一种外周循环血lncRNA用于诊断早期原发性肝癌、制备原发性肝癌筛查试剂盒的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种外周循环血lncRNA用于诊断早期原发性肝癌、制备原发性肝癌筛查试剂盒的用途。本发明专利技术发现，血清lncRNA NONHSAT122730检测对早期原发性肝癌具有较高的诊断准确度。因此，血清lncRNA NONHSAT122730可以作为标志物用于诊断早期原发性肝癌，可以用于制备早期原发性肝癌筛查试剂盒，提高血清诊断早期原发性肝癌的准确度。

The use of lncrna in peripheral blood for the diagnosis of early primary liver cancer and the preparation of screening kit for primary liver cancer

【技术实现步骤摘要】
一种外周循环血lncRNA用于诊断早期原发性肝癌、制备原发性肝癌筛查试剂盒的用途
本专利技术属于肿瘤基因诊断领域，具体涉及一种外周循环血lncRNA用于诊断早期原发性肝癌、制备原发性肝癌筛查试剂盒的用途。
技术介绍
原发性肝癌(primaryhepaticcarcinoma,PHC)是起源于肝细胞或胆管上皮细胞的消化系统恶性肿瘤，其起病隐匿，进展快，预后差。早期诊断对降低肝癌的病死率具有重要意义。血清肿瘤标志物检测是诊断早期肝癌的重要手段，不仅可提高诊断效率，还可为疗效及预后的评估提供参考，与影像学检查及肝穿刺活检比较，具有经济、高效及易于操作等优点。甲胎蛋白(AFP)是较早发现并用于早期肝癌诊断的常用肿瘤标志物，但是AFP在肝硬化人群中也明显升高，故用于诊断原发性肝癌的诊断价值不高，漏诊率和误诊率高。因此，迫切需要寻找诊断准确度更高的肿瘤标志物用于早期原发性肝癌的诊断。lncRNANONHSAT122730的表达水平变化与甲状腺乳头状癌(PTC)相关，在PTC的诊断和治疗方面具有潜在的靶点作用(甲状腺乳头状癌长链非编码RNA表达谱与临床特征及BRAF突变相关性研究，王强凤，浙江大学博士毕业论文，2016)。目前，尚未见lncRNANONHSAT122730表达水平与其它肿瘤存在相关性的报道，未见其可以用于诊断早期原发性肝癌的报道。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术的不足，提供一种外周循环血lncRNA用于诊断早期原发性肝癌、制备原发性肝癌筛查试剂盒的用途。实现本专利技术目的的技术方案为：一种血清lncRNANONHSAT122730作为标志物用于诊断早期原发性肝癌的用途。一种血清lncRNANONHSAT122730用于制备早期原发性肝癌筛查试剂盒的用途。一种早期原发性肝癌筛查试剂盒，含有用于检测血清lncRNANONHSAT122730表达水平的试剂。优选地，所述试剂为用于检测血清lncRNANONHSAT122730表达水平的qRT-PCR试剂。有益技术效果：本专利技术发现，血清lncRNANONHSAT122730检测对早期原发性肝癌具有较高的诊断准确度。因此，血清lncRNANONHSAT122730可以作为标志物用于诊断早期原发性肝癌，可以用于制备早期原发性肝癌筛查试剂盒，提高血清诊断早期原发性肝癌的准确度。附图说明图1为血清lncRNANONHSAT122730诊断区分早期PHC和非PHC的ROC曲线。具体实施方式下面通过具体实施例阐述本专利技术的实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。一、资料与方法1、一般资料选取2018年5月至2019年5月期间上海某三甲医院收治的60例早期原发性肝癌患者(PHC组)，符合《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》中原发性肝癌的诊断标准，临床分期为Ⅰa～Ⅰb期，为首次确诊，未经手术、化疗或药物治疗，其中男32例，女28例，年龄42-71岁，平均年龄(55.6±5.7)岁。选取同期该院收治的60例肝硬化患者(LC组)，符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》中乙型肝炎肝硬化的诊断标准，为首次确诊，未经手术或药物治疗，其中男31例，女29例，年龄38-66岁，平均年龄(52.5±4.8)岁。排除标准：合并妊娠；合并肝脏占位性病变或其他恶性肿瘤。同时，选取同期该院60例健康体检者(健康组)，其中男30例，女30例，年龄37-68岁，平均年龄(53.7±5.2)岁。三组受试者的性别和年龄差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。所有受试者均签署知情同意书。随机选取30例PHC患者、30例LC患者和30例健康人组成测试集样本，剩余30例PHC患者、30例LC患者和30例健康人组成验证集样本。2、指标检测方法采集所有患者或健康人5mL清晨空腹静脉血，离心分离血清，于-80℃冻存，备用。血清lncRNANONHSAT122730检测方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测受试者的血清lncRNANONHSAT122730的表达水平，按照试剂盒说明书操作。应用RNA提取试剂盒(购自Sigma)提取血清总RNA，采用反转录试剂盒(购自Takara)将纯化的RNA逆转录合成cDNA，以cDNA作为模板进行qRT-PCR。采用ABI7500FastRealTimePCR系统，分别扩增lncRNANONHSAT122730和内参GAPDH，引物由广州锐博合成。PCR反应条件：95℃10min；(95℃15s、60℃30s、72℃30s)×40个循环。每个反应设3个重复。应用2-ΔΔCt法计算lncRNANONHSAT122730的相对表达水平。lncRNANONHSAT122730上游引物序列：5′-GTACGACATGGGCAGAGGTAACAGG-3′lncRNANONHSAT122730下游引物序列：5′-TATAAGAGCCAGGCGAAGGTGTTGC-3′内参GAPDH上游引物序列：5′-ACAGGGGAGGTGATAGCATT-3′内参GAPDH下游引物序列：5′-GACCAAAAGCCTTCATACATCTC-3′3、统计学方法采用SPSS17.0软件处理，数据以均值±标准偏差表示，组间比较采用t检验或方差分析。应用受试者工作特征(receiveroperatorcharacteristic，ROC)曲线及曲线下面积(areaunderthecurve，AUC)评估各指标对早期原发性肝癌的诊断价值，取Youden指数最大时的数值作为最佳临界值(cut-off值)。P<0.05代表有统计学差异。二、结果1、三组研究对象血清lncRNANONHSAT122730水平比较测试集样本中，将PHC患者、LC患者和健康人的血清lncRNANONHSAT122730水平分别录入SPSS17.0软件，计算均值和标准偏差，PHC患者的血清lncRNANONHSAT122730水平显著高于LC患者和健康人，差异具有统计学意义(P<0.05)；LC患者和健康人的血清lncRNANONHSAT122730水平无显著性差异。结果见表1。表1三组研究对象血清lncRNANONHSAT122730水平的比较组别样本数lncRNANONHSAT122730PHC组301.58±0.49LC组300.83±0.35健康组300.79±0.38因为LC组和健康组血清lncRNANONHSAT122730水平无显著性差异，所以将LC组和健康组合并为非PHC组进行后续研究。2、血清lncRNANONHSAT122730检测对早期原发性肝癌的诊断效能测试集样本中，将PHC组和非PHC组样本的血清lncRNANONHSAT122730水平分别录入SPSS17.0软件，使用ROC曲线分析功能，得到血清lncRNANONHSAT122730诊断区分PHC和非PHC的ROC曲线和数据，血清lncRNANONHSAT122730诊断早期原发性肝癌的诊断效能较高，AUC值高达0.947，灵敏度为91.52％，特异度为90.05％，最佳临界值(cut-off值)为1.126，如表2、图1所示。表2血清lncRNANONHSAT122730检测对原发性肝癌的诊断效能验证集样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血清lncRNANONHSAT122730作为标志物用于诊断早期原发性肝癌的用途。

【技术特征摘要】
1.一种血清lncRNANONHSAT122730作为标志物用于诊断早期原发性肝癌的用途。2.一种血清lncRNANONHSAT122730用于制备早期原发性肝癌筛查试剂盒的用途。3.一种早期原发性肝癌筛查试剂盒，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡凤梅，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：上海容音医疗科技咨询中心，
类型：发明
国别省市：上海,31