The invention discloses an organic solvent tolerant lipase mutant and its application, belonging to the field of gene engineering and enzyme engineering technology. Based on the analysis of enzyme protein structure, the invention designs and constructs an enzyme mutation library, selects and obtains lipase mutants with enhanced tolerance to organic solvents, and constructs a Pichia pastoris engineering strain with high-efficiency expression of the mutant. The organic solvent tolerance Compared with the wild-type, the enhanced lipase mutant can significantly enhance its ability to withstand organic solvents. After being treated with 50% ethanol for 2 hours, its residual activity is still 75%, which is about 3 times of that of the wild-type. The lipase mutant can be applied in the preparation and processing of biodiesel and flavor esters, with good stability, long life and life saving in the application process Production cost and improve production efficiency.
【技术实现步骤摘要】
一种有机溶剂耐受的脂肪酶突变体及其应用
本专利技术涉及基因工程及酶工程领域，特别是涉及一种有机溶剂耐受的脂肪酶突变体及其应用。
技术介绍
脂肪酶，即三酰基甘油酰基水解酶，它催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。脂肪酶基本组成单位仅为氨基酸，通常只有一条多肽链。它的催化活性仅仅决定于它的蛋白质结构(Schmid等,1998)。脂肪酶具有广泛的应用价值，已成为市场上的第三大工业用酶。脂肪酶可以催化解脂、酯交换、酯合成等反应，广泛应用于饲料添加剂、油脂加工、食品、医药、日化等工业。脂肪酶在水环境中能够催化酯键的水解，当处于有机溶剂环境中能催化酯交换，酯化，醇解，酸解等反应。而脂肪酶作用的底物往往是水不溶性的，在有机相中才有较好的溶解度，但是在有机溶剂中，大多数酶类活力受到抑制甚至失活，所以其在生物催化中的应用受到很大限制。在有机介质中维持较高的脂肪酶活性及脂肪酶催化底物的广泛性是实际生物催化过程中的难题。因此开发耐有机溶剂脂肪酶在理论和工业应用上具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技...
【技术保护点】
1.一种有机溶剂耐受的脂肪酶突变体，其特征在于，所述有机溶剂耐受的脂肪酶突变体是氨基酸序列为SEQ ID NO.1的脂肪酶的第191位氨基酸由Arg变为Ala。/n
【技术特征摘要】
1.一种有机溶剂耐受的脂肪酶突变体，其特征在于，所述有机溶剂耐受的脂肪酶突变体是氨基酸序列为SEQIDNO.1的脂肪酶的第191位氨基酸由Arg变为Ala。
2.根据权利要求1所述的有机溶剂耐受的脂肪酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列为SEQIDNO.2。
3.根据权利要求1所述的有机溶剂耐受的脂肪酶突变体，其特征在于，其编码基因的核酸序列为SEQIDNO.3。
4.一种重组质粒，其特征在于，其用于在宿主细胞内表达权利要求1所述的有机溶剂耐受的脂肪酶突...
【专利技术属性】
技术研发人员：王永华，蓝东明，赵泽鑫，杨博，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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