一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，该方法能同时检测出6‑苄基腺嘌呤、4‑氯苯氧乙酸钠和赤霉素三种常使用的植物生长调节剂，特异性、灵敏度和稳定性均高，操作简单，并且检出限更低。通过对现有检测的技术中的各种参数进行调整，尤其是对流动相以及样品前处理时对其处理所采用的溶剂、条件等进行优化，简化了检测过程，节约检测时间，更适合大批量的检测的工作。

A method for simultaneous determination of multiple plant growth regulators residues in vegetables

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法
本专利技术涉及检测
，具体涉及一种同时检测蔬菜中多种植物调节剂残留量的方法。
技术介绍
植物生长调节剂(plantgrowthregulators)是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应，通过人工合成或提取的与植物激素具有类似生理和生物学效应的物质，是用于调节植物生长发育的一类农药，包括人工合成的化合物和从生物中提取的天然植物激素，如赤霉素、2，4-D、助壮素等，在植调节果蔬生长、提高作物品质和产量等方面已被广泛应用。然而，在对农业生产带来巨大经济收益的同时，有关植物生长调节剂滥用及使用不当的情况频频发生。比如过分催熟的畸形草莓，催熟剂催熟的芒果、无根水泡发的豆芽等，人体摄入过量植物生长调节剂，会刺激皮肤黏膜，出现恶心、呕吐等现象，长期使用还有一定的累积毒性。尤其是豆芽是我们日常食用量较大的一类蔬菜，2015年国家食品药品监督管理总局、农业部、国家卫生和计划生育委员会也发布了关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告(2015年第11号)，明确规定：6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质作为低毒农药登记管理并限定了使用范围，为确保豆芽食用安全，生产者不得在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质，豆芽经营者不得经营含有6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质的豆芽。为了保障人民群众身体健康，建立一种准确、可靠的测试方法非常重要。现有的豆芽中植物生长调节剂的仪器分析检测方法有液相色谱法和液相色谱串联质谱法，检测结果不太精确，检测耗时长，且前处理过程相对繁琐，耗时较长，检出限较高。虽然《BJS201703豆芽中植物生长调节剂的测定》中公开了采用液相色谱-质谱联用仪对11中豆芽中的植物生长调节剂进行测定，但是专利技术人按照此方法进行过检测，检出限高，并且前处理步骤复杂，并且检测耗时长。
技术实现思路
为解决现有技术中缺陷，本专利技术提供一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，该方法能同时检测出三种常使用的植物生长调节剂，特异性、灵敏度和稳定性均高，操作简单，并且检出限更低。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，所述植物生长调节剂为6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠和赤霉素，所述方法包括如下步骤：(1)待测样品前处理：A.提取称取5.00g样品于50mL离心管中，加入0.01mol/L的氢氧化钠溶液20mL，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，取上清液10mL于另一50mL离心管中；B.净化向10mL上清液中加入2mL体积分数为50％的盐酸水溶液，混匀，加入20mL乙酸乙酯提取，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，吸取全部上清液于50mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干；C.复溶向吹干的离心管中加入1mL甲醇，涡旋溶解，过0.22μm滤膜，得到含植物生长调节剂的滤液，即待测样，待分析；(2)配制标准品溶液：分别称取6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素标准品10mg于10mL容量瓶中，分别用甲醇配制成1000μg/mL的标准储备液，分别移取标准储备液，制成浓度为10μg/mL混合标准品对照溶液；然后制作标准曲线时将标准储备液用空白基质溶液配制成浓度分别为浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、800ng/mL标准品溶液备用；(3)将前处理好的样品用液相色谱-质谱联用仪对待测样品进行定性和定量检测，得到待测样品的植物生长调节剂的含量，具体为：A、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱-质谱联用仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流色谱图、定量离子对色谱图和定性离子对色谱图；B、将步骤(2)配制的不同浓度的标准曲线溶液，用液相色谱-质谱联用仪分析检测，检测条件与待测样品溶液相同，获得标准品溶液的总离子流色谱图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；C、以待测物质的定量离子对和定性离子对的色谱峰面积制作得到植物生长调节剂标准曲线；D、根据待测样品溶液中植物生长调节剂的定量离子对和定性离子对的色谱峰，结合标准曲线，计算得到待测样液中植物生长调节剂的浓度C，并按以下公式计算得到蔬菜样品中植物生长调节剂的含量X，含量计算公式为：X＝C*V*f*1000/(m*1000)其中X为待测样品中植物生长调节剂的含量，单位为μg/kg；C是待测样品中植物生长调节剂的浓度，单位为ng/mL；V是待测样品溶解体积，单位为mL；f为前处理稀释倍数，本实验中f为2；m是待测样品质量，单位为g。具体地，所述液相色谱-质谱联用仪对待测样品进行检测的条件为：流动相为甲醇和5mmol/L的乙酸铵混合水溶液，两者体积比为(20～90)∶(10～80)，梯度洗脱，洗脱时间为6min，流动相的流速为0.4mL/min；色谱柱为十八烷基硅烷色谱柱，所述色谱柱的尺寸为3.0*150mm*2.7micron；检测的进样量为5μL，柱温：30℃。所述梯度洗脱具体情况见表1：表1梯度洗脱所述液相色谱-质谱联用仪检测时的质谱条件为：离子化模式：电喷雾电离负离子模式；扫描方式：多反应监测(MRM)；喷射电压：2000V；DeltaEM：200V；雾化器压力：40psi；干燥气流量：10L/min；干燥气温度：345℃。其中，所述蔬菜样品为可能含有植物生长调节剂的蔬菜，优选为豆芽。本专利技术的有益效果为：本专利技术的检测方法检测时间短、灵敏度高、选择性强、重复性好、操作简单。本专利技术通过对现有检测的技术中的各种参数进行调整，尤其是对流动相以及样品前处理时对其处理所采用的溶剂、条件等进行优化，简化了检测过程。通过选择所述检测的流动相为甲醇和5mmol/L乙酸铵水溶液；进而使得本专利技术的方法能够同时测定植物生长调节剂中的6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠和赤霉素，特异性高和灵敏度高，检出限更低。专利技术人还对本专利技术方法和以下两种方法进行了具体的比较，具体：与《SN/T3725-2013出口食品中对氯苯氧乙酸残留量的测定》相比，优点为：本专利技术中，用碱溶液提取目标化学物，通过液液萃取法净化样品制备待测样，通过液相质谱联用仪进行定性、定量测定。两者相比，本专利技术操作步骤少，系统误差更小；借助质谱多反应监测，可同时测量6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠和赤霉素三种植物生长素调节剂，检出限更低，检测效率更高，更适用于大量样品、多种检测目标的实际检测工作。与《BJS201703豆芽中植物生长调节剂的测定》相比，优点为：本专利技术中，每份样品检测需要的用量为5g，提取试剂仅需氢氧化钠溶液，净化步骤为液液萃取法，两者相比，样品用量少、操作更加简便，更适合样品量较少、批次量大的抽样检测工作；使用液相质谱联用仪测定时，本方法用时仅需30分钟，是《B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，所述植物生长调节剂为6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠和赤霉素，所述方法包括如下步骤：/n(1)待测样品前处理：/nA.提取/n称取5.00g样品于50mL离心管中，加入0.01mol/L的氢氧化钠溶液20mL，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，取上清液10mL于另一50mL离心管中；/nB.净化/n向10mL上清液中加入2mL体积分数为50％的盐酸水溶液，混匀，加入20mL乙酸乙酯提取，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，吸取全部上清液于50mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干；/nC.复溶/n向吹干的离心管中加入1mL甲醇，涡旋溶解，过0.22μm滤膜，得到含植物生长调节剂的滤液，即待测样，待分析；/n(2)配制标准品溶液：/n分别称取6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素标准品10mg于10mL容量瓶中，分别用甲醇配制成1000μg/mL的标准储备液，分别移取标准储备液，制成浓度均为10μg/mL混合标准品对照溶液；然后制作标准曲线时将标准储备液用空白基质溶液配制成浓度分别为浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、800ng/mL标准品溶液备用；/n(3)将前处理好的样品用液相色谱-质谱联用仪对待测样品进行定性和定量检测，得到待测样品的三种植物生长调节剂的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，所述植物生长调节剂为6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠和赤霉素，所述方法包括如下步骤：
(1)待测样品前处理：
A.提取
称取5.00g样品于50mL离心管中，加入0.01mol/L的氢氧化钠溶液20mL，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，取上清液10mL于另一50mL离心管中；
B.净化
向10mL上清液中加入2mL体积分数为50％的盐酸水溶液，混匀，加入20mL乙酸乙酯提取，涡旋混匀5min，5000r/min离心5min，吸取全部上清液于50mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干；
C.复溶
向吹干的离心管中加入1mL甲醇，涡旋溶解，过0.22μm滤膜，得到含植物生长调节剂的滤液，即待测样，待分析；
(2)配制标准品溶液：
分别称取6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素标准品10mg于10mL容量瓶中，分别用甲醇配制成1000μg/mL的标准储备液，分别移取标准储备液，制成浓度均为10μg/mL混合标准品对照溶液；然后制作标准曲线时将标准储备液用空白基质溶液配制成浓度分别为浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、800ng/mL标准品溶液备用；
(3)将前处理好的样品用液相色谱-质谱联用仪对待测样品进行定性和定量检测，得到待测样品的三种植物生长调节剂的含量。


2.根据权利要求1所述的同时检测蔬菜中多种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，步骤(3)具体如下：
A、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱-质谱联用仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流色谱图、定量离子对色谱图和定性离子对色谱图；
B、将步骤(2)配制的不同浓度的标准曲线溶液，用液相色谱-质谱联用仪分析检测，检测条件与待测样品溶液相同，获得标准品溶液的总离子流色谱图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；
C、以待测物质的定量离子对和定性离子对的色谱峰面积制作得到植物生长调节剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文涛，高素兰，刘清亮，孙艳丽，周秀芝，
申请(专利权)人：山东拜尔检测股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37