一种凝血复合质控品及其制备方法技术

本申请提供一种凝血复合质控品的制备方法，包括以下步骤；吸附：向动物血浆中加入吸附剂，得到第一混合血浆；吸附完成后，对所述第一混合血浆进行分离，得到第一血浆和吸附有凝血因子的第一吸附剂，使所述第一血浆的ATPP值和PT值均大于100s；解吸附：将所述第一吸附剂与所述动物血浆混合，得到第二混合血浆；解吸附完成后，对所述第二混合血浆进行分离，得到第三血浆和第二吸附剂，使所述第三血浆的ATPP和PT值均在正常人凝血指标内；冷冻干燥：将所述第三血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第二质控品。该方法通过吸附剂吸附与解吸附的方式调整动物血浆中凝血因子的浓度，进而得到ATPP和PT值均在正常人凝血指标内的、稳定性良好的凝血复合质控品。

【技术实现步骤摘要】
一种凝血复合质控品及其制备方法
本专利技术涉及临床凝血检验项目质量控制
，特别涉及一种凝血复合质控品及其制备方法。
技术介绍
血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程，凝血因子按照一定顺序激活，最终使血浆中的可溶性纤维蛋白原转化为不可溶的交联纤维蛋白，简称凝血。通常根据凝血酶原激活物的形成始动途径与因子的不同，可将凝血过程分为内源性凝血和外源性凝血两条途径。凝血检测主要包括止血和血栓检测，据《中国心血管病报告2015》可知，我国目前心脑血管疾病患病人数约2.9亿，居各种死因的首位。而血栓形成是导致心脑及外周血管事件的最后关键环节，是致死或致残的直接原因，可以说没有血栓就没有心血管疾病。血栓栓塞性疾病几乎涵盖所有的临床科室。临床上目前对凝血的常规检验主要有活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)等。而其中APTT和PT通常用于评估内源性和外源性凝血因子的缺陷，并作为术前止血功能的检查，在凝血检验中尤为重要。基于凝血检测在临床上的重要性，使用稳定可靠的凝血质控品对凝血检测系统进行室内质量控制，确保检测结果的可靠性非常重要。目前，市面上的凝血质控品主要来源于人体血浆，生物风险比较大，且通常采用冷沉淀方法去除凝血因子，将去除凝血因子后的血浆与正常血浆混合从而得到凝血因子浓度不同的血浆。但是，此方法存在不能使APTT/PT凝固时间缩短的局限性，加上人体凝血因子相对不稳定，此方法对采血后的样本处理、保存及后续处理过程要求非常严格，很难满足大量生产的要求。因此，如何提供一种动物血浆凝血复合质控品，以替代人血浆的使用，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种凝血复合质控品及其制备方法，该方法通过吸附剂吸附与解吸附的方式调整动物血浆中凝血因子的浓度，进而得到凝固时间不同的、稳定性良好的凝血复合质控品。本专利技术所述的一种凝血复合质控品的制备方法，包括以下步骤：吸附：向动物血浆中加入吸附剂，得到第一混合血浆；吸附完成后，对所述第一混合血浆进行分离，得到第一血浆和吸附有凝血因子的第一吸附剂，使所述第一血浆的ATPP值和PT值均大于100s；解吸附：将所述第一吸附剂与所述动物血浆混合，得到第二混合血浆；解吸附完成后，对所述第二混合血浆进行分离，得到第三血浆和第二吸附剂，使所述第三血浆的ATPP和PT值均在正常人凝血指标内；冷冻干燥：将所述第三血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第二质控品。优选的，还包括将所述第一血浆与所述动物血浆混合，得到第二血浆的过程；然后，将所述第二血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第一质控品。通过将所述第一血浆与所述动物血浆混合，可以在回收利用反应副产物的同时，得到ATPP和PT值在病理水平范围内的病理水平质控品。优选的，所述吸附条件为，将所述第一混合血浆在2-8℃下震荡20-60min。实际的吸附时间及温度应依据待调节的动物血浆的APTT和PT值进行确定。通过在吸附过程中对第一混合血浆的APTT和PT值进行实时监控，可以使分离得到的第一血浆的APTT和PT值均达到目标值。优选的，所述解吸附条件为，将所述第二混合血浆在25-37℃下震荡5-10min。其中，优选在37℃条件下震荡5min。操作过程中，可以通过提高温度或延长时间来增加第一吸附剂的解吸附量，通过在解吸附过程中对第二混合血浆的APTT和PT值进行实时监控，可以使分离得到的第三血浆的APTT和PT值达到目标值。优选的，所述第一血浆与动物血浆的混合比例为1:1-1:10。由于不同的混合比例得到的第二血浆的APTT和PT值不同，所以实际操作过程中，混合比例会根据临床使用需求进行调整。同理，由于不同动物血浆的APTT和PT值不同，所以在制备正常水平质控血浆(第三血浆)时，第一吸附剂的加入量应依据待调节的动物血浆的APTT和PT值进行调整。优选的，所述解吸附过程中，第一吸附剂的浓度为0.5-10g/L，优选1.0-5.0g/L。优选的，所述动物血浆为牛血浆、猪血浆、兔血浆、马血浆、羊血浆、狗血浆中的一种或两种以上的混合物。优选的，本专利技术中动物血浆的制备方法为，用静脉穿刺法或动脉穿刺法采集动物血液，按血液与抗凝剂体积比为9:1的比例加入0.09mmol/L的柠檬酸钠抗凝剂，混匀后离心10-15min，相对离心力为2000-3000g，取上层血浆。本专利技术选用动物血浆，尤其是非灵长类动物血浆制备复合质控品。与人来源血浆相比，动物血浆的凝血因子更加稳定，可消除感染AIDS或肝炎病毒的风险。研究表明，不同的动物血浆具有不同浓度水平的凝血因子，其APTT、PT也具有不同的凝固时间。与人来源血浆的APTT和PT时间相比，兔血浆的PT值缩短；猪血浆的APTT值缩短，但PT值不缩短；牛血浆的PT和ATPP值均延长；马血浆的ATPP值延长，但PT值不缩短。为了制备出ATPP值和PT值同时满足靶值要求的凝血复合质控品，往往需要对动物血浆中的ATPP值和PT值进行相应的调整。虽然目前有相关专利报道了通过将不同的动物血浆按照一定的比例混合，可以制备出ATPP值和PT值同时满足使用需求的凝血复合质控品。但是，通过实验发现，虽然在某些情况下可以通过简单混合得到单项值满足需求的质控品，然而，通过这种方式难以获得APTT和PT值同时满足要求的复合质控品。为了解决这个问题，本专利技术采用吸附剂吸附与解吸附的方法调整动物血浆中凝血因子的浓度，从而得到APTT和PT值均在正常人凝血指标内的、稳定性良好的凝血复合质控品。首先，本专利技术将吸附剂与动物血浆混合，得到第一混合血浆，待吸附过程完成后，对第一混合血浆进行分离，得到第一血浆和吸附有凝血因子的第一吸附剂，通过调整吸附剂的含量及吸附时间来控制第一混合血浆中的APTT和PT值，进而控制第一血浆中的APTT和PT值，使第一血浆的APTT和PT值均大于100s。上述步骤完成后，本专利技术将第一吸附剂与动物血浆混合，得到第二混合血浆，使第一吸附剂在动物血浆中发生解吸附后，再对第二混合血浆进行分离，得到第二吸附剂和凝血因子含量相对较多的的第三血浆。通过调整第一吸附剂的含量及解吸附时间可以控制第二混合血浆中的APTT和PT值，进而控制第三血浆的APTT和PT值，使第三血浆的APTT和PT值均在正常人凝血指标内。最后，将第三血浆与基础液按一定比例混合后冷冻干燥，即可得到APTT和PT值均在正常人凝血指标内的、稳定性良好的凝血复合质控品。本文所述的正常人凝血指标为APTT值在22.7s-31.8s之间，PT值在10.0-14.0s之间。需要说明的是，为了保证凝血检测的准确度，往往需要确保质控品中的纤维蛋白原浓度在正常的区间范围内，过低的纤维蛋白原浓度可能由于反应信号过低导致凝血仪检测出现较大偏差。因此，在选用血浆时应该保证纤维蛋白原浓度在正常范围内(2.0-4.0g/L)，否则需添加部分纤维蛋白原。优选的，所述吸附剂为琼脂糖凝胶、中性氧化铝、碱性氧化铝、硅胶中的一种或几种。优选的，所述吸附剂的浓度为0.5-10g/L。优选的，所述吸附剂的浓度为1.0-5.0g/L。优选的，所述基础液包括糖类、抑肽酶、防腐剂中的一种或几种，以及缓冲液。基础液中各添加物的选择依据如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；吸附：向动物血浆中加入吸附剂，得到第一混合血浆；吸附完成后，对所述第一混合血浆进行分离，得到第一血浆和吸附有凝血因子的第一吸附剂，使所述第一血浆的ATPP值和PT值均大于100s；解吸附：将所述第一吸附剂与所述动物血浆混合，得到第二混合血浆；解吸附完成后，对所述第二混合血浆进行分离，得到第三血浆和第二吸附剂，使所述第三血浆的ATPP和PT值均在正常人凝血指标内；冷冻干燥：将所述第三血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第二质控品。

【技术特征摘要】
1.一种凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；吸附：向动物血浆中加入吸附剂，得到第一混合血浆；吸附完成后，对所述第一混合血浆进行分离，得到第一血浆和吸附有凝血因子的第一吸附剂，使所述第一血浆的ATPP值和PT值均大于100s；解吸附：将所述第一吸附剂与所述动物血浆混合，得到第二混合血浆；解吸附完成后，对所述第二混合血浆进行分离，得到第三血浆和第二吸附剂，使所述第三血浆的ATPP和PT值均在正常人凝血指标内；冷冻干燥：将所述第三血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第二质控品。2.根据权利要求1所述的凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，还包括将所述第一血浆与所述动物血浆混合，得到第二血浆的过程；然后，将所述第二血浆与基础液混合，冷冻干燥，得到第一质控品。3.根据权利要求1所述的凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，所述吸附条件为，将所述第一混合血浆在2-8℃下震荡20-60min。4.根据权利要求1所述的凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，所述解吸附条件为，将所述第二混合血浆在25-37℃下震荡5-10min。5.根据权利要求1所述的凝血复合质控品的制备方法，其特征在于，所述动物血浆为牛血浆、猪血...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗祥，宋耀平，
申请(专利权)人：三诺生物传感股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43