一种热休克蛋白Hsp20的基因克隆、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种热休克蛋白Hsp20的基因克隆、制备方法及应用。通过PCR扩增技术提取并扩增Hsp20蛋白基因，将目的基因扩增产物用于构建重组蛋白表达载体，并转化到宿主菌中，高效表达了酒酒球菌Hsp20蛋白基因。所述的Hsp20蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还提供了Hsp20蛋白基因在不同胁迫条件下的应用，可有效提高宿主微生物在逆境下的生存能力。

Cloning, preparation and application of Hsp20 gene

【技术实现步骤摘要】
一种热休克蛋白Hsp20的基因克隆、制备方法及其应用
本专利技术涉及基因工程克隆蛋白质领域，特别涉及一种热休克蛋白Hsp20的基因克隆、制备方法及其应用。
技术介绍
微生物在培养过程及保存中，只有在适宜的外界条件和适当的营养物质下，微生物才能正常生长。如果外界条件不适宜，会受到底物不足、冷热、酸碱、渗透压等因素的影响，这些因素会抑制微生物生长甚至引起死亡，菌株的生长会受到影响，而且还会抑制或减少代谢产物的生产。酸胁迫，高温胁迫、氧胁迫等是常见的微生物细胞所面临的胁迫，提高微生物的胁迫抗性，将有利于微生物在逆境环境下生存，保护细胞的正常生命活动。酒酒球菌在冷冻干燥环境中，诱导了热休克Hsp20蛋白的表达，使得菌体对冷冻干燥有了抗性，并且Hsp20蛋白的表达量更高，差异表达最明显，酒酒球菌抗冷冻干燥的能力越强。酒酒球菌中的Hsp20蛋白基因，可以增强细胞对损害的耐受程度，维持细胞正常的代谢功能，与生物在逆境下的生存能力关系密切。因此，可以利用转基因技术将酒酒球菌中Hsp20蛋白基因转入其他菌株中表达，提高该菌体的抗冷冻干燥能力和对不利环境的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种热休克蛋白Hsp20，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。/n

【技术特征摘要】
1.一种热休克蛋白Hsp20，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所述。


2.一种如权利要求1中所述热休克蛋白Hsp20，其特征在于，Hsp20的基因核苷酸序列如SEQIDNO.2所述。


3.一种如权利要求1或2中所述热休克蛋白Hsp20的基因克隆方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用基因组DNA提取试剂盒从酒酒球菌中提取出总DNA；
(2)以提取的总DNA为模板，利用设计的克隆引物和表达引物，通过PCR扩增得到Hsp20蛋白基因片段；
所述PCR反应条件：①95℃预变性3min，②95℃变性15s，③50℃退火30s，④72℃延伸30s，⑤重复35个循环，⑥72℃延伸5min⑦降温至4℃；
上游引物：5’-CCGGAATTCATGGCAAATGAATTAATGGA-3’
下游引物：5’-CCGCTCGAGTTGGATTTCAATATGATGAGT-3’
(3)将克隆产物利用EcoRI，XhoI酶切后插入质粒载体中构建重组蛋白表达载体。


4.根据权利要求3中所述的一种热休克蛋白Hsp20的基因克隆方法，其特征在于：所述酒酒球菌的菌株为酒酒球菌SD-2a。


5.一种重组蛋白表达载体，其特征在于，重组质粒中包含权利要求2中所述的Hsp20蛋白基因。


6.根据权利要求5中所述的一种重组蛋白表达载体，其特征在于：所述重组质粒为pTriEx-hsp20质粒。


7.一种热休克蛋白Hsp20的制备方法，其特征在于：包括权利要求6中所述重组蛋白表达载体的转化、重组Hsp20基因的表达及重组Hsp20蛋白的纯化，具体步骤如下：
(1)重组蛋白表达载体的转化：将重组质粒1μl加入100μl感受态宿主菌中，置冰上20min，在42℃热激90s，迅速置冰中5min，加入600μlLB培养液，在37℃和220r/min下振摇1h，离心后全部涂布于含50μg/mlAmp的LB平板，37℃倒置培养过夜；
所述的LB液体培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：张国强，戚一曼，黄玉，孟想，
申请(专利权)人：安徽工程大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34