一种麻类植物指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种麻类植物指纹图谱的建立方法，包括：收集麻类植物的花序，制备样品溶液后通过高效液相色谱和二极管阵列检测器进行检测，建立麻类植物指纹图谱，并分析其主成分差异。所述高效液相色谱检测的流动相包括有机相和水相，所述有机相为乙腈，采用梯度洗脱；本发明专利技术指纹图谱相似度高，分离度、重复性好，色谱检测时间在60min内，为评价麻类药用植物的活性成分的含量及变化提供了一种新方法。

A method of establishing fingerprint of hemp plants

【技术实现步骤摘要】
一种麻类植物指纹图谱的建立方法
本专利技术涉及中药成分分析
，具体涉及一种麻类植物指纹图谱的建立方法。
技术介绍
中药指纹图谱是指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。是借助于波谱或色谱技术获得的中药次生代谢化学成分的光谱图或色谱图。指纹图谱应该具备指纹性，即：(1)专属性强。指所制订的指纹图谱应该是该药材所独有的、能与其它药材相区别的，其反映的化学信息是具有高度的选择性的；(2)稳定性好。即中药材的指纹图谱应该是从某中药材的多批次中归纳出的共性，图谱中的共有峰或特征峰应相对稳定；(3)重现性好。所制订的指纹图谱在规定条件下应能再现指纹特征，其误差应在允许的范围内。现在指纹图谱已是国际公认的控制中成药、天然药物质量的最有效的方法。至今为止，国内外学者对于麻类植物指纹图谱的研究主要集中在对其生物指纹图谱即DNA指纹图谱的研究，DNA指纹图谱仅可为麻类植物的品种鉴别提供依据，用于评价其真伪，但药用植物生长过程中的栽培条件等可对其化学成分产生极大的影响，从而影响质量，故仅优选其种质是远远不够的，还应有可对其化学成分进行整体分析的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种麻类植物指纹图谱的建立方法，可为麻类植物的整体化学成分分析提供方法。本专利技术采取的具体技术方案是：一种麻类植物指纹图谱的建立方法，包括：收集麻类植物的花序，制备样品溶液后通过高效液相色谱和二极管阵列检测器进行检测，建立麻类植物指纹图谱；r>所述高效液相色谱检测的流动相包括有机相和水相，所述有机相优选乙腈，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱中，以有机相作为A相，以水相作为B相，流动相比例均为体积百分比，洗脱步骤如下：0～26min，起始：流动相A为8％～12％、流动相B为88％～92％，终止：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；26～30min，流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；30～40min，起始：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％，终止：流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％；40～60min，流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％。为了更好的实现本专利技术，所述梯度洗脱中，流动相比例均为体积百分比：0～26min，起始：流动相A为10％、流动相B为90％，终止：流动相A为88％、流动相B为12％；26～30min，流动相A为88％、流动相B为12％；30～40min，起始：流动相A为88％、流动相B为12％，终止：流动相A为100％、流动相B为0％；40～60min，流动相A为100％、流动相B为0％。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测中，检测波长为200-280nm，优选为210nm。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测中，色谱柱的柱温为25-35℃，优选为25℃。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测中，检测流速为1.0mL/min。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测中，进样量为10-20μL，优选为15μL。为了更好的实现本专利技术，所述样品溶液制备方法为：收集麻类植物的花序，100℃脱羧，粉碎过筛，精密称定0.1g粉末，加15mL甲醇超声提取，4000r离心，续滤液稀释5倍，即得样品溶液。为了更好的实现本专利技术，所述样品溶液制备方法为：收集10批同一品种麻类植物的花，100℃脱羧7h，粉碎过三号筛，分别称取粉末0.1g，精密称定，加甲醇15mL，45KHz下超声提取20min，摇匀，4000r离心5min，0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液稀释5倍，即得样品溶液。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。为了更好的实现本专利技术，所述高效液相色谱检测的比对物质是次大麻二酚(CBDV)，大麻萜酚(CBG)，大麻二酚(CBD)，次四氢大麻酚(THCV)，大麻酚(CBN)，四氢大麻酚(THC)，大麻环酚(CBL)。与现有技术相比较，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术指纹图谱相似度高，分离度、重复性好，色谱检测时间在60min内，为评价麻类药用植物的质量提供了新方法。2、本专利技术通过对10批同一品种麻类药用植物脱羧花的研究，建立了麻类药用植物脱羧花的特征指纹图谱共有模式，确定了51个共有峰并标定了其中的7个已知成分，填补了原质量控制方法的空缺，具有较高的应用价值。3、本专利技术对比了18个不同品种麻类药用植物脱羧花的特征指纹图谱，根据其相似度差异，分别建立了两类不同的指纹图谱共有模式，并分析其主成分差异，可为实验研究及公安刑侦工作提供参考，具有较高的应用价值。4、本专利技术中的高效液相色谱方法精密度较高、重现性良好，具有一定的专属性。附图说明图1-11为不同流动相梯度的色谱图；图12-14为不同柱温时的色谱图；图15-18为不同检测波长的色谱图；图19-21为不同进样量的色谱图；图22-23为不同提取次数的色谱图；图24为平行样品溶液的叠加色谱图；图25为10批麻类植物花脱羧样的对照指纹图谱；图26-27为不同品种麻类植物花脱羧样的对照指纹图谱；图25-27中，1为CBDV，2为CBG，3为CBD，4为THCV，5为CBN，6为THC，7为CBL。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步地详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此，在不脱离本专利技术上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本专利技术的范围内。实施例100℃干燥7h的麻类植物花序，打粉，过三号筛，用于建立指纹图谱测定方法。一、色谱条件称取粉末0.1g，精密称定，置于15mL离心管中，加甲醇15mL，超声提取20min(45KHz)，摇匀，离心(4000r,5min)，0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液稀释5倍，即得样品溶液。1.流动相梯度样品溶液依照表1的色谱条件测定，比较不同洗脱梯度时的谱图，以选取较优的洗脱梯度。洗脱梯度见表2，结果如图1-6所示，图1为梯度一的色谱图；图2为梯度二的色谱图；图3为梯度三的色谱图；图4为梯度四的色谱图；图5为梯度五的色谱图；图6为梯度六的色谱图；图7为梯度七的色谱图；图8为梯度八的色谱图；图9为梯度九的色谱图；图10为梯度十的色谱图；图11为梯度十一的色谱图；梯度六时各主色谱峰之间的分离度较佳，且检测时间较短，故梯度六较优。表1色谱条件表2流动相梯度2.柱温样品溶液依照表3的色谱条件分别在柱温为25、30、35℃时测定，以选取较佳的柱温，结果如图12-14所示，图12为25℃的色谱图；图13为30℃的色谱图；图14为35℃的色谱图。三种柱温下各主色谱峰之间的分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种麻类植物指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括：/n收集麻类植物的花序，制备样品溶液后通过高效液相色谱和二极管阵列检测器进行检测，建立麻类植物指纹图谱；/n所述高效液相色谱检测的流动相包括有机相和水相，所述有机相优选乙腈，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱中，以有机相作为A相，以水相作为B相，流动相比例均为体积百分比，洗脱步骤如下：/n0～26min，起始：流动相A为8％～12％、流动相B为88％～92％，/n终止：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；/n26～30min，流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；/n30～40min，起始：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％，/n终止：流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％；/n40～60min，流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％。/n

【技术特征摘要】
1.一种麻类植物指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括：
收集麻类植物的花序，制备样品溶液后通过高效液相色谱和二极管阵列检测器进行检测，建立麻类植物指纹图谱；
所述高效液相色谱检测的流动相包括有机相和水相，所述有机相优选乙腈，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱中，以有机相作为A相，以水相作为B相，流动相比例均为体积百分比，洗脱步骤如下：
0～26min，起始：流动相A为8％～12％、流动相B为88％～92％，
终止：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；
26～30min，流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％；
30～40min，起始：流动相A为86％～90％、流动相B为10％～14％，
终止：流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％；
40～60min，流动相A为98％～100％、流动相B为0％～2％。


2.根据权利要求2所述一种麻类植物的纹图谱的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，流动相比例均为体积百分比：
0～26min，起始：流动相A为10％、流动相B为90％，
终止：流动相A为88％，流动相B为12％；
26～30min，流动相A为88％、流动相B为12％；
30～40min，起始：流动相A为88％、流动相B为12％，
终止：流动相A为100％、流动相B为0％；
40～60min，流动相A为100％、流动相B为0％。


3.根据权利要求1或2所述一种麻类植物指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测中，检测波长为200-280nm，...

【专利技术属性】
技术研发人员：占卓，黄青，单世斌，苏丽辉，黄丽婵，赵萍，
申请(专利权)人：福建省中科生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35