用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统技术方案

本发明专利技术公开了一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白‑1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，包括试剂盒、检测设备；试剂盒运用双抗体夹心法免疫层析技术，与配套仪器使用，实现对孕妇阴道分泌物或阴道流出液中胰岛素样生长因子结合蛋白‑1与胎儿纤维连接蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。还公开了一种同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白‑1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法及其制备的金标垫，所述金标垫采用两种抗体标记胶体金并混合复溶液喷金的方法实现两种蛋白的同时检测，实现了一次取样同时定量检测两个指标，操作快速简单，检测准确度高。

【技术实现步骤摘要】
用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统
本专利技术涉及医学检测领域，特别是涉及一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统。
技术介绍
临产前的胎膜破裂称为胎膜早破(PROM)，孕龄<37孕周的胎膜早破又称为早产(未足月)胎膜早破。胎膜早破是围生期最常见的并发症，可导致早产率升高，围生儿病死率增加，宫内感染率及产褥感染率均升高，妊娠满37周后的胎膜早破发病率约为10％，妊娠不满37周的胎膜早破发病率约为2.0％—3.5％。PROM可并发早产、脐带脱垂及母儿感染，一旦发生，若处理不当可危及母儿生命，因此准确及时诊断PROM至关重要。胰岛素样生长因子结合蛋白-1(insulin-likegrowthfactorbindingprotein-1，简称IGFBP-1)主要存在羊水中，是孕期羊水中的一种标志性蛋白质。当发生胎膜破裂时，羊水从胎膜的破口中漏到宫颈阴道中，其中含有的IGFBP-1成为胎膜早破诊断的标志，由于其在羊水中的含量极高，为母亲血液中的100—1000倍，因此灵敏度非常高，可以检测出常规手段无法测出的微量羊水，解决了隐匿性胎膜早破和高位破水难以检测的问题。早产是指在满28孕周至37孕周之间的分娩，国内早产占分娩总数的5％—15％，约15％的早产儿死于新生儿期。早产防控是降低围生儿死亡率和提高新生儿素质的主要措施之一。国外学者建议将早产定义时间上限提前到妊娠20周。胎儿纤维连接蛋白(fetalFibronectin，fFN)，是子宫绒毛膜细胞外的基质成分，存在于绒毛膜与蜕膜之间，主要由滋养层细胞产生。由于孕21周以后，绒毛膜与蜕膜的融合阻止了fFN的释放，而使正常的孕妇在22—35孕周时，fFN的含量极低，只有在绒毛膜与蜕膜分离、绒毛膜与蜕膜界面的细胞外基质遭到机械损伤或蛋白水解酶的降解时，fFN才可见于宫颈阴道分泌物中。因此，在孕22-35周之间，宫颈阴道分泌物中fFN的水平与是否发生早产有很大的相关性。国内早产占分娩总数的5％—15％，约15％的早产儿死于新生儿期，因此，早产防控是降低围生儿死亡率和提高新生儿素质的主要措施之一。胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白这两种物质都在子宫发生收缩、胎盘和蜕膜发生剥离时释放至孕妇阴道的物质，当孕妇阴道中上述两种物质出现异常升高，可预测早产早破的发生。目前检测胎膜早破准确性最高的方法为检测是否出现胰岛素样生长因子结合蛋白-1，准确率可达90％；胎儿纤维连接蛋白检测在生物标志物中阴性预测值极高，因此极具价值，美国妇产科医师协会(ACOG)推荐为早产诊断常规项目。如上所述，目前临床上已经存在对早产和胎膜早破诊断的方法，但是，胎膜早破和早产是密切关联的，可又相对独立的产科常见症状，因为胎膜早破是导致早产的部分原因，而出现胎膜早破并不意味着就会早产，因此临床上对早产和胎膜早破都需要进行风险评估。但是目前临床诊断方法都是多次取样并分开进行的，这样既增加了操作繁琐程度，同时因为对孕妇多次取样，会刺激孕妇发生宫缩以及增加感染的几率，进而增加早产和胎膜早破的风险。目前，IGFBP-1诊断胎膜早破特异性高，但仅限于检测胎膜完整程度，即使胎膜完整，孕妇是否有发动早产的风险仍是未知结果；fFN阴性预测值高，但阳性时无法判断fFN来自于羊水还是绒毛膜蜕膜间隙，无法判断是否是胎膜早破导致的早产风险。虽然IGFBP-1与fFN均为临床指南推荐性指标，但是将两种物质的诊断联合应用并实现一次取样同时定量检测蛋白含量的技术还未出现。申请号为201020565061.X的专利公开了一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其虽实现了可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，但该试剂盒存在以下缺陷：(1)该方案为定性检测，即只能给出阴阳性结果，无法得知指标蛋白的准确含量，且定性检测靠肉眼判断存在辨别误差，容易造成错误的结果分析，甚至严重影响医生判断及其临床应用；(2)该方案虽然只给出了分别制备两种金标垫进行组装的步骤，其实际还是制备两种检测条，将两种检测条装入一张卡或将两种检测条背靠背粘贴在一起，并非真正做成一根测试条；(3)该方案是裸测试条且肉眼观察，试条容易受到污染，影响测量结果的判断。因此亟需提供一种新型的同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的检测系统来解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，能够实现一次取样同时快速定量检测两个蛋白含量，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，包括试剂盒、检测设备；所述试剂盒主要包括检测卡、标准曲线对照表、样本稀释液，所述检测卡包括卡壳、设置在卡壳中的试条，所述试条包括衬底、依次粘附在衬底上的样品垫、金标垫、NC膜、吸收垫，所述金标垫采用两种抗体标记胶体金并混合复溶液喷金的方法实现两种蛋白的同时检测；所述检测设备用于对试剂盒中两种蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。在本专利技术一个较佳实施例中，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳、下卡壳，上卡壳上开有位于样品垫上部的加样孔、位于NC膜上部的观测口，下卡壳的内表面设置有用于放置试条的卡槽。在本专利技术一个较佳实施例中，所述NC膜上依次等间隔设置有T2检测线、T1检测线、质控线，T2检测线上包被IGFBP-1单克隆抗体2，T1检测线上包被fFN单克隆抗体2，质控线上包被羊抗鼠抗体。在本专利技术一个较佳实施例中，所述样品垫与金标垫为玻璃纤维膜。在本专利技术一个较佳实施例中，所述标准曲线对照表设置在条形码或SD卡上，条形码印在卡壳的表面。为解决上述技术问题，本专利技术采用的另一个技术方案是：提供一种同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，包括以下步骤：(1)在调节好pH值的胶体金溶液中分别标记胎儿纤维连接蛋白抗体1和胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1；(2)将两种标记物沉淀混合，加入pH值为7.0—7.4的金标复溶液进行复溶，混匀得到用于金标垫制备的金标液；(3)利用喷金仪将步骤(2)制备的金标液喷涂于亲水性的未处理金标垫上，置于37℃烘干，得到标记的金标垫。在本专利技术一个较佳实施例中，在步骤(1)中，所述胎儿纤维连接蛋白抗体1的标记方法包括以下步骤：(101)在1ml胶体金加入0.1mol/L碳酸钾溶液调节pH至fFN最适标记pH，该pH值为6.9—7.4；(102)混匀后，边迅速搅拌边逐滴加入6μg浓度为0.1mg/ml的胎儿纤维连接蛋白抗体1，反应30min；(103)再加入50μl10％BSA，搅拌均匀，反应15min后，再加入20μl5％PEG20000，反应15min。在本专利技术一个较佳实施例中，在步骤(1)中，所述胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的标记方法包括以下步骤：(111)在1ml胶体金加入0.1mol/L碳酸钾溶液调节pH至IGFBP-1最适标记pH，该pH值为7.0—7.7；(112)混匀后，边迅速搅拌边逐滴加入6μg浓度为0.1mg/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白‑1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，包括试剂盒、检测设备；所述试剂盒主要包括检测卡、标准曲线对照表、样本稀释液，所述检测卡包括卡壳、设置在卡壳中的试条，所述试条包括衬底、依次粘附在衬底上的样品垫、金标垫、NC膜、吸收垫，所述金标垫采用两种抗体标记胶体金并混合复溶液喷金的方法实现两种蛋白的同时检测；所述检测设备用于对试剂盒中两种蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。

【技术特征摘要】
1.一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，包括试剂盒、检测设备；所述试剂盒主要包括检测卡、标准曲线对照表、样本稀释液，所述检测卡包括卡壳、设置在卡壳中的试条，所述试条包括衬底、依次粘附在衬底上的样品垫、金标垫、NC膜、吸收垫，所述金标垫采用两种抗体标记胶体金并混合复溶液喷金的方法实现两种蛋白的同时检测；所述检测设备用于对试剂盒中两种蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。2.根据权利要求1所述的用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳、下卡壳，上卡壳上开有位于样品垫上部的加样孔、位于NC膜上部的观测口，下卡壳的内表面设置有用于放置试条的卡槽。3.根据权利要求1所述的用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，所述NC膜上依次等间隔设置有T2检测线、T1检测线、质控线，T2检测线上包被IGFBP-1单克隆抗体2，T1检测线上包被fFN单克隆抗体2，质控线上包被羊抗鼠抗体。4.根据权利要求1所述的用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，所述样品垫与金标垫为玻璃纤维膜。5.根据权利要求1所述的用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，所述标准曲线对照表设置在条形码或SD卡上，条形码印在卡壳的表面。6.一种同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，包括以下步骤：(1)在调节好pH值的胶体金溶液中分别标记胎儿纤维连接蛋白抗体1和胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1；(2)将两种标记物沉淀混合，加入pH值为7.0—7.4的金标复溶液进行复溶，混匀得到用于金标垫制备的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡容，王忠亮，
申请(专利权)人：安徽惠邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34