一种失血性休克动物模型的构建方法技术

本发明专利技术提供一种失血性休克动物模型的构建方法，属于动物模型建立方法领域。该方法是先对大鼠进行麻醉并切口，然后插管并连接生理数据采集仪，通过67％血液稀释阶段和30％再失血阶段，完成失血性休克动物模型的构建。本发明专利技术采用67％血液稀释阶段和30％再失血阶段，最高失血量为53％以上，达到现有的最高失血量，但失血过程更为温和，可控，造成组织器官缺氧状态更好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物模型建立方法领域，具体涉及一种失血性休克动物模型的构建方法。
技术介绍
安全有效的血液代用品是临床上替代血液的理想选择，可以解决离体血液贮存时限短(冷冻4℃条件下只能存贮3-6周)，而且贮存期间血液各种成分的理化性质和生物学性质都发生改变；交叉配血试验，不利于急救时的应用；血液污染导致血源性疾病病毒(艾滋病，乙肝，丙肝)等缺点。血液代用品应包括人造红细胞、人造血小板、人造血浆、人造免疫体系等，而如何实现传输氧气、维持血液渗透压和酸碱平衡及扩充容量的功能是血液代用品研究首要解决的问题。制备成功的失血性休克模型是开展评价血液代用品的基础，大鼠由于其较高的失血耐受度成为最常用于制备重度失血性休克模型的实验动物之一。国内现有的建立的大鼠休克模型均是通过心率、平均动脉压(MAP)、pH、二氧化碳分压(PCO2)和氧分压(PO2)作为评价指标。其中动脉血气分析是评价休克与否的重要指标之一，pH值、PaO2、PaCO2是血气分析中最重要的三项指标，是评价机体酸碱平衡和呼吸状态的基础指标。这些模型应用于传统输血评价中较为成功，但在血液代用品中评价的主要功能是传输氧气，为缺氧组织供血，因此，在评价指标中需要引进针对红细胞数量的评价指标。红细胞比容(Hct)，是指一定量的抗凝全血经离心沉淀后，测得下沉的红细胞占全血的容积比，是一种间接反映红细胞数量大小及体积的简单方法。Hct随血液稀释会逐步降低，当Hct降至起始值的1/3时，各组织已处于低氧供应状态。Hct的变化与失血和缺氧有密切关系，对于血液代用品的评价该指标更能有效反应血液代用品的效果。对于大鼠模型建立过程中采用的双阶段放血或40％失血策略中，最高失血量为50.6％(付春晓等。一种大鼠失血性休克模型的建立)，但是失血过程不好控制。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种失血性休克动物模型的构建方法，该方法可达到较高的失血量，且失血过程更为温和，造成组织器官缺氧状态更好。本专利技术提供一种失血性休克动物模型的构建方法，该方法包括：步骤一：麻醉并切口用麻醉剂向大鼠的腹腔内注射，使大鼠麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧位固定于鼠台上，在大鼠的颈部中线处和腹股沟处分别做3cm纵行切口，寻找并分离左颈总动脉、一侧股动脉和对侧股静脉；步骤二：插管并连接生理数据采集仪在大鼠的左颈总动脉插入导管，该导管连接注射器，用于放血；在大鼠的股静脉插入导管，该导管连接注射器，用于注射样品；在大鼠的股动脉插入导管，该导管连接压力传感器，用于检测平均动脉压；在大鼠的气管插入导管，该导管连接呼吸流量传感器，该呼吸流量传感器连接多导生理记录仪，用于检测呼吸指标，将电极夹住大鼠的四肢和胸部皮下，电极与多导生理记录仪连接，用于记录心电图；步骤三：进行67％血液稀释阶段在大鼠的左颈总动脉处抽取血液，并同时在在大鼠的股静脉注射羟乙基淀粉氯化钠注射液，对大鼠全血进行稀释，至红细胞比容值降至初始值的1/3，完成67％血液稀释，稳定5-20min；步骤四：进行30％的再失血阶段按大鼠体重的7.2％计算，在大鼠的左颈总动脉处抽取30％血液，诱导大鼠致死性出血性休克，完成失血性休克动物模型的构建，放血结束后在大鼠的股静脉注射等体积复苏液，稳定5-60min，监测生理信号直至复苏或死亡。优选的是，所述的大鼠为雄性Wistar大鼠，体重为200-300g/只，实验前安置在恒温室中饲养一周。优选的是，所述的麻醉剂为10％水合氯醛。优选的是，所述的一侧股动脉为右侧股动脉，对侧股静脉为左侧股静脉。优选的是，所述的步骤三中，抽取血液的速度和注射羟乙基淀粉氯化钠注射液的速度均为0.5-21ml/min。优选的是，所述的步骤三的稳定时间为10min。本专利技术的有益效果本专利技术提供一种失血性休克动物模型的构建方法，是将通过67％血液稀释30％失血，通过观察红细胞比容(Hct)、红细胞数量(RBC)、平均动脉压(MAP)，呼吸频率(BR)、二氧化碳分压(PCO2)，氧分压(PO2)和心率(HR)指标评价大鼠休克模型的建立。与现有技术相对比，本专利技术采用67％血液稀释阶段和30％再失血阶段，最高失血量为53％以上，达到现有的最高失血量，但失血过程更为温和，可控，造成组织器官缺氧状态更好。同时引进Hct指标，有利于组织器官缺氧状态的形成和对于血液代用品的评价，本专利技术的构建方法操作简单，易于控制，模型相对稳定，大鼠休克模型复制性良好，能够反映创伤性休克的的临床发病和临床特征。附图说明图1为本专利技术失血性休克动物模型操作图；图2为本专利技术实施例1自体血对失血性休克大鼠模型复苏效果图；图3为本专利技术实施例2HES对失血性休克大鼠模型复苏效果图；图4为本专利技术实施例3自制待筛选血液代用品对失血性休克大鼠模型复苏效果图。具体实施方式本专利技术提供一种失血性休克动物模型的构建方法，该方法包括：步骤一：麻醉并切口用麻醉剂向大鼠的腹腔内注射，使大鼠麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧位固定于鼠台上，在大鼠的颈部中线处和腹股沟处分别做3cm纵行切口，寻找并分离左颈总动脉、一侧股动脉和对侧股静脉；步骤二：插管并连接生理数据采集仪在大鼠的左颈总动脉插入导管，该导管连接注射器，用于放血；在大鼠的对侧股静脉插入导管，该导管连接注射器，用于注射样品；在大鼠的一侧股动脉插入导管，该导管连接压力传感器，用于检测平均动脉压；在大鼠的气管插入导管，该导管连接呼吸流量传感器，该呼吸流量传感器连接多导生理记录仪，用于检测呼吸指标，将电极夹住大鼠的四肢和胸部皮下，电极与多导生理记录仪连接，用于记录心电图；步骤三：进行67％血液稀释阶段在大鼠的左颈总动脉处抽取血液，并同时在在大鼠的对侧股静脉注射羟乙基淀粉氯化钠(HES)注射液，对大鼠全血进行稀释，至红细胞比容值降至初始值的1/3，完成67％血液稀释，稳定5-20min；步骤四：进行30％的再失血阶段按大鼠体重的7.2％计算，在大鼠的左颈总动脉处抽取30％血液，诱导大鼠致死性出血性休克，完成失血性休克动物模型的构建，放血结束后在大鼠的股静脉注射等体积复苏液，稳定5-60min，监测生理信号直至复苏或死亡。按照本专利技术，所述的大鼠优选为雄性Wistar大鼠，体重为200-300g/只，实验前安置在恒温室中饲养一周。所述的麻醉剂优选为10％水合氯醛。按照本专利技术，所述的一侧股动脉优选为右侧股动脉，对侧股静脉为左侧股静脉。按照本专利技术，所述的步骤三中，抽取血液的速度和注射羟乙基淀粉氯化钠注射液的速度优选均为0.5-21ml/min，更优选为1ml/min。所述的步骤三的稳定时间为10min。按照本专利技术，所述的完全复苏判断指标为存活超过2h以上。为验证本专利技术构建模型的有效性，利用所构建的大鼠血液稀释休克换血模型对大鼠自体血，HES和待筛选血液代用品(mPEG-P(CL-co-LA)-PEG包裹血红蛋白)进行了筛选和效果评价。证明了大鼠血液稀释休克换血模型对大鼠自体血和自制待筛选血液代用品的效果。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的说明，实施例中涉及到的原料均为商购获得。实施例1麻醉并切口：10只雄性Wistar大鼠，体重为250±50g，安置在恒温室中饲养1周。手术开始前，所有手术器械经医用酒精消毒，医用导管及接头充满肝素钠溶液(20mg/L,0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种失血性休克动物模型的构建方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：麻醉并切口用麻醉剂向大鼠的腹腔内注射，使大鼠麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧位固定于鼠台上，在大鼠的颈部中线处和腹股沟处分别做3cm纵行切口，寻找并分离左颈总动脉、一侧股动脉和对侧股静脉；步骤二：插管并连接生理数据采集仪在大鼠的左颈总动脉插入导管，该导管连接注射器，用于放血；在大鼠的股静脉插入导管，该导管连接注射器，用于注射样品；在大鼠的股动脉插入导管，该导管连接压力传感器，用于检测平均动脉压；在大鼠的气管插入导管，该导管连接呼吸流量传感器，该呼吸流量传感器连接多导生理记录仪，用于检测呼吸指标，将电极夹住大鼠的四肢和胸部皮下，电极与多导生理记录仪连接，用于记录心电图；步骤三：进行67％血液稀释阶段在大鼠的左颈总动脉处抽取血液，并同时在在大鼠的股静脉注射羟乙基淀粉氯化钠注射液，对大鼠全血进行稀释，至红细胞比容值降至初始值的1/3，完成67％血液稀释，稳定5‑20min；步骤四：进行30％的再失血阶段按大鼠体重的7.2％计算，在大鼠的左颈总动脉处抽取30％血液，诱导大鼠致死性出血性休克，完成失血性休克动物模型的构建，放血结束后在大鼠的股静脉注射等体积复苏液，稳定5‑60min，监测生理信号直至复苏或死亡。...

【技术特征摘要】
1.一种失血性休克动物模型的构建方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：麻醉并切口用麻醉剂向大鼠的腹腔内注射，使大鼠麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧位固定于鼠台上，在大鼠的颈部中线处和腹股沟处分别做3cm纵行切口，寻找并分离左颈总动脉、一侧股动脉和对侧股静脉；步骤二：插管并连接生理数据采集仪在大鼠的左颈总动脉插入导管，该导管连接注射器，用于放血；在大鼠的股静脉插入导管，该导管连接注射器，用于注射样品；在大鼠的股动脉插入导管，该导管连接压力传感器，用于检测平均动脉压；在大鼠的气管插入导管，该导管连接呼吸流量传感器，该呼吸流量传感器连接多导生理记录仪，用于检测呼吸指标，将电极夹住大鼠的四肢和胸部皮下，电极与多导生理记录仪连接，用于记录心电图；步骤三：进行67％血液稀释阶段在大鼠的左颈总动脉处抽取血液，并同时在在大鼠的股静脉注射羟乙基淀粉氯化钠注射液，对大鼠全血进行稀释，至红细胞比容值降至初始值的1/3，完成67％血液稀释，稳定5-20min；步骤四：进行30％的再失血阶...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄宇彬，齐延新，李彬，王玉鹏，谢志刚，景遐斌，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22