【技术实现步骤摘要】
一种石蒜碱作为检测羟自由基荧光探针的测定方法
本专利技术属于荧光探针
，尤其是涉及一种石蒜碱作为检测羟自由基荧光探针的测定方法。
技术介绍
目前，用于检测细胞活性氧的方法主要有电子自旋共振法、高效液相色谱法、紫外分光光度计法以及荧光法。荧光探针检测法是荧光方法中的一种，主要是借助具有特异性受体结合的探针来进行检测，具有特异性受体结合的探针与目标物质进行识别，使得探针分子结构发生改变，进一步改变探针荧光的性质，从而获得目标分子的信息，再借助荧光成像技术使目标物质分子成为可检测的荧光信号，从而在生物体内或者环境中达到可视化检测。荧光探针检测技术灵敏度高，高活性、应用便利，并且荧光探针可以进入细胞与细胞内的活性氧结合，因而主要应用于医学等方面。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供一种石蒜碱作为检测羟自由基荧光探针的测定方法，通过石蒜碱对羟自由基的荧光响应，以及石蒜碱的荧光强度与加入的羟自由基量的关系，能够对微摩尔级的羟自由基进行精确定量。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种...
【技术保护点】
1.一种石蒜碱作为检测羟自由基荧光探针的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)确定石蒜碱的激发与发射波长：使用荧光分光光度计进行检测，在四面光比色皿中加入3200μL浓度为0.6623μM的石蒜碱溶液，开始设置参数先选定一个激发波长为360nm，扫描波长范围设为380-640nm，发现石蒜碱最大激发波长为248nm，最大发射波长为410nm，/n(2)对石蒜碱进行不同离子荧光响应的检测：将所确定的激发波长248nm设置为固定值，扫描范围为258nm-478nm开始扫描，所得的曲线为石蒜碱原溶液的荧光曲线，然后依次在含有1.176μM的石蒜碱溶液中依次加入20μL浓度...
【技术特征摘要】
1.一种石蒜碱作为检测羟自由基荧光探针的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)确定石蒜碱的激发与发射波长：使用荧光分光光度计进行检测，在四面光比色皿中加入3200μL浓度为0.6623μM的石蒜碱溶液，开始设置参数先选定一个激发波长为360nm，扫描波长范围设为380-640nm，发现石蒜碱最大激发波长为248nm，最大发射波长为410nm，
(2)对石蒜碱进行不同离子荧光响应的检测：将所确定的激发波长248nm设置为固定值，扫描范围为258nm-478nm开始扫描，所得的曲线为石蒜碱原溶液的荧光曲线，然后依次在含有1.176μM的石蒜碱溶液中依次加入20μL浓度为10mM的氯化钙、氯化钾、硫酸镁、次氯酸钠、过氧化氢、硫酸亚铁溶液，并进行扫描，得出不同离子对石蒜碱溶液的荧光响应图，保存数据，
(3)不同浓度过氧化氢对石蒜碱的荧光响应检测：在四面光比色皿中加入3400μL浓度为1.176μM的石蒜碱溶液，设置激发波长为248nm，扫描范围为258nm-478nm进行扫描，得到石蒜碱原溶液曲线，之后在比色皿中依次加入20μL的10μM、200μM、500μM、50mM、80mM、100mM、500mM的过氧化氢溶液，并进行扫描，得到不同浓度对石蒜碱溶液的荧光响应图，将扫描得到的数据保存，
(4)不同浓度的羟自由基对石蒜碱的荧光响应检测：羟自由基由3％过氧化氢与硫酸亚铁反应产生，先对石蒜碱原溶液进行扫描，在四面光比色皿中加入3400μL浓度为1.176μM的石蒜碱溶液，设置激发波长为248nm，扫描范围为258nm-478nm，得到石蒜碱原溶液荧光曲线，先加入20μL10mM的过氧化氢，开始扫描，扫描结束后等待2-5分钟再次扫描，直至荧光曲线稳定不再变化，删除加入的过氧化氢曲线；然后加入20μL2.5mM硫酸亚铁溶液，开始扫描，此时得到的曲线是5s后0.1162mM羟基自由基对石蒜碱溶液的荧光响应图，等待5分钟后再次扫描，记录保存所出现的曲线图；继续加入20μL10mM的过氧化氢进行扫描，观察曲线直至不再变化再删除；再加入20μL10mM硫酸亚铁溶液，进行扫描得到5s和5mi...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱彧，张斌，王远宏，徐立婧，张丽霞，
申请(专利权)人：朱彧，
类型：发明
国别省市：天津;12
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