EB病毒抗原肽制备DC疫苗用于EB病毒防治的技术具有诸多优势：(1)DC体外激活后，干细胞因子/Vitrogen因子可以增加DC细胞活性，增加识别抗原提成能力，回输体内后促进产生免疫应答。(2)长期免疫记忆：由于使用特异抗原肽与具有记忆功能的免疫细胞充分接触，回输体内后，使免疫细胞具有了精确长久的免疫记忆，加强了免疫防治效果，为防止再感染或预防提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.EB病毒相关抗原短肽，其特征在于，其序列如SEQ ID NO:1-16任一所示。/n

【技术特征摘要】
1.EB病毒相关抗原短肽，其特征在于，其序列如SEQIDNO:1-16任一所示。


2.权利要求1所述短肽在制备防治EB病毒相关慢病的DC疫苗方面的应用。


3.权利要求1所述短肽在制备防治EB病毒相关慢性疾病的药物中的应用。


4.一种EB病毒抗原多肽DC疫苗，其特征在于，由权利要求1所述短肽和树突状细胞加载得到。


5.根据权利要求4所述DC疫苗，其特征在于，是由SEQIDNO:1-16中至少一条所示短肽联合体外致敏树突状细胞获得的自体树突状细胞制剂。


6.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕花，赵乙木，罗夫·辛克纳吉，孙晨，
申请(专利权)人：维塔恩广州医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44