一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法技术

本发明专利技术涉及微量检测技术领域，具体涉及一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法。包括如下步骤：将待测菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；吸取6PD‑DPAN荧光探针和上述菌悬液稀释至MOPS缓冲液中，制得混合液；向无菌96孔板中的每个孔均加入上述的混合液，向除第一孔外的每个孔中均加入不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，检测并记录初始荧光强度值；将上述带有待测样的无菌96孔板进行孵育，每孵育一段时间，检测并记录待测样的荧光强度值。本发明专利技术的检测方法简单，易于实现，利用6PD‑DPAN荧光探针的聚集诱导发光特性和高光稳定性，可实时监测6PD‑DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程。

【技术实现步骤摘要】
一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法
本专利技术涉及微量检测
，具体涉及一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法。
技术介绍
细菌药敏试验(AST)是提供临床病原菌对不同抗菌药物题外敏感程度信息的重要手段，对指导临床用药、监测治疗效果、发现耐药菌株以及新型抗菌药物的研发与筛选具有重要的价值。但传统的细菌药敏试验(AST)都是基于生长的药敏试验方法，依赖于微生物的生长，因此，需要24-48小时或者更长的时间来达到目测或者仪器能分辨的程度。而菌株很难正确和可重复性地确定生长重点，加上结果判断主观性强、无法测出MIC值(纸片扩散法)、适用药物及菌种有限等缺陷，无法为临床带来及时的结果反馈，影响危机重症患者精准用药的同时，也很大程度地影响了药敏测试的临床价值。而为了避免这些问题，目前有报道过几种其他试验方法，包括荧光素霉标记噬菌体法、电化学检测法、实时PCR法和基于纳米颗粒的方法等，但这些方法同样存在缺点：仪器昂贵、成本高、操作复杂、灵敏度低、重复性高等，限制了上述方法的应用。因而，发展可快速、简便、准确的新型细菌药物敏感试验的快本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n步骤(1)：将待测菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；/n步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；/n步骤(3)：向一次性无菌96孔板中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧...

【技术特征摘要】
1.一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤(1)：将待测菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤(3)：向一次性无菌96孔板中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值；
步骤(4)：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板置于恒温35℃的孵育设备中孵育，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板从孵育设备中取出并置于荧光检测设备中，检测并记录待测样的荧光强度值。


2.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，生理盐水的质量分数为0.85％。


3.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：





4.根据权利要求3所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。


5.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值。


6.根据权利要求5所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：付文金，邓任堂，赖丽莎，谢岭平，张露，
申请(专利权)人：东莞市厚街医院，
类型：发明
国别省市：广东;44