一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂及其制备方法，利用凝胶载体负载复合微生物菌粉得到，复合微生物菌粉包含：蜡样芽孢杆菌ACCC03288菌粉、哈茨木霉ACCC30371菌粉、绿针假单胞菌ACCC19853菌粉、淡紫拟青霉ACCC30639菌粉、刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌粉，协同抑制苹果轮纹病菌的生长繁殖，并为苹果树提供营养支持，促进苹果生长。凝胶载体是利用丙烯酰胺和丙烯酸钠的交联反应，以及海藻酸钠和氯化钙的交联，并引入聚乙烯醇得到，可自然降解，对复合微生物菌粉起到缓释作用，并为微生物生长提供营养支持，使得复合微生物菌粉更好地发挥防效作用。本发明专利技术的微生物菌剂一次使用即可，降低了劳动强度。

A Microbial Agent for Controlling Apple Ring Rot Disease and Its Preparation Method

【技术实现步骤摘要】
一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂及其制备方法
本专利技术涉及
，特别是涉及一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂及其制备方法。
技术介绍
轮纹病是苹果的常见病害之一，是由弱寄生菌侵染引起，包括枝干轮纹病和果实轮纹病两种。轮纹病病菌以菌丝、分生孢子器及子囊壳在被害枝干越冬。菌丝在枝干病组织中可存活4～5年，每年4～6月间产生孢子，成为初次侵染来源。7～8月孢子散发较多；病部前三年产生孢子的能力强，以后逐渐减弱。分生孢子主要随雨水飞溅传播，范围一般不超过10米。病菌在落花后10天左右即可侵染幼果。4～7月份侵染量最多，7月以后孢子散生量降低，同时果实也不易被侵染，侵染率很低。孢子萌发经皮(果点)侵入果实和枝干，24小时可完成侵染。目前苹果树种植中主要通过化学杀菌剂防治轮纹病，代森锰锌、多菌灵、甲基托布津、甲基硫菌灵、敌菌丹等杀菌剂是防治轮纹病的常用药剂，但是，长期使用这些药物防治苹果轮纹病，会出现抗药性和敏感性下降的问题，且药物容易残留，残留的农药会危害人体健康。近年来微生物菌剂在各领域颇受欢迎，其利用微生物的生命活动及代谢产物，改善农作物养分供应，为农作物提供营养支持，防病促生长，且不存在抗药性问题。专利CN102805107B公开了一种用来防治苹果轮纹病的微生物制剂，是利用枯草芽孢杆菌活化、发酵得到，其防治效果仍有很大的提升空间；而且需要多次施用，包括四月份开花期喷施或涂抹树干粗皮，六月份果实套袋前喷施果面，七八月份雨水较多时喷施或涂抹处理树干病组织，过程繁琐，果农的劳动强度大。这其中有一个重要原因是微生物菌剂施用后对环境比较敏感，施药环境恶劣很可能导致微生物大量死亡，进而导致防效变差甚至降为零。
技术实现思路
本专利技术的目的就是要提供一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术是通过如下方案实现的：一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂，包括复合微生物菌粉以及负载其的凝胶载体两部分，以重量份计，所述复合微生物菌粉包含：蜡样芽孢杆菌ACCC03288菌粉1份，哈茨木霉ACCC30371菌粉0.2～0.3份，绿针假单胞菌ACCC19853菌粉0.3～0.5份，淡紫拟青霉ACCC30639菌粉0.1～0.2份，刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌粉0.3～0.5份；所述凝胶载体是通过以下方法制备得到的：先向聚乙烯醇水溶液中加入丙烯酰胺和丙烯酸钠，通过紫外照射反应得到凝胶中间体，然后将凝胶中间体浸泡于海藻酸钠溶液中，滴入氯化钙溶液，交联反应，封闭放置，洗涤，得到凝胶载体。优选的，复合微生物菌粉与凝胶载体的质量比为1：20～30。优选的，所述复合微生物菌粉是通过以下制备方法得到的：先将蜡样芽孢杆菌ACCC03288、哈茨木霉ACCC30371、绿针假单胞菌ACCC19853、淡紫拟青霉ACCC30639、刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌株分别单独进行接种培养、絮凝、压滤、干燥及粉碎，得到相应的菌粉，然后将所得菌粉进行混合，即得所述复合微生物菌粉。进一步优选的，蜡样芽孢杆菌ACCC03288、绿针假单胞菌ACCC19853接种于肉汁胨培养基，接种量为4～5％(体积)；哈茨木霉ACCC30371、淡紫拟青霉ACCC30639、刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌株接种于PDA培养基，接种量为3～4％(体积)，培养4～6天后，分别于170～180r/min摇床培养，各自的培养条件如下：蜡样芽孢杆菌ACCC03288的培养温度为27～29℃，培养时间为40～45小时；绿针假单胞菌ACCC19853的培养温度为27～29℃，培养时间为42～46小时；凝结芽孢杆菌ACCC00403的培养温度为28～30℃，培养时间为45～48小时；哈茨木霉ACCC30423的培养温度为27～29℃，培养时间为72～75小时；淡紫拟青霉ACCC30639的培养温度为28～30℃，培养时间为58～62小时；刺孢吸水链霉菌ACCC40018的培养温度为26～28℃，培养时间为55～60小时。进一步优选的，以重量份计，所述肉汁胨培养基包括：牛肉膏3～5份，蛋白胨5～6份，NaCl2～4份，琼脂18～22份和1000份去离子水，且其pH为6.8～7.2；以重量份计，所述PDA培养基包括：土豆195～200份、葡萄糖10～12份、琼脂18～20份，Na2HPO44～6份和1000份去离子水，且其pH为7.0～7.6。进一步优选的，利用磷酸氢二钠和氯化钙絮凝，两者的加入量分别为接种培养所得发酵液质量的1～2％和0.5～0.8％。进一步优选的，压滤、干燥及粉碎的具体方法为：采用板框压滤，然后45～50℃干燥至含水量20～30％，旋风分离后利用粉碎机粉碎，过30目筛，即得所述菌粉。优选的，所述凝胶载体是通过以下方法制备得到的：先向聚乙烯醇水溶液中加入丙烯酰胺和丙烯酸钠，再加入交联剂和光引发剂混合均匀，紫外照射反应，得到凝胶中间体，然后将凝胶中间体浸泡于海藻酸钠溶液中，滴入氯化钙溶液，交联反应30～40分钟，封闭放置10～12小时，洗涤，得到凝胶载体。进一步优选的，加入交联剂后，通氮除氧，再加入光引发剂混合均匀，其中，通氮除氧的具体方法是：氮气鼓泡10～30分钟。进一步优选的，聚乙烯醇水溶液、丙烯酰胺、丙烯酸钠、交联剂、光引发剂、海藻酸钠溶液、氯化钙溶液的质量比为1：0.2～0.3：1.5～1.8：0.1～0.2：0.03～0.04：1～2：6～8，聚乙烯醇水溶液、海藻酸钠溶液、氯化钙溶液的质量浓度依次为5～8％、2～3％、2～3％。进一步优选的，所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺，光引发剂为安息香二甲醚，安息香二甲醚是溶解于N-甲基吡咯烷酮中配制成质量浓度2.5％的溶液使用。进一步优选的，紫外照射反应的工艺条件为：波长365nm、功率400W的紫外光辐照反应5～7小时。进一步优选的，洗涤的具体方法是：利用去离子水洗涤3～5次，以清洗残留的反应试剂(丙烯酸钠、氯化钙等)。上述一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂的制备方法，先将微生物菌剂加入水中搅匀得到水溶液，然后将凝胶载体倒入水溶液中，以10～15L/分钟的气流速度通空气，1000～1500转/分钟搅拌30～40分钟，封闭，静置5～8小时，干燥，即得所述微生物菌剂。优选的，微生物菌剂与水的质量比为1：8～10。优选的，干燥的工艺条件为：室温(25℃)真空干燥12～15小时。上述微生物菌剂在防治苹果轮纹病中的应用。上述微生物菌剂的使用方法，将微生物菌剂加入100倍重量的水中稀释溶解，然后涂抹于树干粗皮表面，涂抹量为0.3～0.5mL/cm2。本专利技术的有益效果是：本专利技术利用凝胶载体负载复合微生物菌粉得到一种微生物菌剂，复合微生物菌粉包含：蜡样芽孢杆菌ACCC03288菌粉、哈茨木霉ACCC30371菌粉、绿针假单胞菌ACCC19853菌粉、淡紫拟青霉ACCC30639菌粉、刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌粉，协同抑制苹果轮纹病菌的生长繁殖，并为苹果树提供营养支持，促进苹果生长。凝胶载体是利用丙烯酰胺和丙烯酸钠的交联反应，以及海藻酸钠和氯化钙的交联，并引入聚乙烯醇得到，可自然降解，对复合微生物菌粉起到缓释作用，并为微生物生长提供营养支持，使得复合微生物菌粉更好地发挥防效作用。本专利技术的微生物菌剂一次使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂，其特征在于，包括复合微生物菌粉以及负载其的凝胶载体两部分，以重量份计，所述复合微生物菌粉包含：蜡样芽孢杆菌ACCC03288菌粉1份，哈茨木霉ACCC30371菌粉0.2～0.3份，绿针假单胞菌ACCC19853菌粉0.3～0.5份，淡紫拟青霉ACCC30639菌粉0.1～0.2份，刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌粉0.3～0.5份；所述凝胶载体是通过以下方法制备得到的：先向聚乙烯醇水溶液中加入丙烯酰胺和丙烯酸钠，通过紫外照射反应得到凝胶中间体，然后将凝胶中间体浸泡于海藻酸钠溶液中，滴入氯化钙溶液，交联反应，封闭放置，洗涤，得到凝胶载体。

【技术特征摘要】
1.一种防治苹果轮纹病的微生物菌剂，其特征在于，包括复合微生物菌粉以及负载其的凝胶载体两部分，以重量份计，所述复合微生物菌粉包含：蜡样芽孢杆菌ACCC03288菌粉1份，哈茨木霉ACCC30371菌粉0.2～0.3份，绿针假单胞菌ACCC19853菌粉0.3～0.5份，淡紫拟青霉ACCC30639菌粉0.1～0.2份，刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌粉0.3～0.5份；所述凝胶载体是通过以下方法制备得到的：先向聚乙烯醇水溶液中加入丙烯酰胺和丙烯酸钠，通过紫外照射反应得到凝胶中间体，然后将凝胶中间体浸泡于海藻酸钠溶液中，滴入氯化钙溶液，交联反应，封闭放置，洗涤，得到凝胶载体。2.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌粉是通过以下制备方法得到的：先将蜡样芽孢杆菌ACCC03288、哈茨木霉ACCC30371、绿针假单胞菌ACCC19853、淡紫拟青霉ACCC30639、刺孢吸水链霉菌ACCC40018菌株分别单独进行接种培养、絮凝、压滤、干燥及粉碎，得到相应的菌粉，然后将所得菌粉进行混合，即得所述复合微生物菌粉。3.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述凝胶载体是通过以下方法制备得到的：先向聚乙烯醇水溶液中加入丙烯酰胺和丙烯酸钠，再加入交联剂和光引发剂混合均匀，紫外照射反应，得到凝胶中间体，然后将凝胶中间体浸泡于海藻酸钠溶液中，滴入...

【专利技术属性】
技术研发人员：李如美，高宗军，李瑞娟，戴争，
申请(专利权)人：山东省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37