一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，所述方法包括以下步骤：采集家兔耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量；第一次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，混合溶液为肥大细胞和血小板各1ml混匀，2天后，第二次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，2天后，第三次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液；肥大细胞和血小板混合液注射4周后采集耳缘静脉血清。本发明专利技术通过对家兔耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，使得兔动脉粥样硬化动物模型的成模率高、成模周期短，实验成本大大降低。

Establishment of an atherosclerotic animal model in rabbits

【技术实现步骤摘要】
一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法
本专利技术涉及动物实验模型
，具体为一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法。
技术介绍
随着人们生活水平的提高以及生活饮食与作息的不规律，导致动脉粥样硬化日益在临床上高发，包括冠状动脉粥样硬化，脑动脉硬化，肠系膜动脉粥样硬化等，由于其致病原因多而复杂，关于其发病的基础性研究也越来越得到重视，研究动脉粥样硬化动物模型，是对动脉粥样硬化的临床发现与治疗的基础性研究，除田鼠和地鼠外，一般温血动物只要方法适当都能形成动脉粥样硬化的斑块病变，常选用兔、猪、大鼠、鸡、鸽、猴和犬等动物，常用的复制方法有高胆固醇、高脂肪饲料喂养法，免疫学方法，儿茶酚胺类药物注射法，同型半胱氨酸注射法，幼乳大白鼠法及胆固醇－脂肪乳剂静脉注射法等，现有的兔动脉粥样硬化动物模型是用高胆固醇饲料喂养法与免疫反应损伤法结合建立兔动脉粥样硬化动物模型，分别于高脂饲养前、第二周、第四周、第六周、第八周测定血甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）的含量，并在每次高脂饲料喂养后后作形态学观察，并在第八周后通过外科手术取出兔颈动脉，制作病理切片病理切片，检测斑块成膜情况，分析其斑块性质，确定建立起动脉粥样硬化的模型，但是现有的高脂饲料喂养建立兔动脉粥样硬化模型存在以下不足：成模率低甚至无法成模；实验周期过长；高脂饲料成本较高造成动物饲养成本较高，因此有必要对现有技术进行改进，以解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，以解决上述
技术介绍
中提出的现有的高脂饲料喂养建立兔动脉粥样硬化模型存在以下不足：成模率低甚至无法成模；实验周期过长；高脂饲料成本较高造成动物饲养成本较高的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，所述方法包括以下步骤：S1：采集家兔耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量；S2：第一次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，混合溶液为肥大细胞和血小板各1ml混匀，2天后，第二次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，2天后，第三次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液；S3：肥大细胞和血小板混合液注射4周后采集耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，通过对比肥大细胞和血小板混合液注射前后指标，来判断成模情况；S4：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子进行动脉血管超声检测，判断成模情况；S5：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子手术取出主动脉、腹主动脉以及颈总动脉，制作病理切片检测成模情况。优选的，所述S1中采集兔子耳缘静脉血清的方法设置为：将兔固定，用小镊子拔去拟采血部位的毛，再用60W手术照明灯对准兔耳照一定时间，约1-2分钟,照射距离2-5厘米，或用电吹风吹热或用二甲苯棉球擦耳壳，待血管扩张充血后,用事先贴好一小块橡皮膏的试管，在橡皮膏处垫在欲采血的兔耳下部，然后用手术刀尖或粗针头在耳缘静脉上轻轻刺破一小孔，再用干棉球擦一下破口，随即血液迅速流入试管，待取血数量达到要求前，移开照明灯，一次可采血5～10ml，取血后用棉球压迫止血，如流血不止时，再用一条橡皮膏贴在压迫伤口的棉球及耳廓皮肤上，过几分钟便可完全止血。优选的，所述S2中肥大细胞和血小板之间通过离心混匀设备进行混匀，且在肥大细胞和血小板混匀前分别将其加热至37℃。优选的，所述S2中肥大细胞的密度为1.5×107个/ml，血小板的密度为6×108个/ml。优选的，所述S4中动脉血管超声检测的具体方法设置为：使用彩色多普勒超声仪，采用连续扫查方式，首先从颈根部甲状腺外侧开始纵扫，显示血管长轴，可显示颈总动脉，探头逐次向上移动，移至甲状软骨上缘水平时，再往上扫查便分别出现两条血管的纵切面，即颈内、颈外动脉，颈总动脉分叉部、颈内动脉起始段是粥样硬化好发部位，着重超声检测。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是。（1）本专利技术通过耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，且分三次进行注射，使得兔动脉粥样硬化动物模型的成模率高，本专利技术方法成模率可达90%，较常规方法成模率为2%，得到大大提升。（2）本专利技术成模时间快，注射肥大细胞和血小板混合液后4周即可成模，较常规方法成模时间在24周到96周，有着明显提升。（3）本专利技术操作简便，节约成本，该方法不需要高脂饲料，普通饲料饲养即可，而且饲养时间极短，这样可节约大量实验成本。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供的以下实施例。实施例1一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，包括以下步骤：S1：采集家兔耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量；S2：第一次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，混合溶液为肥大细胞和血小板各1ml混匀，2天后，第二次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，2天后，第三次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液；S3：肥大细胞和血小板混合液注射2周后采集耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，通过对比肥大细胞和血小板混合液注射前后指标，来判断成模情况；S4：对肥大细胞和血小板混合液注射2周后的兔子进行动脉血管超声检测，判断成模情况；S5：对肥大细胞和血小板混合液注射2周后的兔子手术取出主动脉、腹主动脉以及颈总动脉，制作病理切片检测成模情况。进一步，S1中采集兔子耳缘静脉血清的方法设置为：将兔固定，用小镊子拔去拟采血部位的毛，再用60W手术照明灯对准兔耳照一定时间，约1-2分钟,照射距离2-5厘米，或用电吹风吹热或用二甲苯棉球擦耳壳，待血管扩张充血后,用事先贴好一小块橡皮膏的试管，在橡皮膏处垫在欲采血的兔耳下部，然后用手术刀尖或粗针头在耳缘静脉上轻轻刺破一小孔，再用干棉球擦一下破口，随即血液迅速流入试管，待取血数量达到要求前，移开照明灯，一次可采血5～10ml，取血后用棉球压迫止血，如流血不止时，再用一条橡皮膏贴在压迫伤口的棉球及耳廓皮肤上，过几分钟便可完全止血。进一步，S2中肥大细胞和血小板之间通过离心混匀设备进行混匀，且在肥大细胞和血小板混匀前分别将其加热至37℃。进一步，S2中肥大细胞的密度为1.5×107个/ml，血小板的密度为6×108个/ml。进一步，S4中动脉血管超声检测的具体方法设置为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：/nS1：采集家兔耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量；/nS2：第一次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，混合溶液为肥大细胞和血小板各1ml混匀，2天后，第二次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，2天后，第三次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液；/nS3：肥大细胞和血小板混合液注射4周后采集耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，通过对比肥大细胞和血小板混合液注射前后指标，来判断成模情况；/nS4：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子进行动脉血管超声检测，判断成模情况；/nS5：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子手术取出主动脉、腹主动脉以及颈总动脉，制作病理切片检测成模情况。/n

【技术特征摘要】
1.一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
S1：采集家兔耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量；
S2：第一次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，混合溶液为肥大细胞和血小板各1ml混匀，2天后，第二次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液，2天后，第三次对兔子耳缘静脉注射肥大细胞和血小板混合溶液；
S3：肥大细胞和血小板混合液注射4周后采集耳缘静脉血清，检测血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，通过对比肥大细胞和血小板混合液注射前后指标，来判断成模情况；
S4：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子进行动脉血管超声检测，判断成模情况；
S5：对肥大细胞和血小板混合液注射4周后的兔子手术取出主动脉、腹主动脉以及颈总动脉，制作病理切片检测成模情况。


2.根据权利要求1所述的一种兔动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于：所述S1中采集兔子耳缘静脉血清的方法设置为：将兔固定，用小镊子拔去拟采血部位的毛，再用60W手术照明灯对准兔耳照一定时间，约1-2分钟,照射距离2-5厘米，或用电吹风吹热或用二甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令泽，唐梅，李慧，贺永胜，
申请(专利权)人：云南洛宇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53