一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，属于食品质量安全检测技术领域。所述蔗糖转化酶酶值的检测方法包括以下步骤：(1)蜂蜜样品中酶液的提取；(2)酶液的显色反应；(3)蔗糖转化酶酶值计算。所述检测方法是基于酶液催化蔗糖产生的还原糖溶液和3,5‑二硝基水杨酸溶液共热后，3,5‑二硝基水杨酸能够被还原成棕红色氨基化合物的原理建立的蜂蜜中蔗糖转化酶酶值实现。本发明专利技术采用超滤的方法富集了蜂蜜中的酶，并去除了蜂蜜中还原糖的干扰，对反应中显色剂溶液用量，缓冲液pH值，反应温度，反应时间进行了优化，进而建立了一种评价蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，具有操作简单，准确高效等优点。

A detection method of invertase value in honey

【技术实现步骤摘要】
一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法
本专利技术属于食品质量安全检测
，具体涉及一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法。
技术介绍
蜂蜜是蜂产业中最为重要的产品之一。蜂蜜中含有多种酶类，包括淀粉酶、蔗糖转化酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、酸性磷酸脂酶、β-葡萄糖苷酶等，这些酶既有蜜源植物本身存在的，也有蜂蜜在酿造过程中由蜜蜂唾液腺分泌物混入的。蜂蜜中存在的酶受蜂蜜加工过程受热程度以及储藏时间的影响其活性会逐渐降低，因此，可通过测定蜂蜜中酶的活性来对蜂蜜的新鲜度及品质加以评价。常用的对蜂蜜酶值的评价方法是测定蜂蜜中淀粉酶酶值，但是通过测定蔗糖转化酶的酶值来综合评价蜂蜜的成熟度、加工过程受热情况及储藏时间更具合理性。这主要是因为，作为生物活性物指指标，蔗糖转化酶比淀粉酶对环境的稳定性要更为敏感。此外，从蜂蜜的成熟过程来看，其生物化学过程主要是蔗糖转化为葡萄糖和果糖的过程，该过程的转化程度和作用强弱取决于蔗糖转化酶的活性，而不是淀粉酶。目前，国际上已经有越来越多的国家逐步将蔗糖转化酶酶值的测定加入到评价蜂蜜的质量及判断蜂蜜新鲜度的体系之中，已有关于蜂蜜中酶值测定的分析方法以滴定法为主。滴定法常采用铁氢化钾滴定法来测定蔗糖转化酶酶值，但该方法对滴定操作条件控制要求很高，且操作熟练与否对滴定速度、滴定终点观察及测定结果影响较大。截止至目前，我国还没有形成对蜂蜜中蔗糖转化酶活性的通用检测方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，具有操作简便、高效准确等优点。本专利技术提供了一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，包括以下步骤：1)将蜂蜜溶解后离心，得到澄清液和沉淀，将所述沉淀复溶，得到复溶液，将所述澄清液进行超滤，得到的浓缩液稀释后再次超滤，得到的再次超滤浓缩液与所述复溶液混合定容，得到酶液；所述溶解、复溶或稀释用溶液为pH值4.0～6.8的缓冲液；2)分别量取2mL所述酶液置于两支试管中，试管1为实验组，试管2为对照组，向试管2中加入1mL灭活液进行灭活，将试管1、试管2和蔗糖溶液在30℃～50℃条件下水浴10min，分别吸取蔗糖溶液2mL加至试管1和试管2中，在30℃～50℃条件下反应0.5～3.0h，向试管1中加入1mL所述灭活液终止反应；3)从试管1和试管2中吸取相同体积的反应液1～3mL分别移置两个具塞比色管后，分别加入显色剂溶液0.25～3.5mL，在沸水浴中反应5min，冷却，用水将各具塞比色管溶液定容至刻度，将得到的两个具塞比色管中溶液于540nm波长下测定吸光度OD值，用定容至所述刻度的不含所述反应液的显色剂溶液做空白调零；4)绘制还原糖标准曲线，按照公式(2)计算蔗糖转化酶酶值；式(2)中：5表示酶反应体系，单位为mL；2表示取2mL酶液参与反应；50表示酶液总体积，单位为mL；X表示蜂蜜样品质量，单位为g；1表示反应时间1h；所述试样中还原糖量的计算方法按照式(1)计算；式(1)中：Y表示反应液的体积，单位为mL；所述蔗糖转化酶酶值为在40℃、pH6.0缓冲溶液实验条件下，1g蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶1h能使蔗糖水解释放还原糖的毫克数。优选的，步骤1)中所述超滤用滤膜的截留分子量为3K～50K。优选的，步骤1)中所述超滤时，离心转速为2500～6000g，离心的时间为10～60min，离心的温度为4℃。优选的，步骤1)中pH值4.0～6.8的缓冲液包括0.1mol/L醋酸盐缓冲液；所述醋酸盐缓冲液的pH值为6。优选的，步骤2)中所述灭活液为NaOH溶液；所述NaOH溶液的摩尔浓度为1mol/L。优选的，步骤2)中所述反应的温度为40℃，所述反应的时间为1.0h。优选的，步骤2)中所述蔗糖溶液的质量浓度为5.0％。优选的，步骤3)中所述显色剂溶液的配制方法如下：将6.9g结晶酚用15.2mL浓度为100g/L的NaOH溶液溶解，用水稀释至69mL，再加入6.9g亚硫酸氢钠溶解，得到溶液A；将25g酒石酸钾钠用300mL浓度为100g/L的NaOH溶液溶解，再加入880mL浓度为10g/L的3,5-二硝基水杨酸溶液，得到溶液B；将所述溶液A和溶液B混合，得到显色剂溶液；所述溶液A和溶液B制备顺序没有限制。优选的，步骤3)中所述显色剂溶液的添加体积为1.5mL。优选的，所述蜂蜜包括蜂蜜原蜜或商品蜂蜜。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点：1)分光光度法具有操作便捷、灵敏度高，测量结果准确等优点是现行的测定蜂蜜中淀粉酶酶值的国际通用方法。本专利技术是基于3,5-二硝基水杨酸溶液和还原糖溶液共热后，3,5-二硝基水杨酸能够被还原成棕红色氨基化合物的原理建立了一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的分光光度法检测方法，操作简单，稳定性好。2)本专利技术采用超滤的方法富集了蜂蜜中的酶，去除了蜂蜜中还原糖的干扰，并对反应中显色剂溶液用量，缓冲液pH值，反应温度，反应时间进行了严格限定，具有样品处理简单，检测准确度高、稳定性好的特点。3)到目前为止，我国还没有形成对蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的通用检测方法，本专利技术中的蔗糖转化酶酶值检测方法易于操作，准确高效，适用于所有蜂蜜样品的检测，便于大规模推广应用。4)本专利技术提供的检测方法为蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的测定提供一个新的思路，可作为评价市售商品蜂蜜新鲜度及品质的综合指标之一，对完善我国蜂蜜品质评价体系，提高我国蜂蜜产品市场竞争力，促进我国养蜂业的蓬勃发展提具有积极意义。附图说明图1为不同反应温度对蔗糖转化酶酶值的影响折线图。具体实施方式本专利技术提供了一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，包括以下步骤：1)将蜂蜜溶解后离心，得到澄清液和沉淀，将所述沉淀复溶，得到复溶液，将所述澄清液进行超滤，得到的浓缩液稀释后再次超滤，得到的再次超滤浓缩液与所述复溶液混合定容，得到酶液；所述溶解、复溶或稀释用溶液为pH值4.0～6.8的缓冲液；2)分别量取2mL所述酶液置于两支试管中，试管1为实验组，试管2为对照组，向试管2中加入1mL灭活液进行灭活，将试管1、试管2和蔗糖溶液在30℃～50℃条件下水浴10min，分别吸取蔗糖溶液2mL加至试管1和试管2中，在30℃～50℃条件下反应0.5～3.0h，向试管1中加入1mL所述灭活液终止反应；3)从试管1和试管2中吸取相同体积的反应液1～3mL分别移置两个具塞比色管后，分别加入显色剂溶液0.25～3.5mL，在沸水浴中反应5min，冷却，用水将各具塞比色管溶液定容至刻度，将得到的两个具塞比色管中溶液于540nm波长下测定吸光度OD值，用定容至所述刻度的不含所述反应液的显色剂溶液做空白调零；4)绘制还原糖标准曲线，按照公式(2)计算蔗糖转化酶酶值；式(2)中：5表示酶反应体系，单位为mL；2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将蜂蜜溶解后离心，得到澄清液和沉淀，将所述沉淀复溶，得到复溶液，将所述澄清液进行超滤，得到的浓缩液稀释后再次超滤，得到的再次超滤浓缩液与所述复溶液混合定容，得到酶液；所述溶解、复溶或稀释用溶液为pH值4.0～6.8的缓冲液；/n2)分别量取2mL所述酶液置于两支试管中，试管1为实验组，试管2为对照组，向试管2中加入1mL灭活液进行灭活，将试管1、试管2和蔗糖溶液在30～50℃条件下水浴10min，分别吸取蔗糖溶液2mL加至试管1和试管2中，在30～50℃条件下反应0.5～3.0h，向试管1中加入1mL所述灭活液终止反应；/n3)从试管1和试管2中吸取相同体积的反应液1～3mL分别移置两个具塞比色管后，分别加入显色剂溶液0.25～3.5mL，在沸水浴中反应5min，冷却，用水将各具塞比色管溶液定容至刻度，将得到的两个具塞比色管中溶液于540nm波长下测定吸光度OD值，用定容至所述刻度的不含所述反应液的显色剂溶液做空白调零；/n4)绘制还原糖标准曲线，按照公式(2)计算蔗糖转化酶酶值；/n

【技术特征摘要】
1.一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将蜂蜜溶解后离心，得到澄清液和沉淀，将所述沉淀复溶，得到复溶液，将所述澄清液进行超滤，得到的浓缩液稀释后再次超滤，得到的再次超滤浓缩液与所述复溶液混合定容，得到酶液；所述溶解、复溶或稀释用溶液为pH值4.0～6.8的缓冲液；
2)分别量取2mL所述酶液置于两支试管中，试管1为实验组，试管2为对照组，向试管2中加入1mL灭活液进行灭活，将试管1、试管2和蔗糖溶液在30～50℃条件下水浴10min，分别吸取蔗糖溶液2mL加至试管1和试管2中，在30～50℃条件下反应0.5～3.0h，向试管1中加入1mL所述灭活液终止反应；
3)从试管1和试管2中吸取相同体积的反应液1～3mL分别移置两个具塞比色管后，分别加入显色剂溶液0.25～3.5mL，在沸水浴中反应5min，冷却，用水将各具塞比色管溶液定容至刻度，将得到的两个具塞比色管中溶液于540nm波长下测定吸光度OD值，用定容至所述刻度的不含所述反应液的显色剂溶液做空白调零；
4)绘制还原糖标准曲线，按照公式(2)计算蔗糖转化酶酶值；



式(2)中：5表示酶反应体系，单位为mL；
2表示取2mL酶液参与反应；
50表示酶液总体积，单位为mL；
X表示蜂蜜样品质量，单位为g；
1表示反应时间1h；
所述试样中还原糖量的计算方法按照式(1)计算；



式(1)中：Y表示反应液的体积，单位为mL；
所述蔗糖转化酶酶值为在40℃、pH6.0缓冲溶液实验条件下，1g蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶1h能使蔗糖水解释放还原糖的毫克数。


2.根据权利要求1所述检测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令杰，张红城，乔江涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11