一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法，属于生物化学技术领域。本发明专利技术制备的化合物可有效治疗FFAs诱导的脂代谢紊乱及脂肪变性，在给药浓度为20μM，给药24h可以使脂滴面积减少约3倍；并可显著增强HUVEC的细胞活性，显著促进细胞的自我复制，从而促进内皮细胞HUVEC增殖。在给药40μM，给药24h后，可使细胞活力为达到对照的242.233％。本发明专利技术制备的化合物可显著抑制HUVEC细胞因HG诱导的活性氧簇(ROS)的产生，可使HG组平均荧光强度由818.37％降低至176.36％。

Preparation of a new lignan monomer compound from Albizzia julibrissin bark

【技术实现步骤摘要】
一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法
本专利技术涉及一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法，属于生物化学

技术介绍
合欢皮(AlbiziaeCortex)是豆科植物合欢(AlbziajulibrissinDurazz)的树皮，是一种较为常用的中药，性味甘、平，具有解郁、和血、宁心和消肿之功效。近年来，随着学者对合欢皮的深入研究，其化学成分和药理药效活性不断的被发现。目前对于合欢皮中活性化合物的研究主要是通过化学方法提取分离，例如采用乙醇等有机溶剂萃取，并通过大孔树脂洗脱、硅胶柱层析、反向C18色谱分离等技术。迄今为止，合欢皮中已分离出三萜、黄酮、木脂素类等化合物，由于各化合物所具备的药理药效活性尚不明确，且同类化合物分子量或官能团结构类似，对于针对性分离提取特定的化合物带来了一定的困难。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供合欢皮新木脂体化合物的分离方法，包括如下步骤：(1)将合欢皮粉碎，与浓度为70～80％的乙醇按照料液比为1:4～10的比例混合，70～90℃回流提取1～3次，每次1～3小时；(2)过滤除去合欢皮残渣，合并步骤(1)获得的提取液，冷冻干燥，收集粗提物，混悬后依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取；(3)回收正丁醇萃取液，干燥；(4)采用D101大孔吸附树脂，用不同体积分数的乙醇进行洗脱分离，分别富集各洗脱段；(5)对各洗脱段进行硅胶柱层析，采用不同体积分数的二氯甲烷-甲醇混合液梯度洗脱，经TLC检测合并相同组分，收集各洗脱段。在一种实施方式中，所述合欢皮新木脂体化合物包括在一种实施方式中，所述步骤(4)采用体积分数为30％、50％、70％和95％的乙醇进行洗脱分离，分别富集30％乙醇洗脱段、50％乙醇洗脱段、70％乙醇洗脱段、95％乙醇洗脱段。在一种实施方式中，所述步骤(5)对洗脱段进行硅胶柱层析，采用40:1,20:1,16:1,10:1,8:1和6:1的二氯甲烷-甲醇混合液梯度洗脱，收集各洗脱段并分离合欢皮木脂体化合物。在一种实施方式中，步骤(5)收集10:1洗脱段，对10:1洗脱组分过反向硅胶柱进一步纯化，最后采用X-Bridgec-18(5μm，10×250mm)色谱柱，流速4mL/min，以CH3OH为A相，水为B相，按照如下半制备液相分离条件进行洗脱：时间CH3OH体积百分数H2O体积百分数010％90％410％90％526％74％4528％72％6032％68％7050％50％80100％0％收集保留时间为26.50min处的化合物，即得在一种实施方式中，步骤(5)收集8:1洗脱段，对8:1洗脱组分过反向硅胶柱进一步纯化，最后采用X-Bridgec-18(5μm，10×250mm)色谱柱，流速4mL/min，以CH3OH为A相，水为B相，按照如下洗脱条件进行半制备洗脱分离：收集保留时间为31.75min处的化合物，即得在一种实施方式中，步骤(5)收集8:1洗脱段，采用C18色谱柱，以CH3OH为A相，水为B相，按照如下洗脱条件进行洗脱：时间CH3OH体积百分数H2O体积百分数010％90％410％90％523％77％5023％77％55100％0％60100％0％收集保留时间为35.20min处的化合物，即得在一种实施方式中，步骤(5)收集8:1洗脱段，用反向硅胶柱进一步纯化，最后采用X-Bridgec-18(5μm，10×250mm)色谱柱，流速4mL/min，以CH3OH为A相，水为B相，按照如下洗脱条件进行半制备洗脱分离：时间CH3OH体积百分数H2O体积百分数010％90％410％90％523％77％5023％77％55100％0％60100％0％收集保留时间为41.0min处的化合物，即得在一种实施方式中，步骤(5)收集8:1洗脱段，用反向硅胶柱进一步纯化，最后采用X-Bridgec-18(5μm，10×250mm)色谱柱，流速4mL/min，以CH3OH为A相，水为B相，按照如下洗脱条件进行半制备洗脱分离：时间CH3OH体积百分数H2O体积百分数010％90％410％90％527％73％5027％73％55100％0％60100％0％如图5所示，收集保留时间为37.25min处的化合物，即得有益效果：本专利技术提供了一种合欢皮来源化合物的制备方法，能够针对性地分离出五种化合物，纯度均可达96％以上。附图说明图1为10:1洗脱段分析型高效液相色谱图。图2为10:1组分DavisilC18反向柱42％CH3OH洗脱段半备型高效液相色谱图。图3为化合物Aj4的1H-NMR色谱图。图4为化合物Aj4的13C-NMR色谱图。图5为albiosideA的HR-ESI-MS色谱图。图6为8:1洗脱段分析型高效液相色谱图。图7为DavisilC18反向柱32％CH3OH洗脱段的成分Aj5在半备型高效液相色谱检测下的色谱图。图8为化合物(+)-Lyoniresinol-9'-O-glucoside(Aj5)的ESI-MS色谱图。图9为(+)-Lyoniresinol-9'-O-glucoside(Aj5)的13C-NMR色谱图。图10为(+)-Lyoniresinol-9'-O-glucoside(Aj5)的HR-ESI-MS色谱图；图11为DavisilC18反向柱32％CH3OH洗脱段的成分Aj6在半备型高效液相色谱检测下的色谱图。图12为(-)-Lyoniresinol-9'-O-glucoside(Aj6)的ESI-MS色谱图。图13为(-)-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.合欢皮新木脂体化合物的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将合欢皮粉碎，与浓度为70～80％的乙醇按照料液比为1:4～10的比例混合，70～90℃回流提取1～3次，每次1～3小时；(2)过滤除去合欢皮残渣，合并步骤(1)获得的提取液，冷冻干燥，收集粗提物，混悬后依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取；(3)回收正丁醇萃取液，干燥；(4)采用D101大孔吸附树脂，用不同体积分数的乙醇进行洗脱分离，分别富集各洗脱段；(5)对各洗脱段进行硅胶柱层析，采用不同体积分数的二氯甲烷-甲醇混合液梯度洗脱，经TLC检测合并相同组分，收集各洗脱段。/n

【技术特征摘要】
1.合欢皮新木脂体化合物的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将合欢皮粉碎，与浓度为70～80％的乙醇按照料液比为1:4～10的比例混合，70～90℃回流提取1～3次，每次1～3小时；(2)过滤除去合欢皮残渣，合并步骤(1)获得的提取液，冷冻干燥，收集粗提物，混悬后依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取；(3)回收正丁醇萃取液，干燥；(4)采用D101大孔吸附树脂，用不同体积分数的乙醇进行洗脱分离，分别富集各洗脱段；(5)对各洗脱段进行硅胶柱层析，采用不同体积分数的二氯甲烷-甲醇混合液梯度洗脱，经TLC检测合并相同组分，收集各洗脱段。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述合欢皮新木脂体化合物包括


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)采用体积分数为30％、50％、70％和95％的乙醇进行洗脱分离。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，富集30％乙醇洗脱段，采用硅胶柱层析，用40:1,20:1,16:1,10:1,8:1和6:1的二氯甲烷-甲醇混合液梯度洗脱，收集各洗脱段并分离合欢皮木脂体化合物。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，收集二氯甲烷-甲醇混合液10:1洗脱段，将10:1洗脱段过反向硅胶柱，最后以CH3OH为A相，水为B相，按照如下洗脱条件进行液相检测：C18色谱柱，流速1～1.2mL/min，柱温29.5～30.5，洗脱相按如下程序梯度洗脱：
时间A相B相
0min5％95％
60min100％0％。


6.根据权利要求5所述的方法，其特征在在于，对A相为42％CH3OH时的洗脱峰按照如下半制备分离条件进行洗脱分离：









时间/min
CH3OH体积百分数
H2O体积百分数


0
10％
90％


4
10％
90％


5
26％
74％


45
28％
72％


60
32％
68％


70
50％
50％


80
100％
0％






收集保留时间为26.50min处的化合物，即得


7.根据权利要求4所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽颖，史学林，艾敏，蔡维维，李忠杰，刘艺筱，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32