一种硬脑膜生物补片及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物补片领域，涉及一种硬脑膜生物补片及其制备方法。本发明专利技术的硬脑膜生物补片原料，不是来自商品肉畜，而是来自种畜，如经产母猪SIS补片，其具有天然良好力学性能；本发明专利技术的方法在去细胞环节采用植物源试剂，使用这类天然温和试剂对ECM天然结构基无损伤，且能保留更多有效活性成份，具有更好的诱导组织修复生长能力；本发明专利技术的方法，既没有用交联剂来增强力学性能，也没有用合成去污剂来去细胞；避免了化学试剂残留及其毒性，同时能够保留更多ECM中有效成份，特别是GAGs的含量。本发明专利技术的硬膜生物补片不仅质地柔软且韧性好，易于缝合紧密，能防止脑脊液渗漏；而且降解速度与新硬膜生长基本同步，更有利于硬膜的修复再生。

A dural biological patch and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种硬脑膜生物补片及其制备方法
本专利技术涉及组织修复用生物材料领域，具体涉及一种硬脑膜生物补片及其制备方法。
技术介绍
硬脑膜，也称硬膜，是保护脑组织的一道重要屏障，对于维护神经系统的结构及功能活动意义重大；硬脑膜是一厚而坚韧的双层膜。外层是颅骨内面的骨膜，仅疏松地附于颅盖，特别是在枕部与颞部附着更疏松，称为骨膜层。但在颅的缝和颅底则附着更牢固，很难分离。颅内无硬膜内腔。硬脑膜内层较外层厚而坚韧，与硬脊膜在枕骨大孔处续连，称为脑膜层;主要作用是保护大脑；创伤或颅脑手术可造成硬脑膜缺损，需要通过手术，采用硬膜补片来修补硬脑膜，封闭硬脑膜下腔，这样可明显减少或预防脑脊液漏、颅内感染等并发症。理想硬脑膜补片应具备下列条件：①具有安全性，无毒性，无感染性，②组织相容性好，无免疫排斥反应。③致密性好，无渗透性，能防止脑脊液漏，保护脑组织。④具有韧性，易牢固缝合。⑤能促使硬脑膜再生，不发生粘连。⑥使用方便，手术简单，易于消毒灭菌。⑦取材广泛，价格低廉。⑧具有稳定的生物学惰性的，不引起急慢性炎症反应。目前应用较多的硬脑膜修补材料主要是异种去细胞基质，这类天然生物补片，也称为去细胞组织补片，补片初始原料主要来源于动物小肠粘膜下层、膀胱粘膜下层、胃粘膜下层、心包膜、脑膜、羊膜、脏器膜、腹膜及真皮等组织；通过一系列加工处理，包含重要工艺，如去细胞、去DNA，去α-Gal抗原等免疫原成分。这种方法获得的去细胞基质材料，一方面能够保留三维立体结构，同时也含有一些重要活性成份。由去细胞基质制备而成的理想生物补片，应具有良好的生物适应性，可降解性、可吸收性；力学强度适宜性，无毒性，无免疫性；能够为宿主细胞的趋化、附着、增殖、分化提供理想的空间支架和适宜的微（营养）环境，有利于靶组织的结构修复和功能重建。关于补片的力学性能，临床上多使用源自商品肉畜的心包、腹膜或胸膜、肌腱、小肠系膜等作为硬膜生物补片的最初原料。实际应用中，这类补片在力学性能上常达不到硬膜补片的力学要求；因此在制备硬膜补片过程中，常采用以下二种方法来增强补片力学性能，达到韧性好、拉伸强度高的要求。一是：化学（生化）方法，在补片制备过程中，使用环氧化物或戊二醛等化学交联剂，以提高补片的生物力学特性。如申请人是北京桀亚莱福生物技术有限责任公司、专利技术人是孙继煌的公开号为CN108261565的专利，和专利技术人是刘博文的公开号为CN105999411的专利，这两篇专利在去（脱）细胞工艺上有所优化，同时为了达到补片在力学上的要求，都使用了交联剂。其缺点是交联程度很难控制，残留的交联剂有潜在的细胞毒性，且这类交联型补片通常力学性能好，抵抗力强，不易降解或降解缓慢，降解与组织再生不能同步匹配，易导致纤维化、慢性炎症等不良反应；广东某公司的硬脑膜补片，采用心包膜或胸膜经环氧交联处理等加工而成，补片力学强度够，但降解较慢，可导致纤维化、慢性炎症反应、存在与颅骨或脑组织粘连等风险；且因其较硬，无法与脑组织表面完美贴合。二是：物理方法，如将单层片横向或纵向，多层交叉部分重叠放置，如申请人为上海宏创医疗科技有限公司，专利技术人是周宁辉，公开号为CN106039404A的专利，虽然整体上采用此方法制备成的补片，其拉伸强度有所提高，但使用补片原料较多，一方面是原料被浪费，另一方面是补片过厚，会使整个补片完全降解的时间被拖得过长，进而影响靶组织的修复和功能的康复。另外本申请人公开的专利CN109248339A文献，其创新点是将补片原料制成细条状后捻成线，再通过编织的方式制成补片；经过编织而制成的补片，其拉抻强度得到明显提高，但是此步骤需要先将补片原料制成细条，再通过编织方式制备，技术上有点难度，步骤上有点复杂。另外目前市场上，有北京某公司、美国某公司的硬膜补片产品，采用的是牛腱提取胶原而制成的，特点是生物相容性好，且无需缝合；但其降解速度过快，在新组织组织未长成之前,硬膜补片已过早降解了。关于补片中的有效活性成份，因不同的去细胞方式（机械法、化学法、酶法）以及使用不同的去细胞试剂，在补片中保留的有效活性成份差异很大；ThomasW.Gilbertetal在杂志《Biomaterials》27(2006)第3677中表1对不同去细胞方法和去细胞试剂做了详细比较。除了有酶、酸碱之外，还会用去污剂（也称表面活性剂）作为去细胞试剂，现作简要介绍如下：1.TritonX-100，-200，化学名称聚乙二醇辛基苯基醚，是一种化工合成的去污剂；2.SDS，化学名称十二烷基硫酸钠，一种常用的离子型去垢剂，HLB为40，属于亲水基表面活性剂；可使细胞膜崩解，但其能与膜蛋白疏水部分结合，并使其与膜分离，但SDS低浓度会限制组织中对细胞的去除效率；较高浓度的SDS可破坏蛋白质中的离子键和氢键等非共价键，造成对组织ECM三维多孔结构的破坏及对蛋白质类成份构象的损伤；3.CHAPS中文名为[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，其主要是作为蛋白质裂解液,用于增溶膜蛋白和裂解蛋白-蛋白之间的相互作用；4.甜菜碱型表面活性剂（Betainetypesurfactant或Sulfobetaine）是由季铵盐型阳离子部分和羧酸盐型阴离子部分所构成；常见例子为烷基（硫代）甜菜碱，代表性产物是N-十烷基-N，N-二甲基-N-羧甲基甜菜碱(BS-10)，对天然状态膜蛋白具有增溶作用。上述去污剂都是化工合成或半合成的，去污力强，去细胞效果好；但是易导致ECM中有效成份如GAGs的流失，以及对ECM天然立体结构破坏。采用这类去细胞试剂制备的生物补片，其保留的有效活性成份少，ECM立体结构损伤大，因此其诱导组织再生能力差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，针对现有硬膜生物补片在力学强度上较弱，不能有效满足临床实际需要；以及现有硬膜增强补片力学强度的方法，存在前述种种不足和缺陷；专利技术人围绕补片生物力学这一特定技术特征，通过大量文献阅读，结合自身对学术理论的仔细分析，以及多年丰富的工作经验，将理论与实践密切结合，出人意料但又在情理之中，巧妙又方便地解决了常见硬脑膜补片力学性能不足的技术难题。为了实现本专利技术的目的，一方面本专利技术提供一种用于硬脑膜修复的生物补片，其特征在于，所述补片，含有去细胞的种畜结缔组织；进一步的，所述去细胞的去细胞试剂主要由皂素组成；进一步的，所述种畜为经产的母猪、母牛、母羊、母马；进一步的，所述种畜为健康的淘汰母猪；进一步的，所述结缔组织是指小肠粘膜下层、膀胱粘膜下层、胃粘膜下层、真皮基质、心包膜、脑膜、羊膜、脏器膜、腹膜的一种或多种组合；进一步的，所述种畜结缔组织指经产母猪小肠粘膜下层；另一方面本专利技术提供一种硬脑膜生物补片的制备方法，其特征在于，去细胞工艺中去细胞试剂主要由植物源非离子表面活性剂组成；进一步的，所述去细胞试剂，是植物源五环三萜烯皂素、类固醇皂素之一或其组合物；进一步的，所述去细胞试剂，是Quil-A、茶皂素之一或其组合物；进一步的，所述去细胞试剂的有效工作浓度重量比为0.05-1%，与补片原料作用时间为每次10-60分钟，作用温度为4-15℃；进一步的，所述硬脑膜生物补片的制备方法，原料主要由种畜结缔组织组成。现有动物源硬脑膜补片是取自新鲜屠宰动物，经去细胞工艺等步骤加工而成，所使用的新鲜屠宰动物组织，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于硬脑膜修复的生物补片，其特征在于，所述补片，含有去细胞的种畜结缔组织。

【技术特征摘要】
1.一种用于硬脑膜修复的生物补片，其特征在于，所述补片，含有去细胞的种畜结缔组织。2.根据权利要求1所述的补片，其特征在于，所述去细胞的去细胞试剂主要由皂素组成。3.根据权利要求1所述的补片，其特征在于，所述种畜为经产的母猪、母牛、母羊、母马。4.根据权利要求1所述的补片，其特征在于，所述种畜为健康的淘汰母猪。5.根据权利要求1所述的补片，其特征在于，所述结缔组织是指小肠粘膜下层、膀胱粘膜下层、胃粘膜下层、真皮基质、心包膜、脑膜、羊膜、脏器膜、腹膜的一种或多种组合。6.根据权利要求1所述的补片，其特征在于，所述种畜结缔组织指经产母猪小肠粘膜下层。7.一种硬脑...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩韦红，葛翠兰，钱锵，张国强，
申请(专利权)人：上海白衣缘生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31