一种miRNAs原料液的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；本发明专利技术通过科学合理的提取方法，可实现大规模工业化生产；并且使用金银花作为提取的原材料，提取过程所涉及的物质无毒害，具有食用安全，环保保护的特点；提取过程使用的仪器都可循环利用，极大的降低植物提取miRNAs成本；同时该提取方法操作简单，方便了工作人员使用。

A Method for Extracting MicroRNAs Raw Material Solution

【技术实现步骤摘要】
一种miRNAs原料液的提取方法
本专利技术涉及miRNAs原料液提取
，具体为一种miRNAs原料液的提取方法。
技术介绍
miRNAs是真核生物中广泛存在的一种长约21到23个核苷酸的RNA分子，可调节其他基因的表达；miRNA来自一些从DNA转录而来，但无法进一步转译成蛋白质的RNA（属于非编码RNA）；miRNA通过与靶信使核糖核酸(mRNA)特异结合，从而抑制转录后基因表达，在调控基因表达、细胞周期、生物体发育时序等方面起重要作用；在动物中，一个微RNA通常可以调控数十个基因。现有的植物miRNAs提取方法以柱提法、磁珠法、trizol法、异硫氰酸胍法和SDS-KAc法为主；现有提取技术存在四个问题：1、多为小量样本提取；2、提取过程中涉及有毒、有害物质；3、提取成本高；4、提取难度大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种miRNAs原料液的提取方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；S102：将A份金银花与B份金银花分别放入到两个相同的金银花清洗机内，使用金银花清洗机去除A份金银花与B份金银花表面的杂质与残留农药，对A份金银花与B份金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用，然后将清洗后的A份金银花与B份金银花分别放在两个相同的烧杯内，并将A份金银花对应的烧杯标记为C，B份金银花对应的烧杯标记为D；S103：将C烧杯内的A份金银花加入到中药粉碎机内，通过中药粉碎机将A份金银花粉碎，并将A份金银花的细胞壁击破，同时将D烧杯内的B份金银花放置在阴凉处以备后续使用；S104：将中药粉碎机粉碎后的A份金银花倒入到反应釜内，并向反应釜内加入500ML的纯净水，然后将反应釜内部的温度调节至30℃～120℃，通过反应釜震荡搅拌5min-300min，使粉碎后的A份金银花内部的miRNAs从细胞释放出来，并进入到纯净水中，从而达到浸提的效果，从而制备出miRNAs初始原料液；S105：然后将反应釜内部的miRNAs初始原料液倒出，并使其降温至常温状态，然后使用粗过滤筛将miRNAs初始原料液中的杂质过滤出，然后使用细胞过滤筛将miRNAs初始原料液中的细碎杂质过滤出，从而得到最终的miRNAs原料液；S106：使用定量RT-PCR方法对过滤后的miRNAs原料液进行检测，如果检测到miRNAs原料液中的miRNAs比重较小时，使用D烧杯内的B份金银花重复S104、S105步骤，从新制备新的miRNAs原料液。其中，所述分选机利用空气悬浮原理选取出重量相近的金银花。其中，所述中药粉碎机用于粉碎A份金银花的时间为20s～600s，所述中药粉碎机用于粉碎B份金银花的时间为20s～600s。其中，所述中药粉碎机粉碎后的A份金银花和B份金银花粒径为25～800目。其中，所述粗过滤筛的目数为500目。其中，所述细胞过滤筛的目数为1800目。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过科学合理的提取方法，可实现大规模工业化生产；并且使用金银花作为提取的原材料，提取过程所涉及的物质无毒害，具有食用安全，环保保护的特点；提取过程使用的仪器都可循环利用，极大的降低植物提取miRNAs成本；同时该提取方法操作简单，方便了工作人员使用。附图说明图1为本专利技术工作方法的流程示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例，请参阅图1，本专利技术提供一种技术方案：一种miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；S102：将A份金银花与B份金银花分别放入到两个相同的金银花清洗机内，使用金银花清洗机去除A份金银花与B份金银花表面的杂质与残留农药，对A份金银花与B份金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用，然后将清洗后的A份金银花与B份金银花分别放在两个相同的烧杯内，并将A份金银花对应的烧杯标记为C，B份金银花对应的烧杯标记为D；S103：将C烧杯内的A份金银花加入到中药粉碎机内，通过中药粉碎机将A份金银花粉碎，并将A份金银花的细胞壁击破，同时将D烧杯内的B份金银花放置在阴凉处以备后续使用；S104：将中药粉碎机粉碎后的A份金银花倒入到反应釜内，并向反应釜内加入500ML的纯净水，然后将反应釜内部的温度调节至30℃～120℃，通过反应釜震荡搅拌5min-300min，使粉碎后的A份金银花内部的miRNAs从细胞释放出来，并进入到纯净水中，从而达到浸提的效果，从而制备出miRNAs初始原料液；S105：然后将反应釜内部的miRNAs初始原料液倒出，并使其降温至常温状态，然后使用粗过滤筛将miRNAs初始原料液中的杂质过滤出，然后使用细胞过滤筛将miRNAs初始原料液中的细碎杂质过滤出，从而得到最终的miRNAs原料液；S106：使用定量RT-PCR方法对过滤后的miRNAs原料液进行检测，如果检测到miRNAs原料液中的miRNAs比重较小时，使用D烧杯内的B份金银花重复S104、S105步骤，从新制备新的miRNAs原料液。其中，金银花可是金银花花蕾、花茎和花叶等器官的干制品，也可以是新鲜的金银花花蕾、花茎和花叶等器官。其中，所述分选机利用空气悬浮原理选取出重量相近的金银花。其中，分选机的型号为LCS-10LY分选机，进行金银花分选时，金银花在风力输送的作用下，经过关风机、进料斗落在高速旋转的分料盘上，在离心力的作用下，金银花被充分分散并甩向缓冲环，在下落过程中，较重的金银花在转子产生的交叉气流的作用下，经过调节环的叶片，滑落到分选器的粗料收集器中收集，然后经过关风机排出，从而得到质量较大的金银花。其中，在进行金银花清洗的过程中，将金银花投放到金银花清洗机的水槽内,在高压水流和强力气泡的作用下,被充分打散、翻滚、清洗、传送；然后金银花表面洗脱的泥沙沉入底部隔离仓，不会发生翻扬回流造成再度污染；漂浮在水中的杂物、小虫通过去杂机构的网孔收集，细丝、头发等通过毛辊清理掉；洗净的金银花出水后再经喷淋清洗，送至下道工序，通过金银花清洗机能够对金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用。其中，所述中药粉碎机用于粉碎A份金银花的时间为20s～600s，所述中药粉碎机用于粉碎B份金银花的时间为20s～600s。其中，所述中药粉碎机粉碎后的A份金银花和B份金银花粒径为25～800目。其中，所述粗过滤筛的目数为500目。其中，所述细胞过滤筛的目数为1800目。需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种miRNAs原料液的提取方法，其特征在于，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；S102：将A份金银花与B份金银花分别放入到两个相同的金银花清洗机内，使用金银花清洗机去除A份金银花与B份金银花表面的杂质与残留农药，对A份金银花与B份金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用，然后将清洗后的A份金银花与B份金银花分别放在两个相同的烧杯内，并将A份金银花对应的烧杯标记为C，B份金银花对应的烧杯标记为D；S103：将C烧杯内的A份金银花加入到中药粉碎机内，通过中药粉碎机将A份金银花粉碎，并将A份金银花的细胞壁击破，同时将D烧杯内的B份金银花放置在阴凉处以备后续使用；S104：将中药粉碎机粉碎后的A份金银花倒入到反应釜内，并向反应釜内加入500ML的纯净水，然后将反应釜内部的温度调节至30℃～120℃，通过反应釜震荡搅拌5min‑300min，使粉碎后的A份金银花内部的miRNAs从细胞释放出来，并进入到纯净水中，从而达到浸提的效果，从而制备出miRNAs初始原料液；S105：然后将反应釜内部的miRNAs初始原料液倒出，并使其降温至常温状态，然后使用粗过滤筛将miRNAs初始原料液中的杂质过滤出，然后使用细胞过滤筛将miRNAs初始原料液中的细碎杂质过滤出，从而得到最终的miRNAs原料液；S106：使用定量RT‑PCR方法对过滤后的miRNAs原料液进行检测，如果检测到miRNAs原料液中的miRNAs比重较小时，使用D烧杯内的B份金银花重复S104、S105步骤，从新制备新的miRNAs原料液。...

【技术特征摘要】
1.一种miRNAs原料液的提取方法，其特征在于，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；S102：将A份金银花与B份金银花分别放入到两个相同的金银花清洗机内，使用金银花清洗机去除A份金银花与B份金银花表面的杂质与残留农药，对A份金银花与B份金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用，然后将清洗后的A份金银花与B份金银花分别放在两个相同的烧杯内，并将A份金银花对应的烧杯标记为C，B份金银花对应的烧杯标记为D；S103：将C烧杯内的A份金银花加入到中药粉碎机内，通过中药粉碎机将A份金银花粉碎，并将A份金银花的细胞壁击破，同时将D烧杯内的B份金银花放置在阴凉处以备后续使用；S104：将中药粉碎机粉碎后的A份金银花倒入到反应釜内，并向反应釜内加入500ML的纯净水，然后将反应釜内部的温度调节至30℃～120℃，通过反应釜震荡搅拌5min-300min，使粉碎后的A份金银花内部的miRNAs从细胞释放出来，并进入到纯净水中，从而达到浸提的效果，从而制备出miRNAs初始原料液；S105：然后将反应釜内...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡小云，
申请(专利权)人：江苏核泰生态科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32