B细胞疫苗在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了B细胞疫苗在治疗类风湿关节炎中的应用，以及具有该用途的B细胞疫苗。相比于药物治疗，B细胞疫苗具有以下优点：用量更小，给药频率更低，维持周期更长；皮下注射，简单方便；通过自体免疫调节功能治疗疾病；可有效控制病情，减轻骨侵蚀及关节破坏；自体回输，无免疫耐受问题；副作用小。

The application of B cell vaccine in the preparation of rheumatoid arthritis drugs

【技术实现步骤摘要】
B细胞疫苗在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用
本专利技术涉及自身免疫性疾病治疗药物
，具体涉及B细胞疫苗在治疗类风湿关节炎中的应用，以及具有该用途的B细胞疫苗。
技术介绍
类风湿关节炎(RA)是一种骨侵蚀不可逆转恢复的疾病，具有很强的致残率。但是目前的治疗方案仍然具有一定的局限性：需要终身用药，大多患者只能维持缓解但无法根治，因此迫切需要更加特异、有效且简易的治疗方案。目前RA治疗最常用的药物主要分为c-DMARDs和b-DMARDs；此外还包括新近发展起来的小分子药物，例如JAK抑制剂、BTK抑制剂等。RA的发病与B细胞过度活化产生大量自身抗体密切相关。鉴于B细胞在RA发病中的重要作用，以B淋巴细胞表面分子为靶点的B淋巴细胞靶向治疗近年来得到广泛研究和应用。以CD20单克隆抗体为代表的B淋巴细胞清除治疗是研究较为成熟的方案，且在临床治疗中取得了巨大成功，例如Rituximab(利妥昔)、Ocrelizumab、Ofatumumab等。此外，还有靶向BLyS及其受体的抗体，例如belimumab、atacicept、BR3-Fc等，以及靶向CD22的单克隆抗体，例如Epratuzumab等。除了B细胞清除，还有针对B细胞生长因子(BAFF)的中和药物，包括BAFF中和抗体(如Belimumab，贝利单抗)、BAFF受体TACI或BR3与免疫球蛋白Fc段的融合蛋白。由于RA是一种自身免疫性疾病，免疫学家逐渐认识到通过调节免疫系统紊乱使其重新恢复平衡或许具有更好的疗效。T细胞疫苗治疗的理念首先被提出。T细胞疫苗(TCellVaccine,TCV)是指利用化学或物理方法灭活的致病性T细胞，其失去致病能力，但保持了活化致病性T细胞的免疫特征。目前国内外均有采用T细胞疫苗方案治疗RA等自身免疫病的先例，显示了较好的治疗效果，且与药物治疗相比副作用更小。此外，其他基于诱导T细胞耐受的治疗性疫苗也被提出，包括TCR肽疫苗、抗原肽-MHC分子复合物疫苗、针对MHC的疫苗、针对细胞因子(如IL-17、TNF-α、IL-1β)的肽疫苗、补体肽疫苗等。虽然已经有针对RA的治疗性疫苗，但在临床上选择依然有限，且大部分疫苗在治疗效果上也不尽如人意。
技术实现思路
现有的RA治疗性疫苗种类少，选择有限，效果也欠佳，而类风湿关节炎的发病与B细胞产生大量自身抗体密切相关，以往更多关注于将B细胞作为靶点进行药物研发。本专利技术转变思路，鉴于B细胞在RA发病中的核心作用，开发基于B细胞的治疗性疫苗具有重要的应用前景，因此研发B细胞疫苗，进而发现B细胞疫苗相对于T细胞疫苗可更加直接地调控免疫系统从而达到治疗效果。基于研究成果，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了B细胞疫苗在制备类风湿关节炎治疗药物中的应用。将供体分选后的特异性B细胞在体外进行扩增并给予抗原刺激，然后经过照射使其具有不能增殖但是保持活性的特性，然后回输至受体可以纠正免疫失调从而达到治疗效果，这一疫苗即为B细胞疫苗。第二方面，本专利技术提供了一种具体的B细胞疫苗，用于治疗类风湿关节炎可选或优选的，该疫苗由胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的脾脏细胞经分选后获得的B细胞制备而成。小鼠选择DBA/1型雄性小鼠，出模率高，大概为80-90％；而且CIA模型相比于其他关节炎模型，可引起小鼠关节损害以及免疫系统紊乱，诱发全身病变，与类风湿关节炎患者疾病表型更加接近。鸡和牛的Ⅱ型胶原(CⅡ)均能引起关节炎，首选牛胶原。可选或优选的，上述B细胞疫苗，其制备方法是经分选后获得的B细胞在有功能抗体anti-CD40、CpG、二型胶原(CII)和BAFF存在的条件下刺激培养，使其增殖并获得抗原特异性，然后再经钴源照射，获得疫苗。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述钴源照射的总剂量是20-30Gy，照射方式为按1.5-2.0Gy/min的强度照射15min。优选总剂量30Gy，强度2Gy/min。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述B细胞为CD19+总B细胞，Non-B10B细胞(一种实施例如CD19+CD5-/+CD1dlo)，Plasma细胞(一种实施例如CD19-/+CD138+)，或致病性B细胞。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述B细胞为CD19+总B细胞时，分选方法为：脾脏细胞利用磁珠分选的方法(例如使用试剂盒STEMCELL，货号18954)，阳性选择获得所有CD19+B细胞。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述B细胞为Non-B10B细胞时，分选方法为：脾脏细胞先经抗体CD19-FITC、CD5-APC、CD1d-PE进行表面染色，然后进行流式细胞分选，收集除B10细胞(CD19+CD5+CD1dhi，Immunity2008,28:639-650)之外的所有B细胞(如CD19+CD5-/+CD1dlo)，获得Non-B10B细胞。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述B细胞为Plasma细胞时，分选方法为：脾脏细胞经抗体CD19-FITC和CD138-APC进行表面染色，然后用流式细胞仪分选表型为CD19-/+CD138+的Plasma细胞。可选或优选的，上述B细胞疫苗，所述B细胞为致病性B细胞时，分选方法为：采用流式分选的方式，富集CD19+Collagen-antibody+B细胞，即获得致病性B细胞。第三方面，本专利技术还提供了一种人B细胞疫苗，是利用类风湿关节炎患者的外周血细胞，替代以上任一方案所述的胶原诱导性关节炎小鼠的脾脏细胞制备而成。除所使用的脾脏细胞的替换外，其余制备方法与以上各方案记载相同。包括总B细胞(CD19+)疫苗、Non-B10B细胞(CD19+CD24loCD27+)疫苗、Plasma细胞(CD19+CD20-CD27+CD38+)疫苗，或致病性B细胞(ACPA-specificBcells)疫苗。第四方面，本专利技术还提供了一种治疗类风湿关节炎的药物，其药效成分含有以上任一所述的B细胞疫苗。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术创造性地发现B细胞疫苗可用于治疗类风湿关节炎，使得RA的免疫治疗不再只依赖于T细胞疫苗或B细胞靶向治疗，为临床提供了新的治疗途径。相比于其他药物治疗，本专利技术所述的B细胞疫苗具有以下优点：用量更小，给药频率更低，维持周期更长；皮下注射，简单方便；通过自体免疫调节功能治疗疾病；可有效控制病情，减轻骨侵蚀及关节破坏；自体回输，无免疫耐受问题；副作用小。CIA小鼠治疗时，CD19+总B细胞疫苗以及Non-B10B细胞疫苗的用量为1×107，plasma细胞疫苗以及致病性B细胞疫苗用量为1×105，每5天一次，共注射3次。文献报道T细胞疫苗治疗CIA，多为预防性疫苗，即在二次免疫前给予疫苗干预，治疗剂量为单次1×107。相比于预防模型，治疗模型更能准确反映疗效，在临床上也具有更大的前景(参考文献：TCellVaccinationInhibitsTh1/Th17/TfhFrequencie本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.B细胞疫苗在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.B细胞疫苗在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。


2.一种B细胞疫苗，用于治疗类风湿关节炎，其特征在于，由胶原诱导性关节炎小鼠的脾脏细胞经分选后获得的B细胞制备而成。


3.根据权利要求2所述的B细胞疫苗，其特征在于，所述B细胞疫苗的制备方法是经分选后获得的B细胞在有功能抗体anti-CD40、CpG、二型胶原(CII)和BAFF存在的条件下刺激培养，然后再经钴源照射，获得疫苗。


4.根据权利要求2所述的B细胞疫苗，其特征在于，所述钴源照射的总剂量是20-30Gy，照射方式为按1.5-2.0Gy/min的强度照射15min。


5.根据权利要求2～4任一所述的B细胞疫苗，其特征在于，所述B细胞为CD19+总B细胞，Non-B10B细胞，Plasma细胞，或致病性B细胞。


6.根据权利要求2～5任一所述的B细胞疫苗，其特征在于，所述B细胞为CD19+总B细胞时，分选方法为：脾脏细胞利用磁珠分选的方法，阳性选择获得所有CD19+B细胞。


7.根据权利要求2～5任一所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗占国，胡凡磊，宋婧，
申请(专利权)人：北京大学人民医院北京大学第二临床医学院，
类型：发明
国别省市：北京;11