【技术实现步骤摘要】
一种基于集成式纳米通道电极分离检测沙门氏菌的方法
本专利技术属于基于纳米通道的电化学分析检测
，具体涉及一种基于集成式纳米通道电极分离检测沙门氏菌的方法。
技术介绍
食源性致病菌是引发食源性疾病的主要原因，在食品生产、加工、储存、运输和销售的每个过程中都有可能造成污染，导致食源性疾病的发生，对公共卫生和人类健康造成重大威胁。其中，沙门氏菌作为一种常见的食源性致病菌，严重影响食品安全和生命健康。因此，有必要建立一种快速灵敏的沙门氏菌检测方法。固态纳米通道是以生物纳米通道为基础发展起来的，由于其结构稳定、形状可控和便于修饰等优点，目前已经在分子过滤、能量转换、生物传感等领域广泛应用。电化学方法操作简便，灵敏度高，可以反映电极表面的性质，综合电化学和纳米通道的优点，有助于实现多功能、高灵敏的分析检测。磁性纳米粒子(MNPs)凭借其强磁性、高表面积、丰富的表面性质，在体外和体内的诸多领域得到了广泛应用，包括分离，纯化，生物传感，定向载药释药和疾病诊断等。通常情况下，需要对MNPs进行表面修饰，如适配体、抗体和多肽，从而分离和浓缩目标物，减少不必要的干扰，提高灵敏度。...
【技术保护点】
1.一种基于集成式纳米通道电极分离检测沙门氏菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)集成式纳米通道电极的制备和预处理(1.1)制备集成式纳米通道电极阳极氧化铝(AAO)纳米通道两端处喷涂金层，金层的一部分暴露作为电极，金层的另一部分作为导电部分，导电部分用绝缘物密封包裹并绝缘，两端金层的导电部分均用导线引出连接到外部的电源，从而形成集成式纳米通道电极(INCE)；(1.2)集成式纳米通道电极的清洗和预处理在集成式纳米通道电极(INCE)两端的金层处分别滴加10μL 0.5M H2SO4溶液，静置清洗15分钟，然后用H2O彻底冲洗；然后在冲洗干净的集成式纳米通道电极(INCE)的两端处分别
【技术特征摘要】
1.一种基于集成式纳米通道电极分离检测沙门氏菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)集成式纳米通道电极的制备和预处理(1.1)制备集成式纳米通道电极阳极氧化铝(AAO)纳米通道两端处喷涂金层，金层的一部分暴露作为电极，金层的另一部分作为导电部分，导电部分用绝缘物密封包裹并绝缘，两端金层的导电部分均用导线引出连接到外部的电源，从而形成集成式纳米通道电极(INCE)；(1.2)集成式纳米通道电极的清洗和预处理在集成式纳米通道电极(INCE)两端的金层处分别滴加10μL0.5MH2SO4溶液，静置清洗15分钟，然后用H2O彻底冲洗；然后在冲洗干净的集成式纳米通道电极(INCE)的两端处分别再滴加10μL1mg/mL牛血清白蛋白(BSA)溶液，常温下封闭1小时，然后用H2O彻底冲洗；(2)磁性纳米粒子-抗体复合物制备将羧基磁性纳米粒子用含吐温-20的2-(N-吗啉)乙磺酸磷酸盐缓冲液(MEST)清洗并离心3次，重悬在10mMN-羟基琥珀酰亚胺磺酸(NHSS)和15mM1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳酰二亚胺盐(EDC)的溶液中，含吐温-20的硼酸盐缓冲液(BST)清洗并离心3次，重悬在17μg/mL沙门氏菌抗体的含吐温-20的硼酸盐缓冲液(BST)溶液中反应2.5小时，加入10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)溶液封闭1小时，用含吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBST)清洗三次并重悬，制备获得磁性纳米粒子-抗体复合物(MNPs-Ab)于4℃保存备用；(3)细菌培养和平板计数(3.1)培养沙门氏菌取0.5mL沙门氏菌储备液于9mL脑心浸液培养基(BHI)中，放于37℃的摇床内培养过夜作为初始菌液，将初始菌液在沸水中灭活10分钟以彻底灭菌，PBS清洗三次并重新分散于PBS中，用无菌PBS溶液10倍稀释得到一系列稀释液，获得菌液，以供进一步使用；(3.2)沙门氏菌平板计数取103CFU/mL含量的步骤(3.1)获得的菌液100μL铺盘于XLT4琼脂培养基中，37℃培养24小时后，对形成的菌落进行计数；(4)电化学方法检测细菌(4.1)将100μL的磁性纳米粒子-抗体复合物(MNPs-Ab)与1mL的步骤(3.1)获得的菌液混合，在常温下孵育45分钟；进行磁分离处理，然后用200μL的含吐温-20的磷酸盐缓冲液(...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅迎春，朱文越，李延斌，应义斌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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