A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法，涉及A族链球菌检测技术领域。本发明专利技术公开的A族链球菌抗原试纸条，通过将包被包括有抗A族链球菌检测抗体的硝酸纤维素膜上、包被有抗A族链球菌免疫标记抗体的免疫结合垫、吸水纸、样品垫依次贴附到聚氯乙烯底板制得；该检测卡可通过检测标记物的方法检测待检样品中是否存在A族链球菌抗原；该试纸条和包括有该试纸条的检测卡可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，满足临床使用的需要。

Group A Streptococcus antigen test strip, kit and preparation method

【技术实现步骤摘要】
A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法
：本专利技术涉及A族链球菌检测
，具体而言，涉及一种A族链球菌抗原检测卡及其制备方法和检测试剂盒。
技术介绍
：A族链球菌(Strep-A)，又称化脓性链球菌，是一种全球范围内的人类重要致病菌。它不仅可单独引起感染，也可与其它化脓菌引起混合感染。病人尤其是儿童如不及时接受抗感染治疗，易引起急性咽炎、脓胞病、中毒性休克综合征、侵袭性筋膜炎、猩红热、肺炎、丹毒和变态反应性疾病，如急性风湿热(ARF)、风湿性心脏病(RHD)、急性肾小球肾炎等。有人估计全球每年有51.7万人死于严重Strep-A感染和疾病，另外还有1810万人患严重Strep-A感染，每年新病人178万，其中侵袭性Strep-A感染有66.3万，死亡16.3万人。国内Strep-A是极其重要的致病菌，其诱发的猩红热为国家乙类传染病，平均每年发病约5-6万人，引起人们的广泛关注，为全球热点课题。而目前，市面上缺乏针对A族链球菌检测的试剂盒。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种A族链球菌抗原试纸条。该A族链球菌抗原试纸条可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，检测速度快。本专利技术的另一目的在于提供上述A族链球菌抗原试纸条的制备方法。该制备方法得到的A族链球菌抗原检测卡应用简便，结果准确，为下一步准确治疗由A族链球菌引起的疾病提供了依据，适于大规模推广应用。本专利技术的另一目的在于提供含有上述A族链球菌抗原试纸条的检测卡以及试剂盒。该试剂盒可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，有效满足临床使用的需要。为实现上述目的，本专利技术提供了一种A族链球菌抗原检测试纸条的制备方法采用了如下的技术方案：a.向胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH，再依次加入抗A族链球菌抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，沉淀用重悬液重悬得到胶体金标记的抗A族链球菌抗体；b.将硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板；c.用包被液稀释抗A族链球菌抗体得到检测线工作液；用包被液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线工作液；d.用步骤a得到的胶体金标记的抗A族链球菌抗体对结合垫进行喷金处理得到免疫结合垫，用步骤c得到的检测线工作液、羊抗鼠IgG多抗对照线工作液分别在步骤b得到的贴膜的聚氯乙烯底板上的硝酸纤维素膜上进行划线处理；e.将样品垫、免疫结合垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸如图1所示依次组装后切割得到A族链球菌抗原检测试纸条；优选地，上述技术方案中步骤a的具体步骤是：向所述胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾，混匀调节pH，然后加入抗A族链球菌抗体混匀后静置30min，再加入含10％牛血清白蛋白的牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，制得混合溶液，将混合溶液于4℃、转速为8000g的条件下离心30min得到沉淀，沉淀用重悬液重悬至所述混合溶液的体积的1/3，即得胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液。优选地，上述技术方案中步骤a中，所述碳酸钾为0.1-0.2M的碳酸钾溶液。优选地，上述技术方案中步骤a所述胶体金溶液的浓度(W/V)为0.01％-0.04％。优选地，上述技术方案中步骤a所述碳酸钾溶液体积与胶体金溶液体积比例为：1-10uL：1ml。优选地，上述技术方案中步骤a所述抗A族链球菌抗体的浓度和胶体金溶液的比例为1-50ug:1mL。优选地，上述技术方案中步骤a所述牛血清白蛋白溶液含有8-12％的牛血清白蛋白。优选地，上述技术方案中步骤a所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金溶液体积的1％-10％；优选地，上述技术方案中步骤a所述重悬液为48-52mM的三羟甲基氨基甲烷溶液。优选地，上述技术方案中步骤a所述三羟甲基氨基甲烷溶液每100ml含有：0.8-1.2gBSA、0.48-0.52g聚乙烯吡咯烷酮、1.8-2.2g海藻糖以及3.8-4.2g蔗糖，pH值为8.4-8.6。优选地，上述技术方案中步骤c中所述包被液为0.01M-0.02M的磷酸盐缓冲液，每10mL包被液含有0.18-0.22g海藻糖，pH为7-8。优选地，上述技术方案中步骤c中所述检测线工作液中抗A族链球菌抗体浓度为0.8-1.2mg/mL；所述对照线工作液中羊抗鼠IgG多抗的浓度为0.8-1.2mg/mL。优选地，上述技术方案中步骤d中所述喷金处理和划线处理均通过喷金划膜设备实现。优选地，上述技术方案中步骤d中所述结合垫为玻璃纤维膜。优选地，上述技术方案中步骤e中所述样品垫为玻璃纤维膜；优选地，上述技术方案中步骤e中所述样品垫在使用前，用样品垫处理液对样品垫浸泡后干燥，其中所述样品垫处理液是0.05M的三羟甲基氨基甲烷溶液，每100ml三羟甲基氨基甲烷溶液含有0.5g酪蛋白、0.5g表面活性剂S9以及1.0mL吐温20，pH为8.5。本专利技术提供了一种A族链球菌抗原检测卡的制备方法，将上述获得的A族链球菌抗原检测试纸条置入塑料外壳中，其中，塑料外壳的加样孔在样品垫上方，塑料外壳的观察窗在检测线T和对照线C上方。本专利技术提供了一种A族链球菌抗原试剂盒的制备方法，将上述获得的A族链球菌抗原检测卡装入铝箔袋，与采样吸管、说明书装盒组成A族链球菌抗原检测试剂盒，其中吸样管可选。本专利技术提供了一种A族链球菌抗原试纸条,试纸条自上而下依次由样品垫、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴于聚氯乙烯底板上组成，其中，所述免疫结合垫上包被有标记胶体金的A族链球菌抗体，硝酸纤维素膜设有检测线T和控制线C，检测线包被了抗A族链球菌单克隆抗体，控制线包被了羊抗鼠IgG多抗。本专利技术提供了一种A族链球菌抗原检测卡，包括装有上述试纸条的塑料外壳，其中塑料外壳设有加样孔和观察窗，加样孔在样品垫上方，观察窗在检测线T和对照线C上方。本专利技术提供了一种A族链球菌抗原检测试剂盒，将上述检测卡和采样吸管、说明书装盒得到试剂盒。本专利技术的有益效果包括：(1)本专利技术提供的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，由于经过处理的样品垫在检测过程中达到了减少其他病原体干扰的效果，使消除假阳性的同时不漏检，使得检测结果得到进一步提高，具有较好的特异性。(2)本专利技术提供的由上述方法制得的A族链球菌抗原检测卡基于免疫侧向流层析技术，不需任何仪器设备，不用稀释样本，简便快速，能够通过手工操作、肉眼读取判断样本中是否含有A族链球菌抗原，不会对受检者身体造成伤害，检测速度快，成本低。附图说明：图1为本专利技术实施例中的A族链球菌抗原检测试纸条的结构示意图；图2为本专利技术实施例中的A族链球菌抗原检测卡的透视图；图3为本专利技术实施例中的A族链球菌抗原检测检测卡的俯视图；图4为本专利技术实施例中的A族链球菌抗原检测卡检测不同浓度的A族链球菌的检测结果；图5为本专利技术实施例中的A族链球菌抗原检测卡检测不同病原菌的检测结果。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/na.向胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH，再依次加入抗A族链球菌抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，沉淀用重悬液重悬得到胶体金标记的抗A族链球菌抗体；/nb.将硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板，置于室温中，湿度≤30%条件下或加干燥剂室温密封保存备用；/nc.用包被液稀释抗A族链球菌抗体得到检测线工作液；用包被液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线工作液；/nd.用步骤a得到的胶体金标记的抗A族链球菌抗体对结合垫进行喷金处理得到免疫结合垫，用步骤c得到的检测线工作液、羊抗鼠IgG多抗对照线工作液分别在步骤b得到的贴膜的聚氯乙烯底板上的硝酸纤维素膜上进行划线处理，划线后置于室温中，湿度≤30%条件下干燥；/ne.将样品垫、免疫结合垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸依次组装后切割得到A族链球菌抗原检测试纸条。/n

【技术特征摘要】
1.一种A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.向胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH，再依次加入抗A族链球菌抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，沉淀用重悬液重悬得到胶体金标记的抗A族链球菌抗体；
b.将硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板，置于室温中，湿度≤30%条件下或加干燥剂室温密封保存备用；
c.用包被液稀释抗A族链球菌抗体得到检测线工作液；用包被液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线工作液；
d.用步骤a得到的胶体金标记的抗A族链球菌抗体对结合垫进行喷金处理得到免疫结合垫，用步骤c得到的检测线工作液、羊抗鼠IgG多抗对照线工作液分别在步骤b得到的贴膜的聚氯乙烯底板上的硝酸纤维素膜上进行划线处理，划线后置于室温中，湿度≤30%条件下干燥；
e.将样品垫、免疫结合垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸依次组装后切割得到A族链球菌抗原检测试纸条。


2.根据权利要求1所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤a所述的具体步骤是向所述胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾，混匀调节pH，然后加入抗A族链球菌抗体混匀后静置30min，再加入含10%牛血清白蛋白的牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，制得混合溶液，将混合溶液于4℃、转速为8000g的条件下离心30min得到沉淀，沉淀用重悬液重悬至所述混合溶液的体积的1/3，即得胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液。


3.根据权利要求1或2所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤a中，所述碳酸钾为0.1-0.2M的碳酸钾溶液；
所述胶体金溶液的浓度（W/V）为0.01%-0.04%
所述碳酸钾溶液体积与胶体金溶液体积比例为：1-10uL：1ml；
所述牛血清白蛋白溶液含有10%的牛血清白蛋白；
所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金溶液体积的1%-10%；
所述重悬液为50mM的三羟甲基氨基甲烷溶液；
所述三羟甲基氨基甲烷溶液每100ml含有：1gBSA、0.5g聚乙烯吡咯烷酮、2g海藻糖以及4g蔗糖，pH值为8.5。


4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨标，金巍，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32