一种里氏木霉工程菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种里氏木霉工程菌及其制备方法和应用。本发明专利技术的里氏木霉工程菌可高效表达内切葡聚糖酶，在优化条件下，里氏木霉工程菌表达的内切葡聚糖酶胞外酶活达到31.46U/mL，是野生菌内切葡聚糖酶酶活4.12U/mL的7.6倍，是大肠杆菌表达酶活13.6U/mL的2.3倍；里氏木霉表达的内切葡聚糖酶对SDS耐受性较高，特别在0.5％SDS中，tEgh31酶残余酶活接近55％，而原核表达的rEgh31残余酶活约为30％；且里氏木霉表达的tEgh31酶的比活力(161.2U/mg)较原核表达的rEgh31酶比活力(135.7U/mg)提高约19％。这表明真菌表达的内切葡聚糖酶具有较为广泛的应用前景。

An engineering strain of Trichoderma reesei and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种里氏木霉工程菌及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，特别涉及一种里氏木霉工程菌及其制备方法和应用。
技术介绍
真核生物所产生的酶与原核生物产生的酶在最适pH、最适温度等反应条件和催化机制方面存在差异。里氏木霉是丝状真菌的一种，是多细胞的真核微生物。里氏木霉表达系统具有表达水平高，可分泌表达，可高密度发酵等优点，目前在酶的工业生产中得到广泛的应用。根据启动子功能的不同，里氏木霉表达系统可分为组成型表达系统及诱导型表达系统(高云，2002)。组成型启动子常对应于细胞中进行基本生命活动必须的基因，它们的合成速率不受代谢、环境、时空的影响；诱导性启动子与之相对，在特定条件下才能启动表达。常用的组成型启动子有甘油醛3-磷酸脱氢酶(GPDA)启动子等，常用的诱导性启动子有外切型β-葡萄糖甘酶(CBHI)启动子等。Miettinen-Oinonen等(2002)利用CBHI强启动子成功表达了内切葡聚糖酶EGI；Wang等(2004)将内切葡聚糖酶eg3基因整合到里氏木霉染色体上，并利用CBHI强启动子对该基因的表达进行调控，获得了活性较本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种里氏木霉组成型表达盒，其特征在于：所述表达盒由里氏木霉丙酮酸脱羧酶基因的组成型强启动子Ppdc、里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅰ基因cbh Ⅰ的信号肽基因、外源目的基因内切葡聚糖酶基因egh31和里氏木霉丙酮酸脱羧酶基因终止子Tpdc组成，简称为Ppdc-cbh Ⅰ-egh31-Tpdc。/n

【技术特征摘要】
1.一种里氏木霉组成型表达盒，其特征在于：所述表达盒由里氏木霉丙酮酸脱羧酶基因的组成型强启动子Ppdc、里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅰ基因cbhⅠ的信号肽基因、外源目的基因内切葡聚糖酶基因egh31和里氏木霉丙酮酸脱羧酶基因终止子Tpdc组成，简称为Ppdc-cbhⅠ-egh31-Tpdc。


2.根据权利要求1所述的里氏木霉组成型表达盒，其特征在于：
所述的里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅰ基因cbhⅠ的信号肽基因的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。


3.一种含有权利要求1或2所述的里氏木霉组成型表达盒的表达载体。


4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体的出发载体为pPICZα...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘森林，陈伟钊，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44