The invention provides a solution to the problem of transfection of non adherent cells. Devices and delivery compositions containing ethanol and isotonic solutions are used to deliver compounds and compositions to nonadhesive cells.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过可逆性渗透对非粘附细胞的无载体细胞内递送相关申请的交叉引用根据35U.S.C.§119，本申请要求2016年12月22日提交的美国临时专利申请号62/438,298，2017年7月5日提交的美国临时专利申请号62/528,963和2017年7月25日提交的美国临时专利申请号62/536,831的优先权。这些申请的全部内容在此通过引用明确的并入本文。专利
本专利技术涉及将试剂递送到哺乳动物细胞中。专利技术背景不同细胞类型之间存在细胞转染效率的变化。已经证明使用常规方法转染悬浮细胞，例如非粘附细胞，是非常困难的。因此，需要有助于转染此类细胞的组合物和方法。
技术实现思路
本专利技术提供了将载荷物/货物化合物和组合物输送到非粘附细胞中的问题的解决方案。因此，一种传递载荷物通过非粘附细胞的质膜的方法包括以下步骤：提供非粘附细胞群并使细胞群接触一定体积的等渗水溶液，该水溶液包括载荷物和浓度大于5％(v/v)的醇。例如，所述醇包括乙醇，例如，大于10％的乙醇。在一些实施例中，水溶液包含20-3...
【技术保护点】
1.一种在非粘附细胞的质膜上递送载荷物的方法，包含：/n提供非粘附细胞群；和/n使细胞群与一定体积的等渗水溶液接触，该水溶液包括载荷物和浓度大于5％(v/v)的醇。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161222 US 62/438,298;20170705 US 62/528,963;20171.一种在非粘附细胞的质膜上递送载荷物的方法，包含：
提供非粘附细胞群；和
使细胞群与一定体积的等渗水溶液接触，该水溶液包括载荷物和浓度大于5％(v/v)的醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述醇包括乙醇。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述水溶液包含大于10％的乙醇。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述水溶液包含20-30％的乙醇。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶液包含27％的乙醇。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶液包含12.5-500mMKCl。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶液包含106mMKCl。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述非粘附细胞包括外周血单核细胞。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述非粘附细胞包含免疫细胞。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述非粘附细胞包含T淋巴细胞。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述免疫细胞用配体CD3、CD28或其组合激活。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述非粘附细胞群包含单层。
13.权利要求1所述的方法，其中所述单层与所述水溶液的喷雾接触。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法将所述载荷物递送到所述细胞的细胞质中，并且其中所述细胞群与通过电穿孔递送所述载荷物相比具有更高的百分比存活率。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述载荷物包括信使核糖核酸(mRNA)。
16.根据权利要求5所述的方法，其中所述mRNA编码基因编辑组合物。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述基因编辑组合物降低PD-1的表达。
18.根据权利要求13所述的方法，其中所述单层位于膜过滤器上。
19.根据权利要求13所述的方法，其中所述膜过滤器在与所述喷雾接触后振动。
20.根据权利要求15所述的方法，其中所述mRNA编码嵌合抗原受体。
21.一种系统，其包括：
壳体，其配置成接收包括孔的板；
差压施加器，其配置成向所述孔施加压差；
递送溶液施加器，其配置成递送雾化的递送溶液到所述孔；
终止溶液施加器，其配置成递送终止溶液到所述孔；和
培养基施加器，其配置成递送培养基到所述孔。
22.根据权利要求21所述的系统，进一步包括：
可处理孔组件，其配置成：
使所述压差施加器与所述孔相邻以施加所述差压到所述孔；
使所述递送溶液施加器与所述孔相邻以递送所述雾化的递送溶液到所述孔；
使所述终止溶液施加器与所述孔相邻以递送所述终止溶液到所述孔；和/或
使所述培养基施用器与所述孔相邻，以递送所述培养基到所述孔。
23.根据权利要求22所述的系统，其中所述可处理孔组件包括可移动基板，所述可移动基板配置为接收包括所述孔的板并且使所述板在至少一个维度上移动。
24.根据权利要求22所述的系统，其中所述可处理孔组件包括安装组件，所述安装组件配置为连接到所述递送溶液施加器、所述终止溶液施加器和所述培养基施加器。
25.根据权利要求21所述的系统，其中所述递送溶液施加器包括喷雾器。
26.根据权利要求21所述的系统，其中所述递送溶液施加器配置成每次致动输送10-300微升的递送溶液。
27.根据权利要求21所述的系统，进一步包含温度控制系统，所述温度控制系统被配置为控制所述递送溶液和/或包括所述孔的所述板的温度。
28.根据权利要求21所述的系统，进一步包含外壳，所述外壳被配置为控制包括所述孔的所述板的环境。
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【专利技术属性】
技术研发人员：M·马奎尔，S·奥戴，
申请(专利权)人：阿维塔斯有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE
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