The present application provides a method for the preparation of secretory elements of mesenchymal stem cells, including the pre culture of mesenchymal stem cells, the large-scale culture of mesenchymal stem cells, the preparation of the original solution of the secretory elements of mesenchymal stem cells and the preparation of the lyophilized powder of the secretory elements of mesenchymal stem cells. The preparation method of the secretory element of the sub totipotent mesenchymal stem cells of the present application is simple, convenient, fast and easy for large-scale continuous production. The method can realize the rapid proliferation of the mesenchymal stem cells without adding any biological factors, and can produce the secretory element of the mesenchymal stem cells efficiently and continuously only by changing the cell culture medium, greatly reducing the production cost The active components of the secretory hormone of the MSCs are high, which can significantly improve the proliferation of skin cells and bone cells.
【技术实现步骤摘要】
一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法
本专利技术涉及生物
,尤其涉及一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法。
技术介绍
间充质干细胞(MesenchymalStemCell,MSC)是具有很强的增殖能力和多向分化潜能的干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我更新和多向分化能力,是目前临床应用最多的干细胞。间充质干细胞与造血干细胞联合应用,可以提高移植的成功率,加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后,将间充质干细胞与造血干细胞一同输入.可明显加速患者血细胞恢复时间,且安全无不良反应。间充质干细胞不仅存在于骨髓中,也存在于骨骼肌、骨外膜和骨小梁中。由于它分化的组织类型十分广泛,因此临床应用价值不菲。目前,间充质干细胞是各大药企研究的重点。在美国FDA已批准了近60项临床试验,主要包括以下几个方面。1.造血干细胞移植:增强造血功能;促使造血干细胞移植物的植入;治疗移植物抗宿主病。2.组织损伤的修复:骨、软骨、关节损伤、心脏损伤;肝脏损伤;脊髓损伤和神经系统疾病。3.自身免疫性疾病:系统性红斑狼疮、硬皮病、炎性肠炎等。4.作为基因治疗的载体。其中移植物抗宿主病、克隆氏病的治疗在美国已经进入到三期临床阶段。国内已开始用间充质干细胞治疗临床上一些难治性疾病,如脊髓损伤、脑瘫、肌萎缩侧索硬化症、系统性红斑狼疮、系统性硬化症、克隆氏病、中风、糖尿病、糖尿病足、肝硬化等,根据初步的临床报告,间充质干细胞对这些疾病的治疗都取得明显的疗效。因此,间充质干细胞及其分泌素的生 ...
【技术保护点】
1.一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:/n1)间充质干细胞预培养/n将间充质干细胞接种在Eagle培养基中,培养,获得间充质干细胞悬液;/n2)间充质干细胞的大规模培养/n将步骤1)得到的间充质干细胞悬液接种到间充质干细胞培养基液中混合均匀,转入生物反应器内,静置2h,以60rpm/min速度搅拌,并在37℃,5%CO
【技术特征摘要】
1.一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
1)间充质干细胞预培养
将间充质干细胞接种在Eagle培养基中,培养,获得间充质干细胞悬液;
2)间充质干细胞的大规模培养
将步骤1)得到的间充质干细胞悬液接种到间充质干细胞培养基液中混合均匀,转入生物反应器内,静置2h,以60rpm/min速度搅拌,并在37℃,5%CO2,5%~20%O2的条件下培养7~14天,获得间充质干细胞基液;
3)间充质干细胞分泌素原液的制备
将步骤2)间充质干细胞基液过滤,获得间充质干细胞,使用磷酸盐缓冲液冲洗间充质干细胞3次,加入100mL无血清基础培养基继续培养24小时,然后收取培养基,得到间充质干细胞分泌素原液;
4)间充质干细胞分泌素冻干粉的制备
将步骤3)获得的间充质干细胞分泌素原液经70μm孔径细胞滤器过滤后得滤液,然后将滤液1500g速度离心10分钟,取上清液,上清液通过冷冻干燥制得冻干粉末,即获得间充质干细胞分泌素。
2.如权利要求1所述的一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法,其特征在于,所述间充质干细胞来源于骨髓、脂肪、皮肤、脐带血、脐带、胎盘中的一种或多种组合。
3.如权利要求2所述的一种亚全能间充质干细胞分泌素的制备方法,其特征在于,所述步骤1)采用的Eagle培养基为补充有10%胎牛血...
【专利技术属性】
技术研发人员:王彬,林思恩,李刚,
申请(专利权)人:深圳刚华健医疗有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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