非洲猪瘟病毒疫苗及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫原性组合物，包含第一、第二和第三构建体，其中所述第一构建体包含非洲猪瘟病毒(ASFV)的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段，或包含ASFV的CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L基因或其片段，所述第二构建体包含ASFV的P12、P32、P54、P72基因或其片段，所述第三构建体包含ASFV的P220基因或其片段。还涉及用本发明专利技术的组合物制备ASFV疫苗或用于治疗或预防ASFV感染的药物。

African swine fever virus vaccine and its use

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒疫苗及其用途
本专利技术涉及免疫学领域。具体而言，本专利技术涉及非洲猪瘟疫苗及其用途。更具体的，本专利技术涉及基于重组腺病毒的疫苗。
技术介绍
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性的传染病，其发病率高，死亡率可高达100％，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。该病最早在1921年于非洲的肯尼亚确认发生，2007年以来，非洲猪瘟在全球多个国家发生、扩散、流行，特别是俄罗斯及其周边地区。2018年，我国已经发现了ASF疫情，带来了巨大的直接和间接经济损失。疫苗是预防和治疗ASF的重要手段。目前的ASFV疫苗主要有灭活疫苗和减毒活疫苗。灭活疫苗是指，通过物理或化学手段将ASFV灭活而获得的疫苗。灭活使其失去感染能力，但保留其抗原性。迄今为止，采用多种传统方法制备的ASF灭活疫苗均不能对强毒攻击提供有效的免疫保护，包括病毒接种肺泡巨噬细胞以及感染脾组织后匀浆制备的灭活疫苗。减毒活疫苗是指用减毒的ASFV毒株的活病毒制备的疫苗。减毒的ASFV毒株包括：传代减毒毒株、天然减毒毒株和重组减毒毒株。传代减毒毒株是指ASFV在猪骨髓来源细胞、Vero和COS-1等细胞系传代的过程中致病力逐渐下降而获得的毒株。例如，利用分离株ASFV-G在Vero细胞中进行传代培养，病毒毒力逐渐衰减，在传至第110代时完全丧失。然而，家猪接种传代减毒的ASFV-G毒株后并未获得相应保护力，以抵抗亲本病毒的攻击。此外，有报道接种传代减毒的ASFV毒株，家猪呈现出肺炎、流产和死亡等副作用，以及呈现ASF慢性感染临床症状。天然减毒毒株是指天然存在的减毒毒株，例如ASFVOURT88/3或NH/P68毒株。然而，天然减毒毒株免疫动物后可造成诸多副作用，包括肺炎、流产、死亡等。例如，以NH/P68毒株免疫后，25％～47％的猪呈现慢性感染；以OURT88/3免疫后，可导致发热、关节肿胀等症状。重组减毒毒株是指采用分子生物学方法敲除病毒功能基因、病毒毒力基因或者免疫抑制基因获得的毒株。所述重组降低病毒毒力或增加机体对病毒的免疫应答，可以用于研制比传统弱毒疫苗安全性更好且效力更高的基因工程减毒活疫苗。已经报道了ASFV毒力基因和免疫抑制基因：TK(K196R)、9GL(B119L)、CD2v(EP402R)、DP148R、NL(DP71L)、UK(DP96R)和多基因家族360和505(MGF360/505)；以及免疫逃逸相关基因A238L、A179L、A224L、DP71L、MGF360/505、I329L、K205R、D96R、DP148R、A276R、D96R和EP153R等。然而，目前还没有提供针对ASFV的成功保护的减毒活疫苗。此外，在中国，只允许在少数指定的科研机构内使用ASFV活病毒进行研究工作。因此，仍然存在提供新型ASFV疫苗，如亚单位疫苗的需要。活载体疫苗是指将病原体的蛋白质编码基因克隆到活病毒载体，然后用于免疫动物，在动物体内表达所述蛋白质，从而诱导针对所述蛋白质的免疫应答。现有技术报道了一些活载体疫苗。例如，CN108504686A和CN108504687A分别提供了表达ASFV的EP153R和EP402R基因的重组腺病毒载体。然而，在现阶段不能进行活病毒实验的情况下，需要提供疫苗以引发针对尽可能多的抗原的免疫应答。
技术实现思路
为了满足上述需要，本专利技术提供一种免疫原性组合物，包含第一、第二和第三构建体，以及任选存在的药学上可接受的载剂，其中所述第一构建体包含非洲猪瘟病毒(ASFV)的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段，或包含ASFV的CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L基因或其片段，所述第二构建体包含ASFV的P12、P32、P54、P72基因或其片段，所述第三构建体包含ASFV的P220基因或其片段。在一些实施方案中，所述第一构建体包含以5’-3’方向排列的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段。在一些实施方案中，所述第二构建体包含以5’-3’方向排列的P12、P32、P54、P72基因或其片段。在一些实施方案中，所述第一、第二和第三构建体基于病毒载体。在一些实施方案中，所述病毒载体是腺病毒载体。在一些实施方案中，所述腺病毒载体是复制缺陷型腺病毒载体。在一些实施方案中，所述腺病毒载体是人5型复制缺陷型腺病毒载体。在一些实施方案中，所述基因来自ASFVGeorgia株。在一些实施方案中，所述A104R基因的序列如SEQIDNO:1或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述A151R基因的序列如SEQIDNO:2或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述B119L基因的序列如SEQIDNO:3或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述B602L基因的序列如SEQIDNO:4或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述CD2v基因的序列如SEQIDNO:5或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述K205R基因的序列如SEQIDNO:6或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P49基因的序列如SEQIDNO:7或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P12基因的序列如SEQIDNO:8或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P32基因的序列如SEQIDNO:9或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P54基因的序列如SEQIDNO:10或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P72基因的序列如SEQIDNO:11或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述P220基因的序列如SEQIDNO:12或其简并变体所示。在一些实施方案中，所述第一和第二构建体的中的基因融合表达。在一些实施方案中，所述第一构建体包含SEQIDNO:13或15的核苷酸序列或其简并变体。在一些实施方案中，所述第二构建体包含SEQIDNO:14的核苷酸序列或其简并变体。本专利技术还提供一种ASFV疫苗，包含本专利技术的免疫原性组合物。本专利技术还提供包含一或多个本专利技术的构建体的宿主细胞。本专利技术还涉及本专利技术的免疫原性组合物或本专利技术的第一、第二和/或第三构建体在制备用于治疗或预防ASFV感染的药物中的用途。本专利技术还提供包含本专利技术的第一、第二和第三构建体的免疫原性组合物，其用于治疗或预防ASFV感染。本专利技术还提供治疗和或预防ASFV感染的方法，包括给有需要的对象施用本专利技术的免疫原性组合物或一或多个本专利技术的构建体。本专利技术还提供分离的核酸分子，包含ASFV的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段，或包含ASFV的CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L基因或其片段，或包含ASFV的P12、P32、P54、P72基因或其片段。在一些实施方案中，所述基因或其片段按5’-3’方向排列为A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49，或按5’-3’方向排列为CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L，或按5’-3’方向排列为P12、P32、P54、P72。在一些实施方案中，本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫原性组合物，包含第一、第二和第三构建体，以及任选存在的药学可接受的载剂，其中所述第一构建体包含非洲猪瘟病毒(ASFV)的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段，或包含ASFV的CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L基因或其片段；所述第二构建体ASFV的P12、P32、P54、P72基因或其片段；且所述第三构建体包含ASFV的P220基因或其片段。

【技术特征摘要】
1.一种免疫原性组合物，包含第一、第二和第三构建体，以及任选存在的药学可接受的载剂，其中所述第一构建体包含非洲猪瘟病毒(ASFV)的A104R、A151R、B119L、B602L、CD2v、K205R、P49基因或其片段，或包含ASFV的CD2v、A104R、A151R、B119L、B602L基因或其片段；所述第二构建体ASFV的P12、P32、P54、P72基因或其片段；且所述第三构建体包含ASFV的P220基因或其片段。2.权利要求1的组合物，其中所述第一、第二和/或第三构建体基于病毒载体，优选腺病毒载体，更优选复制缺陷型腺病毒载体，进一步优选人5型复制缺陷型腺病毒载体。3.权利要求1或2的组合物，其中所述基因来自ASFVGeorgia株。4.权利要求1-3任一项的组合物，其中所述A104R基因的序列如SEQIDNO:1或其简并变体所示，所述A151R基因的序列如SEQIDNO:2或其简并变体所示，所述B119L基因的序列如SEQIDNO:3或其简并变体所示，所述B602L基因的序列如SEQIDNO:4或其简并变体所示，所述CD2v基因的序列如SEQIDNO:5或其简并变体所示，所述K205R基因的序列如SEQIDNO:6或其简并变体所示，所述P49基因的序列如SEQIDNO:7或其简并变体所示，所述P12基因的序列如SEQIDNO:8或其简并变体所示，所述P32基因的序列如SEQIDNO:9或其简并变体所示，所述P54基因的序列如SEQIDNO:10或其简并变体所示，所述P72基因的序列如SEQIDNO:11或其简并变体所示，或所述P220基因的序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：任红涛，孙永科，
申请(专利权)人：北京生科基因科技有限公司，西安必萨图生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11