一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用，其方法包括：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件的优化、测定以及用指纹图谱软件对所得图谱进行处理。本发明专利技术采用不同固定相的色谱柱通过六通阀连接，同一流动相梯度洗脱，多种特征性指标成分得到了良好分离，相比于现有建立的指纹图谱法，能实现甜梦口服液尽可能多的特征性成分被分离检测，得到更多的指纹图谱特征峰，更全面的反映甜梦口服液的成分信息，该方法还具有操作简便，精密度高，稳定性和重现性较好等优点，能更加全面、科学评价甜梦口服液的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证，为其质量标准的完善提供参考。

A fingerprint construction method of tianmeng oral liquid and its application

The invention discloses a method for constructing fingerprint of tianmeng oral liquid and its application. The method includes: preparation of test solution, preparation of reference solution, optimization of chromatographic conditions, determination and processing of the obtained fingerprint with fingerprint software. The chromatographic column of different stationary phases is connected by a six-way valve, gradient elution of the same mobile phase, and a variety of characteristic index components are well separated. Compared with the existing established fingerprint method, the invention can realize the separation and detection of as many characteristic components as possible, obtain more fingerprint characteristic peaks, and more comprehensively reflect the component information of tianmeng oral liquid The method has the advantages of simple operation, high precision, good stability and reproducibility. It can evaluate the quality of tianmeng oral liquid more comprehensively and scientifically, so as to ensure the quality and efficacy of the product and provide reference for the improvement of its quality standard.

【技术实现步骤摘要】
一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用
本专利技术属于高效液相色谱和中药制剂质量控制
，具体涉及一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。甜梦口服液是由刺五加、黄精、蚕蛾、桑椹、党参、黄芪、砂仁、枸杞子、山楂、熟地黄、炙淫羊藿、陈皮、茯苓、制马钱子、法半夏、泽泻和山药共17味药材通过现代工艺精制而成的中药复方制剂，具有良好的益气补肾，健脾和胃，养心安神的功效，临床主要用于头晕耳鸣，视减听衰，失眠健忘，食欲不振，腰膝酸软，心慌气短和中风后遗症。对脑功能减退，冠状血管疾患，脑血管栓塞及脱发也有一定作用。《中国药典》2015年版采用薄层色谱法鉴别异嗪皮啶、黄芪甲苷、淫羊藿苷和橙皮苷四种化学成分和采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量来对甜梦口服液进行质量控制，但甜梦口服液作为中药复方制剂，仅鉴别四种指标成分和测定一种指标成分的含量，忽略了中药多种成分、多种机制的协同作用，难以全面控制其药品质量。指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，能较全面地反映中药所含化学成分的相对关系，体现了中药化学成分的复杂性和相关性，能真正对中药内在质量进行有效表征、综合评价和整体控制。CN109001327A公开了一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用，初步实现了甜梦口服液多化学成分的分析及质量控制。然而专利技术人进一步研究发现，对于成分复杂的甜梦口服液，上述方法的分离度和峰容量等仍相对有限，反映成分信息不够丰富、全面。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题，专利技术人在前述研究的基础上进一步改进优化，针对甜梦口服液作为一种中药复方制剂，由17味处方药材组成、成分非常复杂多样的特点，通过研究试验，进一步对甜梦口服液中特征性成分有效分离，使其形成特征峰多且有效表征制剂质量的指纹图谱，最终形成本专利技术。专利技术人研究发现，目前建立的指纹图谱特征性成分分离能力有限，对复杂样品往往不能达到理想的分离效果，采用单根色谱柱建立的甜梦口服液指纹图谱方法反映的复方制剂特征性成分数量均相对较少。因此开发建立一种简便、易行、能够提高选择性及分离能力的指纹图谱构建方法具有重要意义。本专利技术的目的之一在于提供一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，相对于目前常用的建立指纹图谱的方法来说，本专利技术通过试验将不同极性的固定相色谱柱通过六通阀连接在一起，可以发挥不同极性色谱柱的分离选择性，改善特征性成分的分离效果，提高峰容量和分离度，使甜梦口服液指纹图谱反映的成分信息更加丰富、全面，为甜梦口服液质量控制及评价提供更有效的参考方法。本专利技术的目的之二在于通过上述方法构建的指纹图谱的应用。通过检测获得待测甜梦口服液指纹图谱，与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，可以用来进行甜梦口服液的质量控制。因此，本专利技术的目的之三在于提供一种甜梦口服液的质量控制方法。为实现上述技术目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一个方面，提供一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备；(2)对照品溶液的制备；(3)测定：对步骤(1)制备得到的供试品溶液和步骤(2)制备得到的对照品溶液进行HPLC检测，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接。优选的，所述方法还包括使用指纹图谱软件对步骤(3)所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。需要说明的是，步骤(1)和(2)并不存在先后顺序之分，所述步骤(1)和(2)具体方法可参照CN109001327A完成。优选的，步骤(3)测定时，色谱条件为：色谱柱为ACEEXCEL与JADE-PAK通过六通阀连接而成。更为优选的，其中一根为C18柱(ACEEXCEL色谱柱(250×4.6mm,5μm；即柱长为250mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为5μm))，另一根为C8柱(JADE-PAK色谱柱(50×4.6mm,3.5μm；即柱长为50mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为3.5μm))。连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2(如图1A)，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6(如图1B)，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2(如图1C)，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6(如图1D)，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次；流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱；流动相流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃。柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。本专利技术的第二个方面，提供上述构建方法和/或上述构建方法得到的指纹图谱在至少如下1)-3)任意一种或多种中应用：1)甜梦口服液指纹图谱质量控制；2)监控甜梦口服液生产；3)鉴别甜梦口服液产品真伪。本专利技术的第三个方面，提供一种甜梦口服液的质量控制方法，包括以下步骤：(1)取多个批次的甜梦口服液按上述构建方法得到甜梦口服液样品的指纹图谱，将该多个批次甜梦口服液样品指纹图谱按照均值法生成得到对照指纹图谱；取待测样品制备供试品溶液，按照上述构建方法的步骤进行操作，获得待检测样品指纹图谱；(2)将待测样品指纹图谱与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量，计算方法为相关系数法。本专利技术取得以下有益效果：与现有的单一色谱柱建立的甜梦口服液指纹图谱相比，本专利技术将不同极性的色谱柱通过六通阀连接，建立了甜梦口服液指纹图谱的改进方法，并测定相应指纹图谱，通过梯度洗脱方式，在不同极性的色谱柱上能改善特征性成分的分离选择性，进而提高分离能力，得到的指纹图谱特征峰相对增加(峰容量变大)，更能全面反映甜梦口服液的物质成分信息，有效表征该制剂质量。同时本专利技术所述方法简便易行，所有检测的组分均在75min内被分离，精密度高，重现性好，得到的指纹图谱分离度较好、特征峰多、各峰响应强度较均匀，能全面、客观地评价甜梦口服液质量，可用于甜梦口服液的质量控制，监控甜梦口服液生产；同时鉴别甜梦口服液产品真伪，因此具有良好的实际应用之价值。附图说明图1为本专利技术基于柱切换技术的色谱柱连接方式图；其中，图1A：六通阀切换为1→2；图1B：六通阀切换为1→6；图1C：六通阀切换1→2；图1D：六通阀切换1→6；图2为本专利技术基于柱切换技术建立的各批次甜梦口服液指纹图谱；其中图2A为第一次进样，图2B为第二次进样；图3A为本专利技术基于柱切换技术建立的对照品混合液指纹图谱；图3B为专利(CN109001327A)建立的对照品混合液图谱；图4为本专利技术基于柱切换技术和专利(CN109001327A)建立的三个批次甜梦口服液指纹图谱；图谱中，a，b和c为本专利技术所建立指纹图谱，d，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备；对照品溶液的制备，其特征在于，所述构建方法还包括将供试品溶液和对照品溶液进行HPLC检测，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接；连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次，柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。/n

【技术特征摘要】
1.一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备；对照品溶液的制备，其特征在于，所述构建方法还包括将供试品溶液和对照品溶液进行HPLC检测，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接；连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次，柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。


2.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括用指纹图谱软件对高效液相色谱测定所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。


3.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，色谱条件为：色谱柱由ACEEXCEL与JADE-PAK通过六通阀连接而成。


4.根据权利要求3所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述ACEEXCEL色谱柱填料粒径为5μm、柱长为250mm、柱内径为4.6mm；所述JADE-PAK填料粒径为3.5μm、柱长为50mm、柱内径为4.6mm。


5.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
优选的，流动相流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃。


6.根据权利要求5所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0-5min，流动相A95％-95％，流动相B5％-5％；5-15min，流动相A95％-86％，流动相B5％-14％；15-21min，流动相A86％-82...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂磊，刘肖雁，臧恒昌，张惠，苏美，孙越，姜红，楚广诣，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37