一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型及其构建方法和用途技术

本发明专利技术涉及生物医药研究领域，具体提供了一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，包括对动物酒精饮食诱导和周期性腹腔注射乙醇诱导，得到酒精性肝纤维化和炎症动物模型，本发明专利技术通过两种诱导方式发挥协同作用，构建得到了有利于深入研究酒精性肝纤维化的发病机制的小鼠酒精性肝纤维化和炎症模型，该模型可作为药物研发所需的动物模型，特别是作为酒精性肝病伴有肝纤维化和炎症的特定动物模型，筛选有效预防与治疗酒精性肝病伴有肝纤维化和炎症的药物及方法，具有明显的应用优势和极高的科研价值，克服了酒精剂量过大会导致动物死亡，过小会导致酒精性肝损伤小，纤维化和炎症不明显等缺点，具有构建过程简便，容易操作，构建成本低的优点。

An animal model of alcoholic liver fibrosis and inflammation and its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型及其构建方法和用途
本专利技术涉及生物医药研究领域，具体涉及一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型及其构建方法和用途。
技术介绍
酒精性肝病(Alcoholicliverdisease,ALD)是一种由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化。一些较轻的ALD在戒酒后可以逆转，而一些严重的ALD，如肝硬化，是致命和不可逆转的。在欧美等西方发达国家，ALD仍是导致肝硬化的首要病因。在我国ALD是继病毒性肝炎之后的第二大肝脏疾患，近年来ALD占同期肝病住院患者的比例在不断上升，其在肝硬化的病因构成比已超过25％。ALD已经成为严重危害人类生命和身体健康的一类疾病。目前ALD仍缺乏特殊有效的治疗手段，主要是在戒酒的基础上辅以其它治疗方法，比如对抗或改善乙醇代谢、降脂、抗炎抗氧化、免疫调节、抗肝纤维化以及肝移植等。ALD病因机理十分复杂，与性别、肥胖、遗传、饮食以及饮酒方式等多种因素相关，但其具体的机制尚不是很清楚，可能是由多种类型细胞(如中性粒细胞、内皮细胞、枯否细胞、肝细胞)以及损伤因素(如内毒素、氧化应激和蛋白酶等)共同作用的结果。饮酒方式是导致ALD疾病进展的关键因素之一，但其如何影响ALD的进展尚不清楚。目前，由于缺乏能够完全模拟人类ALD的动物模型，在很大程度上限制了其致病机理和防治措施的研究。因此，寻找一种能够模拟人类ALD的稳定可靠的动物模型成为该疾病领域研究的一个重要方向，对疾病发生发展机制研究及药物筛选具有十分重要的作用。上世纪中叶，人们开始利用小动物如啮齿动物模型来研究ALD，70年代和本世纪上半叶分别达到了高峰。目前，已经建立了几种啮齿动物ALD模型，包括酒精灌胃模型、Lieber-DeCarli酒精液体饲料模型和Tsukamato-French模型。Lieber-DeCarli酒精液体饲料模型的肝损伤程度较轻，仅出现轻度的血清ALT升高，不是酒精性肝纤维化和炎症的理想模型。Tsukamato和French采用了手术植入胃管的连续胃内输注酒精法建立了Tsukamato-French模型，该模型可诱发严重的脂肪变性、轻度的肝脏炎症和轻度的纤维化，但对实验技术和实验动物的要求严格、费力、费用昂贵，故难以推广使用。急性酒精灌胃模型仅能诱发肝脏脂肪变性和轻度的血清ALT和AST升高。近期由美国国立卫生院酒精滥用与酒精中毒研究所肝病研究室建立的新模型，即慢性酒精喂养加急性酒精灌胃的酒精性肝病小鼠模型(NIAAA模型或Gao-Binge模型)，以复制酒精性肝炎患者中经常慢性饮酒伴随过度饮酒者的饮酒行为和慢加急性肝损伤。这种模型虽然具有时间短、费用低、容易操作等特点，但即使慢性酒精喂养4-6周加连续多次急性酒精灌胃，也仅出现了肝脏广泛的脂肪变性，血清ALT、AST水平轻度升高，并无明显的肝纤维化。因此，目前亟需建立一种构建过程简单、容易操作、构建成本低，具有明显的肝纤维化的酒精性肝纤维化和炎症动物模型。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的缺陷，提供构建过程简单、容易操作、构建成本低，具有明显的肝纤维化的酒精性肝纤维化和炎症动物模型。本专利技术提供了一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，包括，对动物酒精饮食诱导和周期性腹腔注射乙醇诱导，得到酒精性肝纤维化和炎症动物模型。所述酒精饮食诱导的过程为使用乙醇液体饲料连续喂养动物20～80天；所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程为在酒精饮食诱导期间，每隔3～10天对动物腹腔注射乙醇。所述酒精饮食诱导的过程为使用乙醇液体饲料连续喂养动物30～60天；所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程为在酒精饮食诱导期间，每隔4～6天对动物腹腔注射乙醇。每升乙醇液体饲料中含乙醇的重量为50～55g。所述酒精饮食诱导过程中，每天乙醇液体饲料的喂养量按照乙醇的含量计算，动物每千克体重每天摄入乙醇的重量为20～25g。所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程中，动物每千克体重每次腹腔注射乙醇的重量为4～5g。所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程中，前1～4次动物每千克体重每次腹腔注射乙醇的重量为4g，以后动物每千克体重每次腹腔注射乙醇的重量为5g。所述动物选自小鼠、大鼠、比格犬、恒河猴中的一种。本专利技术还提供了上述任一所述的构建方法制备得到的酒精性肝纤维化和炎症动物模型。本专利技术还提供了上述任一所述的构建方法制备得到的酒精性肝纤维化和炎症动物模型用于筛选或鉴定预防或治疗酒精性肝病药物的用途，优选地，所述酒精性肝病为伴有肝纤维化和炎症的酒精性肝病。本专利技术技术方案，具有如下优点：1.本专利技术提供的酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，通过对动物酒精饮食诱导即慢性喂养较大量乙醇，更好地模拟人长期大量饮酒模式；而通过周期性腹腔注射乙醇诱导，直接腹腔注射酒精，更好地模拟人周期性暴饮饮酒模式，本专利技术通过两种诱导方式发挥协同作用，构建得到了有利于深入研究酒精性肝纤维化的发病机制的小鼠酒精性肝纤维化和炎症模型，能够最大限度地模仿人类酒精性肝纤维化病变过程，相比于现有方法构建得到模型，本专利技术的小鼠酒精性肝纤维化和炎症模型不仅构建过程简便，容易操作，构建成本低，而且具有明显的酒精性肝纤维化的病理表现，如肝细胞脂肪变性、细胞核碎裂、细胞溶解、胶原纤维增生和炎症改变，随着造模时间延长，肝损伤和肝纤维化程度加重，使得该模型可作为药物研发酒精性肝病所需的动物模型，特别是作为酒精性肝病伴有肝纤维化和炎症的特定动物模型，筛选有效预防与治疗酒精性肝病伴有肝纤维化和炎症的药物及方法，具有明显的应用优势和极高的科研价值，克服了酒精剂量过大会导致动物死亡，过小会导致酒精性肝损伤小，纤维化和炎症不明显等缺点。2.本专利技术提供的酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，所述酒精饮食诱导的过程为使用乙醇液体饲料连续喂养动物30～60天；所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程为在30～60天酒精饮食诱导期间，每隔4～6天对动物腹腔注射乙醇，其中实验表明，按上述方法控制对小鼠处理30天后观察肝组织出现轻度损伤、炎症特征以及纤维化，处理60天后得到具有明显肝纤维化的酒精性肝纤维化和炎症模型。3.本专利技术前期筛选了连续喂养乙醇液体饲料的酒精量和腹腔注射乙醇的间隔时间和酒精量，发现先慢性喂养和腹腔注射的酒精量过大会导致动物死亡，过小会导致酒精性肝损伤小，纤维化和炎症不明显等缺点，而本专利技术采用了高于目前报道的其他小鼠ALD模型的剂量，结合周期性腹腔注射酒精和乙醇连续喂养模式，两种诱导方式发挥协同作用，构建得到了一种具有酒精性慢性肝纤维化和炎症的小鼠模型，通过分别控制每天喂养乙醇的重量为20～25g/kg动物体重，腹腔注射乙醇的重量为4～5g/kg动物体重，成功克服了酒精量过大会导致动物死亡，酒精量过小会导致酒精性肝损伤小，纤维化和炎症不明显等缺点，构建得具有明显的肝损伤、肝纤维化和肝脏炎症的动物模型。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，其特征在于，包括，对动物酒精饮食诱导和周期性腹腔注射乙醇诱导，得到酒精性肝纤维化和炎症动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种酒精性肝纤维化和炎症动物模型的构建方法，其特征在于，包括，对动物酒精饮食诱导和周期性腹腔注射乙醇诱导，得到酒精性肝纤维化和炎症动物模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述酒精饮食诱导的过程为使用乙醇液体饲料连续喂养动物20～80天；所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程为在酒精饮食诱导期间，每隔3～10天对动物腹腔注射乙醇。3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述酒精饮食诱导的过程为使用乙醇液体饲料连续喂养动物30～60天；所述周期性腹腔注射乙醇诱导过程为在酒精饮食诱导期间，每隔4～6天对动物腹腔注射一次乙醇。4.根据权利要求2或3所述的构建方法，其特征在于，每升乙醇液体饲料中含乙醇的重量为50～55g。5.根据权利要求2～4中任一所述的构建方法，其特征在于，所述酒精饮食诱导过程中，每天乙醇液体饲料的喂养量按照乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志亮，于娟，黄进明，洪绯，王世聪，庄毅超，殷婷婷，林锦霞，
申请(专利权)人：漳州片仔癀药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35