快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c‑NTP的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株鼠抗人AD7c‑NTP单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。本发明专利技术所提供的快速检测AD7c‑NTP的免疫层析检测卡，其可用于尿液的检测，用于阿尔兹海默病的诊断。

Immunochromatographic detection card for rapid detection of Alzheimer's disease-related neurofilament protein AD7C NTP and its preparation

【技术实现步骤摘要】
快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡及其制备方法
本专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡及其制备方法。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sDisease,AD)，又称老年性痴呆，是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，具体表现为记忆力减退，认知能力下降以及运动障碍等，并伴随一系列精神症状，最终导致患者生活自理能力完全丧失。随着社会人口老龄化的进展，AD已严重威胁人类健康，庞大的患者群体给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担，但该病的发病机制目前尚未明确。尸检研究证实β淀粉样肽(β-amyloidpeptide,Aβ)沉积形成的老年斑(senileplaque,SP)和神经元纤维缠结(nervefibertangles,NFT)是AD的两大病理特征，并且已经被列入AD的诊断标准。目前AD的诊断主要依据患者临床表现、头颅CT或MRI等影像学资料、神经心理检查量表等综合评价，临床诊断率低。因此寻找高敏感度、特异度、无创的生物学指标以提高AD早期诊断率，为早期生活方式干预、药物干预及延缓病程提供帮助。阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)是一种在神经元中表达的分子量约41kDa的跨膜磷蛋白。1996年麻省总医院的delaMonte教授首次发现AD7c-NTP在AD患者脑内表达水平升高，且出现在组织学尚完整的变性神经元中，证明异常AD7c-NTP表达增加是AD神经变性的早期事件。随后来自不同国家人群的大量研究证实AD7c-NTP存在于NFTs中，主要与诱发神经炎症及神经细胞死亡有关，是一种既能反应AD病理特点又具有较高灵敏性和特异性的AD生物标志物。基于尿液中AD7c-NTP与脑组织和脑脊液中的该蛋白具有相同的分子质量，并且检测结果具有相似性，尿AD7c-NTP可特异性反映大脑神经损伤，与AD7c蛋白具有同等效力。AD7c-NTP特异性分布大脑额叶、颞叶，只反映大脑神经元损伤；AD7c-NTP为神经元轴突跨膜蛋白，与AD7c蛋白共同定位；尿AD7c-NTP蛋白特异性反映脑神经元损伤，所以临床开展尿AD7c-NTP检测可以协助AD患者的早期发现及诊治。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡及其制备方法。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：1)取表面活性剂加入0.1～0.5mol/L，pH值为8～10的硼酸-硼砂缓冲溶液(包含0.5wt％～3wt％PEG2000)中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应；2)取表面带有羧基的荧光乳胶微球的分散液，以硼酸-硼砂缓冲溶液(包含0.5wt％～3wt％的PEG2000)调pH值至8～10后，加入到步骤1)所得的产物中，在25℃下搅拌反应1～5h，反应完毕后，离心去除上清液，得到表面活化的荧光乳胶微球用硼酸-硼砂缓冲溶液复溶备用。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活性剂包含有N，N'-双月桂酰基乙二胺二丙烯酸钠、聚乙二醇单月硅酸酯、十二烷基苯磺酸盐和月桂酰谷氨酸盐，四者的重量比为(0.5～6):(4～9):(0.8～3):(5～14)；所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的重量比为(0.5～120):1。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：取表面活化的荧光乳胶微球加入碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中室温搅拌2～6h，然后加入另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体，室温下搅拌1～4h，再加入10～50mgBSA封闭液，继续搅拌1～4h；在2～8℃下，离心，除去上清液；最后，用0.01M～0.5M的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.4)将固体沉淀物复溶，再加入Proclin300在4℃下保存待用。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述表面活化的荧光乳胶微球与另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体的质量比例为1：(0.01～4)。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述快速检测AD7c-NTP的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述卡壳包括：底槽，其连接于所述PVC板；上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡的制备方法，包括以下步骤：1)包被垫的制备：将一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球混合后，喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥备用；3)组装试纸条：在PVC板上粘接包被垫，并在靠近该包被垫上的质控线的一端搭接吸水垫，在靠近该包被垫上的检测线的一端搭接标记物垫及其连接的样品垫；然后将其切成所需宽度的试纸条，之后将该试剂条放入卡壳。本专利技术的有益效果为：1、本专利技术所提供的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其可用于尿液的检测，以用于阿尔兹海默病的诊断。2、本专利技术所提供的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其能够通过尿液检测AD7c-NTP，避免了穿刺获取脑脊液的风险，易于被患者接受，检测在5～20min之内即可完成，线性检测范围为0.25ng/mL-10ng/mL，极大地提高了检测效率。3、本专利技术所提供的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其灵敏度高、稳定性强、线性范围本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。


2.如权利要求1所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其特征在于，所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。


3.如权利要求2所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其特征在于，所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。


4.如权利要求3所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其特征在于，所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。


5.如权利要求4所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其特征在于，所述快速检测AD7c-NTP的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。


6.如权利要求5所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡，其特征在于，所述卡壳包括：
底槽，其连接于所述PVC板；
上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；
观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。


7.一种权利要求1-6任一项所述的快速检测阿尔茨海默病相关神经丝蛋白AD7c-NTP的免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)包被垫的制备：将一株鼠抗人AD7c-NTP单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；
2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人AD7...

【专利技术属性】
技术研发人员：林斯，柴诗缘，樊涛，
申请(专利权)人：天津华科泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12