一种评价促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法技术

本发明专利技术提供了一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，包括如下步骤：(1)提取样本基因组DNA，定量和质检；(2)质检合格后进行多重目的基因变异位点的扩增或采用特异性核酸探针对目的基因进行富集，根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行一代测序，采用一代测序对特定位点进行扩增和检测；(3)根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行二代测序或基因芯片分析，对多重PCR产物进行测序，下机数据拆分后进行生物信息学分析输出特定基因的SNP；(4)通过药物基因组数据库和优生贝基因数据库进行分析和解读，输出个性化的精准促排卵用药建议和方案。

A gene detection method for evaluating individual sensitivity and side effects of ovulation promoting drugs

【技术实现步骤摘要】
一种评价促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法
本专利技术涉及基因检测
，具体地说涉及一种评价促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法。
技术介绍
无排卵是引起不孕症的常见原因，占不孕症20％-40％左右，导致无排卵的原因繁多，根据世界卫生组织建议，无排卵病因可归纳为以下3类：下丘脑-垂体功能衰竭导致的性腺功能低落，其特点是血LH、FSH及雌激素水平低下，称为低促性腺素性性腺功能低落；下丘脑-垂体功能失调，特点是促性腺激素LH：FSH分泌比例异常，如多囊卵巢综合征，LH分泌频率及幅度异常增加，而FSH分泌相对不足，造成血LH/FSH比例倒置的一类，这类患者雌激素水平相对于卵泡早、中期水平；卵巢功能衰竭，其特点是血FSH水平升高、雌激素水平低下，并引起先天性性腺发育不全或卵巢发育不良及卵巢早衰等。此外，还有一类特殊类型，即高泌乳素血症性无排卵，包括垂体微腺瘤引起的高泌乳素血症。对于单纯因无排卵所致的不孕症，分析其原因，针对性的选择促排卵药物，常可获得理想的排卵率及妊娠率。近20年来，相关药物诱发排卵研究进展喜人，目前临床引用诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)提取样本基因组DNA，定量和质检；/n(2)质检合格后进行多重目的基因变异位点的扩增或采用特异性核酸探针对目的基因进行富集，根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行一代测序，采用一代测序对特定位点进行扩增和检测；/n(3)根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行二代测序或基因芯片分析，对多重PCR产物进行测序，下机数据拆分后进行生物信息学分析输出特定基因的SNP；/n(4)通过药物基因组数据库进行分析和解读，输出个性化的精准促排卵用药建议和方案。/n

【技术特征摘要】
1.一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)提取样本基因组DNA，定量和质检；
(2)质检合格后进行多重目的基因变异位点的扩增或采用特异性核酸探针对目的基因进行富集，根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行一代测序，采用一代测序对特定位点进行扩增和检测；
(3)根据检测目的基因和位点的数量，取适量质检合格的扩增产物，进行二代测序或基因芯片分析，对多重PCR产物进行测序，下机数据拆分后进行生物信息学分析输出特定基因的SNP；
(4)通过药物基因组数据库进行分析和解读，输出个性化的精准促排卵用药建议和方案。


2.根据权利要求1所述的一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于：所述步骤(1)包括：采用吸附柱或磁珠法针对唾液、外周血、口腔黏膜细胞、血卡多种样本类型进行DNA提取、纯化和定量，使用Nanodrop分光光度计进行定量，吸光度OD260/OD280在1.6-2.2之间，OD260/OD230在1.5-3.0之间即为合格，取适量DNA采用琼脂糖凝胶电泳检测，以出现单一条带且位于目标DNA长度范围内为合格；通过多重PCR扩增配合sanger测序、基因芯片检测、qPCR和质谱检测技术进行检测，所述sanger测序包括：在所述电泳检测合格后进行测序，按照样品接收单填写的样本类型、样本名称、片段长度、引物名称及备注切胶纯化进行sanger测序；针对待检测基因和位点序列，设计正向引物和反向引物；对设计好的引物进行合成和质检。


3.根据权利要求1所述的一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于：所述步骤(2)包括：取适量的DNA模板，建立多重PCR反应体系，对特定基因位点进行扩增，多重PCR实验完成后，取1微升扩增产物DNA进行凝胶电泳质检。


4.根据权利要求3所述的一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于：建立多重PCR反应体系，对特定基因位点进行扩增包括：将如下组分加到0.2mLPCR管或八联排管中，所述组分包括10.0μL含染料的2xGoldStarBestMasterMix，1μLCOS-1或COS-2Prime，每个反应0.4pM引物，30ngDNA模板以及上限为20μLddH2O，其中PCR反应程序包括：
步骤1，95℃下进行预变性5～15分钟循环1次；
步骤2，首先在95℃下进行变性20～40秒，然后58℃下进行退火20～40秒，最后72℃下进行延伸40～100秒；该步骤2循环35次进行；
步骤3，72℃下进行延伸5～10分钟，循环1次；
步骤4，4℃下进行保存。


5.根据权利要求3所述的一种促排卵药物个体敏感性和副反应的基因检测方法，其特征在于：所述凝胶电泳质检的条件为电压95V，具体包括如下步骤：
步骤1，琼脂糖凝胶的制备：称取1.5g琼脂糖，加入到100mL1×TAE中，置于微波炉中加热至完全溶解，取出摇匀，灯光下观察无白色细小晶体颗粒，冷却至60℃左右即可，其中所述琼脂糖凝胶浓度为1-1.5％，所述琼脂糖凝胶浓度的改变方法为：配制n％的琼脂糖凝胶，即向100mL1×TAE中加入ng琼脂糖，置于微波炉中加热溶解即可；
步骤2，灌胶：向冷却到60℃左右的琼脂糖溶液中加入8mLGoldview，摇匀，轻轻倒入安装好凝胶托盘的制胶器中，然后立即在特定位置插入25齿的梳子，所述灌胶过程迅速，以防琼脂糖凝胶凝固造成灌胶失败，当灌胶过程中产生气泡，则小心震动制胶器或用移液器吸头将气泡戳破，以保证所制得的琼脂糖凝胶不能有气泡，待琼脂糖凝胶凝固后，拔出所述梳子，将琼脂糖凝胶置于电泳槽中，所述电泳槽内放置1×TAE缓冲液，缓冲液要没过胶面，点样孔充满液体，然后进行步骤3的操作；
步骤3，加样：...

【专利技术属性】
技术研发人员：李媛，任懂平，周一鸣，
申请(专利权)人：优生贝北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11