沙利度胺及其衍生物在制备治疗Sall4阳性胃癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种沙利度胺及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用。本发明专利技术证明了沙利度胺及其衍生物对SALL4阳性胃癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，为该病的治疗提供了新的思路。

Application of thalidomide and its derivatives in the preparation of Sall4 positive gastric cancer drugs

【技术实现步骤摘要】
沙利度胺及其衍生物在制备治疗Sall4阳性胃癌药物中的应用
本专利技术属于胃癌治疗领域，特别涉及一种沙利度胺及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用。
技术介绍
沙利度胺(thalidomide)及其衍生物来那度胺(Lenalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)，属于免疫调剂药物(IMiDs,immunomodulatorydrug)，除具有调节机体免疫的作用外，还能抑制的血管生成，临床上用于多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合症的治疗。此外，沙利度胺及其衍生物对炎症性肠病、系统性红斑狼疮和多种皮肤病也具有治疗作用。上世纪五六十年代，西方多个国家爆发了“反应停事件”，孕妇服用反应停即沙利度胺后，导致胎儿死亡或出现严重的发育缺陷，其典型表现为肢体短小，手掌或脚掌直接与躯干相连，类似于海豹的四肢，故称之为海豹肢症。近六十年来，人们始终未能完全揭示沙利度胺导致胎儿出生缺陷的机制，直到新近Donovan等学者发现，沙利度胺及其衍生物可作为桥梁，招募并结合泛素化连接酶CUL4CRBN，同时又与胚胎干细胞相关蛋白SALL4(Sal-likegene4)结合，最终导致SALL4被泛素化而降解。而SALL4是维持胚胎干细胞自我更新能力和多向分化潜能的重要因子，在早期胚胎发育过程中具有重要作用。因此上述研究提示，沙利度胺通过促进SALL4降解而影响了胚胎的发育导致胎儿死亡或畸形。SALL4除了表达于胚胎发育期的组织以外，在某些肿瘤中也有表达。国内及国外的研究发现，约10％的胃腺癌病例可弥漫表达SALL4，定位于癌细胞的胞核。此类胃癌预后较差，临床上缺乏有效的治疗方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种沙利度胺及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用，证明了沙利度胺及其衍生物对SALL4阳性胃癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，为该病的治疗提供了新的思路。本专利技术提供了一种沙利度胺(thalidomide)及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用。所述衍生物为来那度胺(Lenalidomide)或泊马度胺(pomalidomide)等。所述药物以沙利度胺为主要成分，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制成制剂使用。所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。有益效果本专利技术证明了沙利度胺及其衍生物对SALL4阳性胃癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，为该病的治疗提供了新的思路。附图说明图1为免疫组织化学染色检测SALL4在人胃癌细胞系MKN45中的表达情况。图2为免疫组织化学染色检测SALL4在314例胃腺癌中的表达情况。图3为沙利度胺对胃癌细胞增殖的抑制作用的检测。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1免疫组织化学染色检测SALL4在人胃癌细胞系MKN45中的表达。实验材料和试剂：MKN45胃癌细胞系来自陆军军医大学第一附属医院病理学研究所。实验步骤：a.取24×24mm的盖玻片，清洗后再用清洁液浸泡24h，再依次使用自来水、蒸馏水和超纯水清洗和浸泡，而后烘干，高温高压消毒。b.取对数生长期的胃癌细胞，消化收集细胞，重悬后计数，取1×105个细胞接种至预先铺有盖玻片的6孔板内。c.细胞接种8h后，取出盖玻片，PBS漂洗1次，4％多聚甲醛固定5min。d.取出细胞爬片，PBS漂洗3次，0.3％的Triton作用2min。e.取出细胞爬片，PBS漂洗3次，而后滴加3％H2O2作用10min以灭活组织的内源性过氧化氢酶。f.细胞爬片，PBS漂洗3次，滴加小鼠抗人SALL4抗体，室温(约25℃)孵育90min。g.取出孵育一抗的细胞爬片，彻底去除一抗，PBS漂洗3次，随后滴加针对一抗种属的二抗(连接有显色酶HRP)，37℃条件下孵育25min。h.彻底去除二抗，PBS内漂洗3次，滴加显色底物DAB进行显色，当细胞着色深浅适中时立即去显色底物以终止显色，将切片放入自来水中浸泡清洗。i.取出细胞爬片，将其浸入苏木精溶液内染色5min，随后用自来水充分漂洗，再浸入盐酸酒精分化液内作用15s后取出，在45℃自来水中浸泡10min返蓝。j.取出返蓝后的细胞爬片在光学显微镜下观察，如细胞核复染效果满意，则将切片依次浸入梯度酒精(75％，85％，95％，100％)，酒精浓度由低及高，每个浓度3min；随后将切片浸入二甲苯溶液内透明2次，每次2min；取出组织切片，滴加中性树胶50ul，用盖玻片封片，注意避免气泡。实验结果：由图1可知，MKN45细胞表达SALL4，定位于细胞核。实施例2免疫组织化学染色检测SALL4在人胃腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系实验材料：SALL4鼠抗人单克隆抗体(克隆号6E3，产品编号ZM-0393)以及第二抗体(产品编号PV-6002)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。314例胃腺癌标本收集自中国人民解放军第904医院病理科2008年至2017年行胃癌存档蜡块，通过电话、门急诊及住院记录获得患者生存信息(是否存活以及术后生存时间)，平均随访时间为52个月。实验步骤：a.检测材料的准备：取石蜡包埋的组织蜡块进行切片，切片厚度3-5μm，将切片置于56℃烤片10min。b.组织切片的脱蜡及水化：将组织切片在二甲苯内浸泡2次，每次15min；而后用梯度酒精(100％，95％，85％，75％)浸洗，酒精浓度由高及低，每个浓度3min；再将组织切片在自来水中浸泡1min，转入PBS内浸泡5min。c.抗原修复(煮沸法)：选用pH9.0的EDTA抗原修复液，先将修复液煮沸，再将组织切片完全浸入修复液，在电磁炉上加热10min(加热功率1000W，维持煮沸状态)；而后降低电磁炉功率至400W，保温10min；修复结束后，自然冷却。d.灭活内源性的过氧化氢酶：取出修复后的组织切片，PBS浸泡3min，而后滴加3％H2O2作用10min以灭活组织的内源性过氧化氢酶。(但显色酶为HRP时使用该步骤，如显色酶为AP则该步骤可省略)。e.血清封闭：去除H2O2液，PBS浸洗2次，每次10min，而后滴加山羊封闭血清，作用10min。f.一抗孵育：去除封闭血清，在组织切片上滴加混合性一抗，要求完全覆盖切片上的组织，并距离组织边缘至少2mm以避免边缘效应；随后将切片置于4℃条件下过夜，或置于37℃条件下60min。g.二抗孵育：取出孵育一抗的组织切片，彻底去除一抗，在PBS内浸洗3次，每次10min；随后滴加针对一抗种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沙利度胺及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种沙利度胺及其衍生物在制备治疗SALL4阳性胃癌药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述衍生物为来那度胺或泊马度胺。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：周志华，王斌，刘琴，王倩，
申请(专利权)人：周志华，王斌，刘琴，
类型：发明
国别省市：江苏;32