一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法技术

本发明专利技术提供了一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，包括一个选择材料的步骤；一个对选取的材料进行消毒的步骤；一个对愈伤组织进行诱导的步骤；一个对愈伤组织进行增殖培养的步骤；一个对愈伤组织进行分化培养的步骤；一个芽增殖和壮苗的步骤；一个生根的步骤；一个驯化炼苗的步骤；一个移栽的步骤。本发明专利技术通过对愈伤组织诱导、愈伤增殖、愈伤分化、芽增殖、壮苗、生根、炼苗和移栽的过程，达到快速无性繁殖的目的。本发明专利技术的方法不受季节限制，可在短时间内生产大量“富士蓝”优质种苗，满足市场需求，为产业化生产带来极大效益。

A method of tissue culture of Clematis' Fuji blue '

【技术实现步骤摘要】
一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法
本专利技术属于植物学领域，涉及一种铁线莲，具体来说是一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法。
技术介绍
铁线莲属(Clematis)是毛茛科(Ranunculaceae)多年生落叶或常绿木质藤本，少数为宿根直立草本，素有“藤本皇后”之称，花色丰富、花型多变、花期长，可以从早春开到晚秋，极个别品种可冬季开花。铁线莲通过叶柄缠绕和依附攀爬的方式向上生长，在期望拓展城市绿化空间、增加绿量、关注立体绿化的城市，特别大中型城市精致园艺中受到广泛关注，具有很大的观赏价值。铁线莲属(Clematis)于世界范围分布，有300余种原生种。虽然其中有近一半的原种都出自中国，但国内铁线莲育种工作起步较晚，国内现有的大部分铁线莲品种均来自欧洲。而且由于价格昂贵、品种数量少，极大影响了铁线莲在园林中的应用。铁线莲‘富士蓝’(附图1)属于早花大花型品种，6～8片的蓝色萼片呈花瓣状，花径10～12cm,单瓣，花丝白色，花药黄色，4～6月首次开花，7～9月可二次开花。铁线莲‘富士蓝’应用形式多样，可做成篱笆，花架，花亭，与针叶树、落叶树以及低矮灌木混植。目前公开的铁线莲相关专利和文章所述方法在铁线莲‘富士蓝’的组培过程中无法诱导出完整植株，由此，迫切需要开发‘富士蓝’不定芽间接发生技术的方法以扩大其数量，以利于其应用推广。另外，也可作为转基因受体系统用于转基因植株的研究。
技术实现思路
针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，所述的这种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法要解决现有技术中铁线莲‘富士蓝’的组培过程中无法诱导出完整植株的技术问题。本专利技术提供了一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，包括如下步骤：1)一个选择材料的步骤，每年的3月下旬到5月，选择健康、无病虫害的茎段的幼嫩部分，截取节间的部位，长度在0.5-1.2cm之间，备用；2)一个对步骤1)选取的材料进行消毒的步骤，将步骤1)截取的茎段用洗洁精浸泡20～40分钟，然后采用流水冲洗0.5～2小时，再转移到超净工作台中，采用体积百分比浓度为60～80％的酒精浸泡30～60秒，无菌水冲洗1～2次后，再用体积百分比浓度为0.05～0.2％的升汞震荡5～10分钟清洗，随后无菌水冲洗5次以上；3)一个对愈伤组织进行诱导的步骤，将步骤2)消毒后的材料转移至愈伤组织诱导培养基中，所述的诱导培养基为：1/2改良MS+TDZ0.1～1mg/L+NAA0.2～2mg/L，在密闭容器中光培养10～30天，直至材料两侧切口部分产生白色至浅黄色愈伤；4)一个对步骤3)的愈伤组织进行增殖培养的步骤，取出步骤3)中的愈伤组织，切成长度为0.2～0.6cm的小块，接种于愈伤增殖培养基中，愈伤增殖培养基为：1/2改良MS+6-BA0.5～2mg/L+NAA0.2～1mg/L，在密闭容器中暗培养14-20天；5)一个对步骤4)的愈伤组织进行分化培养的步骤，将步骤4)中的愈伤组织取出，将愈伤组织切成长度为0.5～1.5cm的小块，接种于愈伤分化培养基中，愈伤分化培养基为：1/2改良MS+6-BA1～3mg/L+NAA0.01～0.05mg/L，在密闭容器中光培养20～30天；6)一个芽增殖和壮苗的步骤，将步骤5)培养后的幼苗取出，转至芽增殖和壮苗培养基中，所述的芽增殖和壮苗培养基为：1/2改良MS+6-BA1～3mg/L+IBA0.01～0.05mg/L+GA30.1～0.5mg/L，在密闭容器中光培养20～30天；7)一个生根的步骤，取出步骤6)壮苗后的幼苗，转移至生根培养基中，所述的生根培养基为1/2MS+IBA0.1～1mg/L+TDZ0.001～0.005mg/L，在密闭容器中光培养20～40天；8)一个驯化炼苗的步骤，将步骤7)生根后幼苗的密闭容器的瓶盖打开后放置2～4天后，取出生根苗，清水洗净基部附着培养基，移栽至基质中，所述的基质为珍珠岩；9)一个移栽的步骤，将步骤8)中的幼苗培育1个月后移栽至含土基质中。进一步的，所述的含土基质由珍珠岩、草炭和园土组成，所述的珍珠岩、草炭和园土的质量比为2：3：1。具体的，步骤7)中，MS培养基为市售产品，在此不再赘述。进一步的，步骤2～5中改良MS的成分如下所述：改良MS培养基组成成分一览表进一步的，步骤3～6)中1/2改良MS中，NH4NO3、KNO3、Ca(NO3)2·4H2O、MgSO4·7H20、KH2PO4、KCl减半使用，其它用量维持不变；步骤7)中1/2MS，NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H20、KH2PO4减半使用，其它用量维持不变。进一步的，步骤3～6)的培养基中，还添加蔗糖30g/L,琼脂6.9g/L，培养基pH调至5.6～5.9之间。进一步的，步骤7)的培养基中，还添加蔗糖20g/L,琼脂6.9g/L，培养基pH调至5.6～5.9之间。进一步的，步骤3、5、6、7的光培养中，温度21～25℃，光照强度为1500～3000Lx，相对湿度为60％～80％。本专利技术提供了一种铁线莲‘富士蓝’的组织快繁方法，通过愈伤组织诱导、愈伤增殖、愈伤分化、芽增殖和壮苗、生根、炼苗和移栽过程，达到快速无性繁殖的目的。本专利技术和已有技术相比，其技术进步是显著的。本专利技术的铁线莲‘富士蓝’的组织培养方法不受季节限制，可在短时间内生产大量“富士蓝”优质种苗，满足市场需求，为产业化生产带来极大效益。附图说明图1为采用本专利技术的开花的铁线莲‘富士蓝’。图2为采用本专利技术组织培养方法培养的铁线莲初始诱导愈伤组织；图3为采用本专利技术组织培养方法培养的愈伤组织分化实物图；图4为采用本专利技术组织培养方法培养的芽增殖和壮苗实物图；图5为采用本专利技术组织培养方法培养的铁线莲‘富士蓝’的生根实物图；图6为采用本专利技术组织培养方法培养的铁线莲‘富士蓝’整株；图7为采用本专利技术组织培养方法培养的铁线莲‘富士蓝’的炼苗入珍珠岩后实物图；图8为采用本专利技术组织培养方法培养的铁线莲‘富士蓝’的移栽后实物图。具体实施方式为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。但本专利技术绝非仅限于此例。以下所述仅为本专利技术较好的实施例，仅仅用以解释本专利技术，并不能因此而解释为对本专利技术专利范围的限制。应当指出的是，凡在本专利技术的精神和原则范围内的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围内。因此，本专利技术专利的保护范围应以所附权利要求为准。实施例1如图1-图8所示，本专利技术提供一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，利用‘富士蓝’当年生枝条幼嫩顶端作为外植体，依次进行以下步骤：步骤1：材料选择3月下旬到5月，选择健康、无病虫害的茎段幼嫩部分，截取节间的部位，0.5-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，其特征在于包括如下步骤：/n1)一个选择材料的步骤，每年的3月下旬到5月，选择健康、无病虫害的茎段的幼嫩部分，截取节间的部位，长度在0.5-1.2cm之间，备用；/n2)一个对步骤1)选取的材料进行消毒的步骤，将步骤1)截取的茎段用洗洁精浸泡20～40分钟，然后采用流水冲洗0.5～2小时，再转移到超净工作台中，采用体积百分比浓度为60～80％的酒精浸泡30～60秒，无菌水冲洗1～2次后，再用体积百分比浓度为0.05～0.2％的升汞震荡5～10分钟清洗，随后无菌水冲洗5次以上；/n3)一个对愈伤组织进行诱导的步骤，将步骤2)消毒后的材料转移至愈伤组织诱导培养基中，所述的诱导培养基为：1/2改良MS+TDZ 0.1～1mg/L+NAA 0.2～2mg/L，在密闭容器中光培养10～30天，直至材料两侧切口部分产生白色至浅黄色愈伤；/n4)一个对步骤3)的愈伤组织进行增殖培养的步骤，取出步骤3)中的愈伤组织，切成长度为0.2～0.6cm的小块，接种于愈伤增殖培养基中，愈伤增殖培养基为：1/2改良MS+6-BA0.5～2mg/L+NAA 0.2～1mg/L，在密闭容器中暗培养14-20天；/n5)一个对步骤4)的愈伤组织进行分化培养的步骤，将步骤4)中的愈伤组织取出，将愈伤组织切成长度为0.5～1.5cm的小块，接种于愈伤分化培养基中，愈伤分化培养基为：1/2改良MS+6-BA 1～3mg/L+NAA 0.01～0.05mg/L，在密闭容器中光培养20～30天；/n6)一个芽增殖和壮苗的步骤，将步骤5)培养后的幼苗取出，转至芽增殖和壮苗培养基中，所述的芽增殖和壮苗培养基为：1/2改良MS+6-BA 1～3mg/L+IBA 0.01～0.05mg/L+GA...

【技术特征摘要】
1.一种铁线莲‘富士蓝’的组织培养的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)一个选择材料的步骤，每年的3月下旬到5月，选择健康、无病虫害的茎段的幼嫩部分，截取节间的部位，长度在0.5-1.2cm之间，备用；
2)一个对步骤1)选取的材料进行消毒的步骤，将步骤1)截取的茎段用洗洁精浸泡20～40分钟，然后采用流水冲洗0.5～2小时，再转移到超净工作台中，采用体积百分比浓度为60～80％的酒精浸泡30～60秒，无菌水冲洗1～2次后，再用体积百分比浓度为0.05～0.2％的升汞震荡5～10分钟清洗，随后无菌水冲洗5次以上；
3)一个对愈伤组织进行诱导的步骤，将步骤2)消毒后的材料转移至愈伤组织诱导培养基中，所述的诱导培养基为：1/2改良MS+TDZ0.1～1mg/L+NAA0.2～2mg/L，在密闭容器中光培养10～30天，直至材料两侧切口部分产生白色至浅黄色愈伤；
4)一个对步骤3)的愈伤组织进行增殖培养的步骤，取出步骤3)中的愈伤组织，切成长度为0.2～0.6cm的小块，接种于愈伤增殖培养基中，愈伤增殖培养基为：1/2改良MS+6-BA0.5～2mg/L+NAA0.2～1mg/L，在密闭容器中暗培养14-20天；
5)一个对步骤4)的愈伤组织进行分化培养的步骤，将步骤4)中的愈伤组织取出，将愈伤组织切成长度为0.5～1.5cm的小块，接种于愈伤分化培养基中，愈伤分化培养基为：1/2改良MS+6-BA1～3mg/L+NAA0.01～0.05mg/L，在密闭容器中光培养20～30天；
6)一个芽增殖和壮苗的步骤，将步骤5)培养后的幼苗取出，转至芽增殖和壮苗培养基中，所述的芽增殖和壮苗培养基为：1/2改良MS+6-BA1～3mg/L+IBA0.01～0.05mg/L+GA30.1～0.5mg/L，在密闭容器中光培养20～30天；
7)一个生根的步骤，取出步骤6)壮苗后的幼苗，转移至生根培养基中，所述的生根培养基为1/2...

【专利技术属性】
技术研发人员：高燕，奉树成，莫健彬，
申请(专利权)人：上海植物园，
类型：发明
国别省市：上海;31