一种 （4→2）重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种（4→2）重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用，本发明专利技术的（4→2）重排克罗烷型二萜类化合物是一种天然化合物，实验发现其具有较好的抗炎活性。

A (4 \u2192 2) rearranged kronane diterpenoid compound and its preparation and Application

The invention discloses a (4 \u2192 2) rearranged cro alkane diterpenoid compound and a preparation method and application thereof. The (4 \u2192 2) rearranged cro alkane diterpenoid compound of the invention is a natural compound, which has good anti-inflammatory activity.

【技术实现步骤摘要】
一种(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种天然的植物提取物，具体涉及一种(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
海南暗罗(PolyalthialauiMerr.)为番荔枝科(Annonaceae)暗罗属(Polyalthia)植物，常为直立灌木。据中国植物志记载，该属植物全世界约有200种，分布于马来西亚、菲律宾、印度、斯里兰卡等亚热带地区，我国分布于云南、广东、广西南部及海南。我国有17种，海南有7种，分别为：细基丸(P.cerasoides)，沙煲暗罗(P.consanguinea)，海南暗罗(P.laui)，陵水暗罗(P.nemoralis)，斜脉暗罗(P.plagioneura)，香花暗罗(P.rumphii)和暗罗(P.suberosa)。其中，海南暗罗和沙煲暗罗为海南特有种。海南暗罗作为海南黎族地区的惯用药材，一直以来对治疗痛经、梅核气、气滞腹痛等疾病有较好的疗效。克罗烷型二萜为暗罗属植物的代表性成分，自1988年首次被报道以来，至今已报道有300余个。研究表明，该类化合物具有抗肿瘤活性。《海南暗罗根中一个新的克罗烷型二萜》(李小宝等，有机化学，2013，33，1333～1336)对海南暗罗根的化学成分进行了系统研究，从中分离得到8个二萜类化合物，polyalimideA(1),kolavenicacid(2),2-oxo-kolavenicacid(3),2-oxo-14,15-bisnor-3,11E-kolavadien-13-one(4),3,4-dihydroxyclerodan-13E-en-15-oicacid(5),longimideB(6),16-oxocleroda-3,13E-dien-15-oicacid(7),solidagonalacidmethylester(8)。其中化合物1为新化合物，化合物5首次从番荔枝科分离得到，所有化合物首次从该植物中分离得到。化合物2和3对人肿瘤细胞SPCA-1，SGC-7901和K-562显示微弱的细胞毒性。《海南暗罗根克罗烷型二萜化学成分研究》(李小宝等，有机化学，2017，37(10)：2763-2766)分离得到5个克罗烷型二萜类化合物，根据它们的NMR和HRMS数据，鉴定它们的结构分别为：(4→2)重排-2，13-二甲酰基-克罗烷-2，12E-二双键-15-甲酯(1)、克罗烷-3，12E-二双键-15，16-二甲酸(2)、14，15-降二碳克罗烷-3-双键-2，13-二酮(3)、克罗烷-3，13Z-二双键-15，16-内酯(4)、16-羟基克罗烷-3，13Z-二双键-15，16-内酯(5)。其中化合物1～2为新化合物，化合物1～5的体外细胞毒活性筛选结果表明，它们对4种肿瘤细胞株(Hela、A549、MCF-7和HL-60)均显示出了一定的体外生长抑制活性，其IC50值范围为13.22～37.16μmol/L。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种具有抗炎效果的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。实现本专利技术目的的技术方案是一种由下述式(Ⅰ)表示的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物：一种如上所述的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：①将干燥的海南暗罗组织粉碎后用乙醇浸泡提取，合并各次提取液，减压浓缩得粗提物。②将步骤①得到的粗提物用水稀释制成悬浮液，用石油醚萃取，合并有机相，减压浓缩得石油醚部位浸膏。③将步骤②得到的石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,按照10∶1～1∶10(V/V)进行梯度洗脱，合并相同流分，得到Fr.1～Fr.8；对上述Fr.4组分进行硅胶柱层析分离，用二氯甲烷和丙酮溶剂进行梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成6个组分Fr.1-Fr.6。④将步骤③中二氯甲烷和丙酮洗脱得到的Fr.2先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝10:1～1:1的混合溶剂，洗脱2～5个柱体积，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH溶剂，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC分离，得到目标提取物(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物。步骤①中，乙醇溶液的体积分数为75％～95％；每次浸泡提取时将乙醇溶液加热至50～60℃。步骤③中，用二氯甲烷和丙酮溶剂进行梯度洗脱时，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100。步骤④中，采用高效液相色谱HPLC分离时，色谱柱为WatersC18，9.4×250mm，4.6μm，流速为2mL/min，流动相为MeCN:H2O＝25:75。式(Ⅰ)化合物在制备抗炎药物中的应用。所述的炎症包括系统性炎症反应、支气管炎、胃炎、肠炎、肺炎、肝炎。本专利技术具有积极的效果：本专利技术从海南暗罗中提取获得了一种(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物，在该化合物的右边B环6位上连有羟基，这在克罗烷型二萜类化合物中是非常稀少的。试验证明，该(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物对LPS诱导RAW264.7细胞释放TNF-α炎症因子具有显著抑制作用，IC50值仅为7.70μg·mL-1。附图说明图1为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的核磁共振氢谱图。图2为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的核磁共振碳谱图。图3为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的核磁共振无畸变极化转移增强谱(DEPT)。图4为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的氢氢相关谱(H-H-COSY谱)。图5为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的HSQC谱。图6为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的HMBC谱。图7为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的NOESY谱。图8为本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的高分辨电喷雾电离质谱(HR-ES-IMS)图。具体实施方式(实施例1)本专利技术的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的分子式为C20H32O5，分子量为353.2322，外观为无色油状物，易溶于甲醇和氯仿；其结构式如下式(Ⅰ)：上述式(Ⅰ)所示的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的制备方法包括以下步骤：①将10.0kg干燥的海南暗罗根粉碎，用体积分数为75％以上(75％～95％)的乙醇溶液浸泡提取2～4(本实施例中为4)次，每次提取1～3h(本实施例中为2h)，每次提取时乙醇溶液用量25.0L，每次提取时将乙醇溶液加热至50～60℃。合并各次提取液，减压浓缩得粗提物(约1800g)。②将步骤①得到的粗提物用6.0L水稀释制成悬浮液，用石油醚(5×7.2L)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种由下述式(Ⅰ)表示的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物：/n

【技术特征摘要】
1.一种由下述式(Ⅰ)表示的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物：





2.一种如权利要求1所述的(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
①将干燥的海南暗罗根粉碎后用乙醇浸泡提取，合并各次提取液，减压浓缩得粗提物；
②将步骤①得到的粗提物用水稀释制成悬浮液，用石油醚萃取，合并有机相，减压浓缩得石油醚部位浸膏；
③将步骤②得到的石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,按照10∶1～1∶10(V/V)进行梯度洗脱，合并相同流分，得到Fr.1～Fr.8；
对上述Fr.4组分进行硅胶柱层析分离，用二氯甲烷和丙酮溶剂进行梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成6个组分Fr.1～Fr.6；
④将步骤③中二氯甲烷和丙酮洗脱得到的Fr.2先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10:1～1:1的混合溶剂，洗脱2～5个柱体积，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH溶剂，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC分离，得到目标提取物(4→2)重排克罗...

【专利技术属性】
技术研发人员：余章昕，宋小平，陈光英，李小宝，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南;46