一种低含量羟基酸杂质的长链二元酸及其生产方法技术

本发明专利技术涉及一种低含量羟基酸杂质的长链二元酸及其生产方法，具体涉及利用同源重组方法制备长链二元酸菌株、利用该菌株发酵生产低含量羟基酸杂质的长链二元酸。本发明专利技术涉及一种产长链二元酸重组微生物，其具有增加的乙醇脱氢酶活性及任选具有降低的乙酰辅酶A氧化酶活性。本发明专利技术还涉及使用所述产长链二元酸重组微生物生产长链二元酸的方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
一种低含量羟基酸杂质的长链二元酸及其生产方法
本专利技术涉及一种低含量羟基酸杂质的长链二元酸及其生产方法，以及利用同源重组方法制备长链二元酸菌株、利用该菌株生产低羟基酸杂质含量的长链二元酸的方法。
技术介绍
长链二元酸(LCDA；也称为长链二羧酸或长链二酸)包括化学式HOOC(CH2)nCOOH的二元酸，其中n≥7。长链二元酸作为重要的单体原料，广泛用于合成尼龙、树脂、热熔胶、粉末涂料、防腐剂、香料、润滑剂、塑化剂等。长期以来，长链二元酸经由石油通过传统的化学合成途径如丁二烯多步氧化法合成。但化学合成法面临多种挑战，化学合成法得到的二元酸为长链二元酸与短链二元酸的混合物，因此需要复杂的后续提取纯化步骤，对于生产工艺和生产成本而言，都是巨大的障碍。采用微生物发酵技术生产长链二元酸，因其产生的污染低、环境友好、能够合成化学合成方法难以合成的产物如12碳以上的长链二元酸且纯度高等特点，较传统的化学合成法具有明显的优势。此前，二元酸菌种的改良大多通过传统的随机诱变或采用基因工程的方法得以实现，由于诱变本身随机性的特点，对筛选通量有很高的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产长链二元酸重组微生物，其具有增加的乙醇脱氢酶活性，和任选地具有降低的乙酰辅酶A氧化酶活性，例如具有过表达的ADH基因或其同源基因和/或弱化的POX4基因或其同源基因，优选在所述重组微生物中，POX4基因或其同源基因被一或多个拷贝的ADH基因或其同源基因替换；/n优选地，所述产长链二元酸重组微生物选自棒状杆菌、白地霉、假丝酵母属、毕赤酵母属、红酵母属、酵母属或耶氏酵母属中的任意一种；更优选地，所述微生物是酵母菌；更优选地，所述微生物选自热带假丝酵母(Candida tropicalis)或清酒假丝酵母(Candidasake)；/n优选地，所述长链二元酸选自C9～C22长链二元酸，优选...

【技术特征摘要】
20180706 CN 2018107343532;20180706 CN 2018107341801.一种产长链二元酸重组微生物，其具有增加的乙醇脱氢酶活性，和任选地具有降低的乙酰辅酶A氧化酶活性，例如具有过表达的ADH基因或其同源基因和/或弱化的POX4基因或其同源基因，优选在所述重组微生物中，POX4基因或其同源基因被一或多个拷贝的ADH基因或其同源基因替换；
优选地，所述产长链二元酸重组微生物选自棒状杆菌、白地霉、假丝酵母属、毕赤酵母属、红酵母属、酵母属或耶氏酵母属中的任意一种；更优选地，所述微生物是酵母菌；更优选地，所述微生物选自热带假丝酵母(Candidatropicalis)或清酒假丝酵母(Candidasake)；
优选地，所述长链二元酸选自C9～C22长链二元酸，优选C9～C18长链二元酸，更优选十碳二元酸、十一碳二元酸、十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸中的一种或多种；更优选地，所述长链二元酸为十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，更优选正十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，例如选自癸二酸、十一烷二元酸、十二烷二元酸、十三烷二元酸、十四烷二元酸、十五烷二元酸和十六烷二元酸中的至少一种或多种。


2.权利要求1的产长链二元酸重组微生物，其中所述产长链二元酸重组微生物基因组内的一个拷贝的POX4基因或其同源基因被一个拷贝的ADH基因或其同源基因替换，优选地，所述ADH基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。


3.一种生产长链二元酸的方法，包括在适于权利要求1或2所述的产长链二元酸重组微生物生长的条件下培养所述产长链二元酸重组微生物，任选地，还包括从培养产物中分离和/或纯化长链二元酸，
优选地，所述长链二元酸选自C9～C22长链二元酸，优选C9～C18长链二元酸，更优选十碳二元酸、十一碳二元酸、十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸中的一种或多种；更优选十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，更优选正十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，例如选自癸二酸、十一烷二元酸、十二烷二元酸、十三烷二元酸、十四烷二元酸、十五烷二元酸和十六烷二元酸中的至少一种或多种。


4.一种具有低含量羟基酸杂质的长链二元酸，其中所述羟基酸杂质的含量大于0，且在10000ppm以下，优选4000ppm以下，更优选300ppm以下，其中所述羟基酸杂质包括含有一个羧基的羟基脂肪酸，
优选地，所述长链二元酸选自C9～C22长链二元酸，优选C9～C18长链二元酸，更优选十碳二元酸、十一碳二元酸、十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸中的一种或多种；更优选十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，更优选正十碳至十六碳二元酸中至少一种或多种，例如选自癸二酸、十一烷二元酸、十二烷二元酸、十三烷二元酸、十四烷二元酸、十五烷二元酸和十六烷二元酸中的至少一种或多种，
优选地，所述羟基脂肪酸含有1个端羧基和1个端羟基，所述羟基脂肪酸化学式为CH2OH-(CH2)n-COOH，其中n≥7；优选选自九碳羟基脂肪酸、十碳羟基脂肪酸、十一碳羟基脂肪酸、十二碳羟基脂肪酸、十三碳羟基脂肪酸、十四碳羟基脂肪酸、十五碳羟基脂肪酸、十六碳羟基脂肪酸、十七碳羟基脂肪酸、十八碳羟基脂肪酸、或十九碳羟基脂肪酸中的任意一种或多种。


5.权利要求4的长链二元酸，其中：
当所述长链二元酸为十二碳二元酸时，羟基酸杂质主要为十二碳羟基脂肪酸，其中十二碳羟基脂肪酸的含量低于4000ppm，3000ppm，2000ppm，1000ppm，500ppm，300ppm，200ppm，150ppm或更低；
当所述长链二元酸为十碳二元酸时，羟基酸杂质主要为十碳羟基脂肪酸，其中十碳羟基脂肪酸的含量低于2000ppm，1500ppm，1000ppm，500ppm，300ppm，200ppm，150ppm或更低；或者
当所述长链二元酸为十六碳二元酸时，羟基酸杂质主要为十六碳羟基脂肪酸，其中十六碳羟基脂肪酸杂质的含量低于9000ppm，8000ppm，6000ppm，3000ppm，2000...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文波，徐敏，杨晨，周豪宏，刘修才，
申请(专利权)人：上海凯赛生物技术股份有限公司，CIBT美国公司，
类型：发明
国别省市：上海;31